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XIII Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2012 Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de Rosario Alelos polimórficos de -calpaína y calpastatina en bovinos Brahman y sus cruzas con Hereford del nordeste argentino Sandoval, G.L.; De Biasio, M.B.; Jara, L.; Jastrzebski, F.A. Cátedra de Bioquímica. Facultad de Ciencias Veterinarias, UNNE grandosan@gmail.com Seguridad alimentaria y palatabilidad son las propiedades preferidas por el consumidor de carnes. Las variaciones en la palatabilidad dependen de la terneza, el sabor y la jugosidad. La terneza (facilidad con la que una carne se puede cortar) es el indicador más sensible en el mercado y se puede determinar objetivamente con una cizalla (Warner-Bratzler), que mide la fuerza o resistencia de la carne a ser cortada. Subjetivamente se puede obtener una apreciación de la característica, evaluada por un panel de degustación, existiendo buena correlación entre ambos métodos. En los dos casos la evaluación es post mortem y, por lo tanto, no es útil como herramienta de selección de reproductores. La inconsistencia en la terneza es uno de los problemas más importantes que debe enfrentar la industria. El análisis de marcadores genéticos de terneza en muestras biológicas como sangre, semen o pelos, incluye la detección de variaciones polimórficas en los genes que codifican enzimas que tiernizan la carne post-mortem. 1,2,3 -Calpaína y calpastatina son las principales enzimas proteolíticas que participan en este proceso y en la resolución del rigor mortis. La detección de polimorfismos en los genes de dichas enzimas (análisis de marcadores genéticos de terneza) representa actualmente la mejor herramienta para realizar la selección de animales antemencionada, denominada método SAM (selección asistida por marcadores moleculares). Se han descripto polimorfismos en los correspondientes genes para ambas enzimas. Algunas de las variantes en -calpaína (CPN) causan cambios en su composición de aminoácidos que se han asociado con mayor eficiencia de la enzima en el proceso de tiernización. La calpastatina (CAST) es una enzima que regula negativamente la actividad de la CPN. La actividad aumentada de CAST fue 2 correlacionada con terneza reducida de la carne , aunque existen distintas combinaciones de variantes alélicas que resultan en diferentes grados de actividad enzimática de la proteína que se expresa. El objetivo del presente trabajo fue describir las frecuencias genotípicas para los polimorfismos que se detallan más abajo en las poblaciones de bovinos de dos establecimientos ganaderos del NEA, con biotipos productores de carne, Brahman y sus cruzas con Hereford; para ello hemos realizado muestreos (sangre venosa anticoagulada con EDTA, almacenada a -20ºC hasta su procesamiento) en 53 bovinos machos (Tabla 1). Se extrajo ADN genómico por digestión con CTAB (Bromuro de cetil trimetil amonio), valorando su calidad y cantidad por electroforesis en geles de agarosa 1% y buffer TBE 1X. Se realizaron amplificaciones de: XIII Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2012 Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de Rosario una porción del gen de -calpaína para analizar el polimorfismo 3 CAPN4751 o CAPN2 (Gen Bank AF248054). Se obtuvo un amplicón de 1800pb, que se sometió a digestión con la enzima de restricción Hha I, a 37ºC durante tres horas. 1,2 un fragmento del gen de CAST para analizar el polimorfismo GC (GenBank AF117813). Se obtuvo un amplicón de 624 pb, que se sometió a restricción con la enzima de restricción con Alu I a 37ºC durante tres horas. En ambos casos, los productos resultantes de la digestión se analizaron por transiluminación UV de geles de agarosa 2% en buffer TBE 1X y con Bromuro de Etidio. Analizando los resultados obtenidos en función del origen y de los datos recopilados referente a los cruzamientos de cada animal muestreado, se obtuvieron los siguientes datos que se muestran en la tabla. Tabla 1. Distribución de alelos polimórficos de CPN y CAST en ADN extraído de bovinos machos Brahman, sus cruzas con Hereford y Braford. CAPN (n)** CAST-S (n) *** B/B A/B Total A/A B/B A/B Total 2 2 1 1 2 7 1 8 2 1 4 7 1 12 2 14 8 1 5 14 1 4 5 2 0 3 5 2 3 8 11 22 10 5 12 27 3 30 18 23 7 25 Total n (%) 51 55 (5,88) (58,82) (35,29) (41,82) (12,73) (45,45) * 1) Corrientes, 2) Chaco. Alelos **CAPN y ***CAST-S: A/A = favorable a terneza; B/B = desfavorable para la misma característica y A/B = heterocigota. Origen * Raza/Cruza 100 % Brahman 7/8 Brahman 3/4 Brahman ½ Brahman Braford A/A Como se observa, la mayoría de los animales analizados, sobre todo los que tienen mayor proporción de sangre cebuina, poseen la variante polimórfica de tipo homocigota menos favorable de CPN para el proceso de tiernización pos-mortem. Para CAST, sin embargo, la mayoría de los animales analizados tenía la variante polimórfica que resulta en la enzima menos activa (“carnes tiernas”), en similares proporciones de homocigosis y heterocigosis. BIBLIOGRAFÍA 1. Juszczuk-Kubiak et al. A nobel RFLP/Alu I polyporphism of the bovine calpastatin (CAST) gene and its association with selected traits of beef. Animal Science Paper and Reports 22,2: 195-204, 2004. 2. Schenkel, F.S.; Millar, S.P.; Jiang, Z.; Mandell, I.B.; Ye, X.; Li, H. and Wilton, J.W. “Association of a single nucleotide polymorphism in the calpastatin gene with carcass and meat quality traits of beef cattle”. J. Anim.Sci. 84: 291-299, 2006. 3. Zhang, H.M.; DeNise, S.K. and R.L. Ax. Rapid communication: A novel DNA polymorphism of the bovin calpain gene detected by PCR-RFLP analysis. Journal of Animal Science 74,6: 1441, 1996.