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Virus de la Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR) ® 12.IBR.K.5/50 INTRODUCCIÓN / INTRODUCTION El Herpesvirus Bovino tipo 1 (BHV 1) es responsable de 2 diferentes patologías del ganado: La Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR) y la Vulvovaginitis / Balonopostitis Pustular Infecciosa (IPV / IPB). IBR es una infección respiratoria severa, caracterizada por traqueitis, rinitis y fiebre. Se transmite horizontalmente por contacto con secreciones respiratorias, oculares o reproductivas. IBR actúa, además, como inmunosupresor, predisponiendo a los individuos a infecciones bacterianas secundarias. IPV / IPB aparecen en rutas sexuales. El herpesvirus bovino 1 pertenece a la familia Herpesviridae, subfamilia Alphaherpesvirinae. El ganado vacuno es hospedador natural de este virus. Las medidas de control incluyen vacunación y erradicación mediante screening serológico para detectar los animales positivos. La mayoría de las vacunas en uso contienen virus atenuado, con una deleción de su genoma; no contienen la secuencia que codifica la glicoproteína E (gE). Ya que tanto las cepas vacunales como las de campo contienen otra glicoproteína (gC), el DNA de gC está presente en ganado infectado y vacunado, pero ausente en animales sanos o no vacunados. El INgene IBR está basado en estas premisas. El test gC utiliza una pareja de oligonucleótidos específicos para la secuencia codificante de la glicoproteína gC; el test gE utiliza una pareja de oligonucleótidos específicos para la secuencia codificante de la glicoproteína gE. INgene IBR es capaz de diferenciar animales infectados de vacunados. The Bovine Herpesvirus 1 (BHV1) is responsible of two different cattle pathologies: Infectious Bovine Rinotracheitis (IBR) and Infectious Pustular Vulvovaginitis / Balanopostitis Herpesvirus (IPV / IPB). IBR is a severe respiratory infection in cattle characterised by tracheitis, rhinitis and fever. It is transmitted horizontally by contact with respiratory, ocular and reproductive secretions. IBR also acts as immunosuppressive, predisposing individuals to secondary bacterial infections, while IPV / IPB appears by sexual routes. Bovine herpesvirus 1, is a member of the family of Herpesviridae, subfamily Alphaherpesvirinae. The catle is the natural host of BHV-1. Control measures involve vaccination and eradication by the use of serological testing in order to cull the seropositive animals. Most of vaccines in use contain attenuated virus with a deletion in their genome; they don't contain the coding sequence for the glicoprotein E (gE). Another glicoprotein (gC) is present in both infected and vaccinated cattle, but absent in non-vaccinated and non-infected cattle. The INgene IBR gE and gC system is based on these premises. The gC test uses a couple of specific primers for gC glicoprotein coding sequence; the gE test uses a couple of specific primers for gE coding sequence. INgene IBR is able to differentiate infected from vaccine virus. FT: 12.IBR.K.5 BASE TÉCNICA / TECHNICAL BASES En el INgene IBR se combinan diferentes técnicas de biología molecular e inmunología a fin de garantizar la fiabilidad del test y dentro de la complejidad de este tipo de ensayos, su facilidad de realización: Técnicas de amplificación específica, que garantizan los máximos grados de sensibilidad y especificidad y técnicas de clonaje y diseño de plásmidos que permiten la introducción de controles exhaustivos en todas y cada una de las fases del test. In INgene IBR different techniques of molecular biology and immunology are combined in order to guarantee the reliability of the test and, as far as the complexity of this type of assay, allows its ease of performance: Specific amplification techniques, which guarantee the maximum degree of sensitivity and specificity and cloning techniques and design of plasmids, which allow introducing exhaustive controls into each phase of the test. APLICACIONES / APPLICATIONS El kit INgene IBR permite detectar BHV-1 a partir de secreciones nasales, fluido orofaríngeo, anginas, torundas nasales (rinitis) y torundas genitales (vulvovaginitis o balanopostitis), siendo capaz de distinguir entre animales infectados con virus salvaje y animales vacunados, mediante tipaje diferencial gE / gC. El amplificado puede ser tipificado por secuenciación automática. I N g e n e IBR kit allows to detect BHV-1 from nasal secretions, oropharyngeal fluid, tonsils, nasal swabs (rhinitis) and genital swabs (vulvovaginitis or balanoposthitis), being able to distinguish between infected animals (wild type virus) and vaccinated ones, by means of a gE / gC differential detection. Amplified products can be typed by automatic sequencing. RESULTADOS / RESULTS I N g e n e IBR ha sido testado con cepas vacunales (V) e infectivas (Wt). I N g e n e IBR kit has been tested with vaccines (V) and wild types strains (Wt). gC 390pb gE 281pb V WT Resultado de cepas salvajes de IBR y controles de vacunas clonados (se requieren dos ensayos). Result of IBR wild type samples and vaccines cloned controls (two assays are required). Virus de la Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR) ® 12.IBR.K.5/50 COMPOSICIÓN / COMPOSITION E l k i t I N g e n e IBR contiene los reactivos necesarios para detección de DNA en 50 reacciones. Además incluye dos controles de amplificación positivos. Después del aislamiento únicamente es necesario mezclar los reactivos A y B, añadir el molde y ejecutar el programa. AMPLIFICACIÓN / AMPLIFICATION I N g e n e IBR kit contains all necessary reagents for DNA detection in 50 reactions. The kit includes two cloned positive amplification controls. After isolation, it is only necessary to mix the pre-mixtures A y B, add the template and run the programme. Mezcla A1 (Primers específicos de IBRgC) / Mixture A1 (specific primers for IBRgC) Mezcla A2 (Primers específicos de IBRgE) / Mixture A2 (specific primers for IBRgE) Mezcla B (mezcla de enzimas) / Mixture B (enzyme mixture) Control positivo 1 (Control de amplificación de gC) / Positive control 1 (Amplification control gC) Control positive 2 (Control de amplificación de gE) / Positive control 2 (Amplification control gE) Mantener a 4ºC / Keep at 4ºC Caducidad / Self life 12 meses / 12 months 4ºC PRODUCTO FABRICADO EN INGENASA / PRODUCT MANUFACTURED BY INGENASA 9191.INGE 9175.ING2 FT: 12.IBR.K.5 IT-73840 IT-73780 Inmunología y Genética Aplicada, SA C/ Hermanos García Noblejas 39 28037. MADRID Tel.: + 34- 91 3680501 Fax: +34- 91 4087598 www.ingenasa.es Last revision: 270514