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AST (GOT) opt
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Aspartato Aminotransferasa EC 2.6.1.1
IFCC
MANUAL
PARA SU USO
Para el análisis cuantitativo in vitro de aspartato
aminotransferasa (AST) en suero y plasma. Este producto
es adecuado para su utilización en Manual.
Cat. No.
AS 1202
20 x 2 ml
AS 1204
10 x 10 ml
AS 1267
5 x 20 ml
AS 2359
5 x 100 ml
1. Tampón/Sustrato
2. Enzima/Coenzima/
Ι-oxoglutarato
1 x 70 ml
20 x 2 ml
1. Tampón/Sustrato
2. Enzima/Coenzima/
Ι-oxoglutarato
1 x 105 ml
10 x 10 ml
1. Tampón/Sustrato
2. Enzima/Coenzima/
Ι-oxoglutarato
1 x 105 ml
5 x 20 ml
1. Tampón/Sustrato
2. Enzima/Coenzima/
Ι-oxoglutarato
5 x 100 ml
5 x 100 ml
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO
METODO UV
Este es un método estándar optimizado según las
concentraciones recomendadas por la IFCC.
SIGNIFICADO CLINICO(1,2,3,4)
Las aminotransferasas son un grupo de enzimas que
catalizan las inter conversiones de aminoácidos y
α-oxoácidos por medio de la transferencia de grupos amino.
La GOT (aspartato aminotransferasa o transaminasa de
oxaloacetato glutamato) se ha encontrado en el citoplasma y
mitocondrias de las células estudiadas. En caso de un ligero
daño del tejido como por ej. el hígado, la forma predominante
de la GOT en suero es la del citoplasma, con una cantidad
más pequeña proviniente de las mitocondrias. Un daño más
severo del tejido dará como resultado una mayor liberación de
enzima mitocondrial. Los niveles elevados de AST pueden
ser una señal de infarto de miocardio, enfermedad hepática,
distrofia muscular y daño de órganos.
Los músculos del corazón son los que muestran más
actividad de ésta enzima, sin embargo también se ha
encontrado en el cerebro, hígado, mucosa gástrica, tejido
adiposo y riñones humanos.
La IFCC recomienda actualmente (1980) procedimientos
estandarizados para los análisis de GOT incluyendo:1. optimización de las concentraciones de substrato.
2. Empleo de tampones Tris (en lugar de fosfato, el cual se
ha demostrado que inhibe la recombinación de la
apoenzima con el fosfato piridoxal).
3. Preincubación de suero y tampón combinado para
permitir que tengan lugar posibles reacciones con NADH.
4. Substrato de inicio (α-oxoglutarato)
5. Activación de fosfato piridoxal opcional.
Este es un método estándar optimizado de acuerdo a las
recomendaciones de la IFCC.
PRINCIPIO
El α-oxoglutarato reacciona con la L-aspartato en presencia
de GOT para formar L-glutamato mas oxaloacetato. La
reacción indicadora utiliza el oxaloacetato para la
determinación cinética del consumo de NADH.
Ι-oxoglutarato + L-aspartato
oxaloacetato + NADH + H+
AST
L-glutamato + oxaloacetato
MDH
(5)
EXTRACCION Y PREPARACION DE MUESTRAS
Suero:- Utilizar suero libre de hemólisis. El suero se deberá
separar del coagúlo durante la hora siguiente a su
extracción.
Plasma:- Se puede utilizar EDTA o heparina como
anticoagulante. El plasma se degerá separar de las
células durante la hora siguiente a su extracción.
Las muestras se deberán refrigerar si no se utilizan
inmediatamente:Las muestras que se almacenen durante más de 3
días se deberán congelar a -20°C.
L-malato + NAD+
Componentes
Concentraciones en la prueba
1. Tampón/Sustrato
Tampón Tris
L-aspartato
2. Enzima/Coenzima/Ι-oxoglutarato
Ι-oxoglutarato
MDH
LD
NADH
80 mmol/l, pH 7,5
240 mmol/l
12 mmol/l
≥ 420 U/l
≥ 600 U/l
0,18 mmol/l
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD
Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la
boca. Respetar las precauciones normales necesarias que
se requieren al manejar reactivos de laboratorio.
La solución 1 contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o
contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la
piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua
abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos
llamar inmediatamente a un médico.
La Azida Sódica reacciona con el cobre y el plomo de las
tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando
se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con
agua para evitar la formación de estas azidas explosivas.
Las superficies metálicas que hayan sido puestas en
contacto con la azida sódica deben ser lavadas con
hidróxido sódico al 10%.
Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están
disponibles si se desean.
Los reactivos deben ser utilizados solo para los
propósitos indicados por personal adecuado
cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas
de laboratorio.
MANUAL - AST (GOT) opt. - AS 1202
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ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
1. Tampón/Sustrato
Listo para su uso. Estables hasta la fecha de caducidad
cuando se conservan entre +2 y +8°C.
2. Enzima/Coenzima/Ι-oxoglutarato
Reconstituir un vial de Enzima/Coenzima/Ι-oxoglutarato
2 con el volumen adecuado de Tampón/Sustrato 1:
2 ml para el kit de 20 x 2 ml
(AS1202)
10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AS1204)
20 ml para el kit de 5 x 20 ml
(AS1267)
Es estable durante 14 días conservado entre +2 y +8°C
ó 24 horas entre +15 y +25°C
Cat. No. AS 2359 5 x 100 ml
Disolver el contenido de una botella de Enzima/
Coenzima/Ι-oxoglutarato 2 con un pequeño volumen de
Tampón/Sustrato 1 y luego transferir el contenido a la
botella 1, enjuagando varias veces la botella 2. Es
estable durante 14 días cuando se conserva entre +2 y
+8oC ó 24 horas entre +15 y +25oC.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Tampón/Sustrato
Enzima/Coenzima/Ι-oxoglutarato
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y
Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Medición:
340 nm (Hg 334 nm ó Hg 365 nm)
1 cm de espesor
25/30/37°C
Frente al aire
Pipetear en cubeta:
Macro
Micro
Muestra
Enzima/Coenzima/Ι-oxoglutarato 2
0,2 ml
2,0 ml
0,1 ml
1,0 ml
Mezclar, leer la absorbancia inicial al cabo de 1 min. Leer
de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min. Observar si la variación
de la absorbancia por minuto se sitúa entre
0,11 y 0,16 a 340/Hg 334 nm
0,06 y 0,08 a Hg 365 nm
para el cálculo usar sólo los valores obtenidos durante los 2
primeros minutos.
CALCULOS
Para calcular la actividad de la GOT utilizar las fórmulas
siguientes:
U/l = 1746 x −A 340 nm/min
U/l = 1780 x −A Hg 334 nm/min
U/l = 3235 x −A Hg 365 nm/min
CONTROL DE CALIDAD
Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y
Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles
distintos de controles al menos una vez al día. Los valores
obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado.
Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición
excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos:
1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara.
2. Comprobar que todo material está limpio.
3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento
bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los
resultados.
4. Comprobar la temperatura de reacción
5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus
componentes.
6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de
los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28
94422413.
(6,7)
ESPECIFICIDAD/INTERFERENCIA
La hemólisis bruta producirá falsos resultados elevados.
Se deberá tomar en consideración los efectos de varios
fármacos en la actividad de La GOT en los casos de
pacientes que estén recibiendo grandes dosis de fármacos.
Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes
niveles y se encontró que no interfieren:
Hemoglobina
Bilirrubina libre
Bilirrubina conjugada
Triglicéridos
®
Intralipid
250 mg/dl
25 mg/dl)
25 mg/dl)
1000 mg/dl)
200 mg/dl
Young et cols y Friedman et cols dan una lista de
sustancias y condiciones que se conoce que afectan a la
actividad in vivo de La GOT . La integridad de esta lista y la
exactitud de la información que en ella se suministra no
representa necesariamente la opinión de Randox
Laboratories, Ltd.
(8,9)
VALORES NORMALES EN SUERO
Hombre:
Mujer :
25°C
30°C
37°C
Hasta 18 U/l
Hasta 15 U/l
Hasta 25 U/l
Hasta 21 U/l
Hasta 37 U/l
Hasta 31 U/l
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio
rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica
de la población.
LINEALIDAD
Si la variación de absorbancia por minuto excede de:
0,16 a 340 nm/Hg 334nm
0,08 a Hg 365 nm
diluir 0,1 ml de muestra con 0,9 ml de NaCl al 0,9% y
repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 10.
RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY
Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912
Email: applications@randox.com Website: www.randox.com
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MANUAL - AST (GOT) opt. - AS 1202
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REFERENCIAS
1. Wroblewski F, La Due J.S: Ann Intern Med. 1956; 45:
801.
2. Wroblewski F, La Due J.S: Proc Soc Exp Biol Med
1956; 91: 569.
3. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al: Clin Chem 1977;
23: 887.
4. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al: J.Clin Chem Clin
Biochem 1980; 18: 521-534.
5. Tietz N W: Fundamentals of Clinical Chemistry ed 3.
Philadelphia, WB Saunders Co. 1987, pg 372.
6. Young D S, et al: Clin Chem 1975, 21; No5.
7. Friedman RB, et al: Clin Chem 1980, 26; No4.
8. Wallnofer H, Schmidt.E, Schmidt FW, eds: Synopsis
der Leberkrankheiten Stuttgart, Georg Thieme Verlag,
1974.
9. Thefeld W, et al: Dtsch Med Wschr 1974; 99: 343.
Revisado 02/02/04 wpt
RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY
Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912
Email: applications@randox.com Website: www.randox.com
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