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UPP Universidad Privada de Pucallpa Resolución 093-05-CONAFU Vicerrectorado de Investigación ARTICULO ORIGINAL BIORREMEDIACION MEDIANTE LA ASOCIACIÓN ENTRE MICROORGANISMOS Y PLANTAS BIOREMEDIATION THROUGH ASSOCIATION BETWEEN MICROBES AND PLANTS Recibido: 04/07/2016 Revisado: 02/08/2016 Aprobado: 26/08/2016 Yolanda Cárdenas Huaringa1, Violeta Quispe Surco2, Sergio Eduardo Contreras Liza3 RESUMEN ABSTRACT Objetivos: Revisar y analizar la acción de microorganismos endófitos y la colonización de las plantas por rizobacterias y su papel en la bio-remediación de ecosistemas degradados. Métodos: Se han utilizado técnicas de búsqueda bibliográfica en revistas científicas recientemente publicadas sobre bio-remediacion del ecosistema y se ha sistematizado la información a través de motores de búsqueda por internet, estableciendo criterios adecuados para poder estructurarla como una revisión bibliográfica. Resultados: La bio-remediación es una técnica que utiliza el metabolismo microbiano para eliminar los contaminantes del ecosistema. Diversas técnicas y estrategias de bioremediación pueden ser utilizadas para eliminar los desechos peligrosos de la biosfera. Durante la última década, esta técnica específica ha surgido como una herramienta potencial para la biodegradación de contaminantes metálicos. Esta situación ha cambiado recientemente ya que ha surgido la bio-remediación para otros contaminantes, como los compuestos orgánicos volátiles, aceites crudos, entre otros químicos. Los mecanismos para la bio-remediación dependen de la movilidad, solubilidad, degradación y biodisponibilidad de los contaminantes. La biodegradación de contaminaciones se asocia con el crecimiento y el metabolismo microbiano, es decir con los factores que tienen un impacto en su proceso de desarrollo; estos factores tienen una gran influencia en la degradación. Conclusiones: El reconocimiento de los procesos microbianos naturales es indispensable para la comprensión de mecanismos efectivos de bio-remediación. En esta revisión de literatura, hemos hecho hincapié en la acción de microorganismos endófitos y la colonización de las plantas por rizobacterias y su papel en la bio-remediación mejorada por la interacción entre bacterias y plantas y más recientemente, con microorganismos genéticamente modificados. Palabras clave: Mitigación, degradación del ecosistema, endófitos, rizobacterias. Objective: To review and analyze the action of microorganisms and endophyte colonization of plants by rhizobacteria and its role in the bio-remediation of degraded ecosystems. Methods: We used bibliographic techniques on recently published literature search of bio-remediation of the ecosystem and has been systematized information through internet search engines of scientific journals, establishing appropriate criteria to structure it as a literature review. Results: Bioremediation is a technique that uses microbial metabolism to remove pollutants ecosystem. Various techniques and bioremediation strategies may be used to remove hazardous wastes from the biosphere. During the last decade, this specific technique has emerged as a potential tool for the biodegradation of metal contaminants. This situation has changed recently has emerged as bioremediation for other pollutants such as volatile organic compounds, crude oils, among other chemicals. The mechanisms for bioremediation dependents on mobility, solubility, bioavailability and degradation of pollutants. Biodegradation of contamination is associated with growth and microbial metabolism, i.e. the factors that have an impact on their development process; these factors have a major influence on degradation. Conclusions: The recognition of natural microbial processes is essential for understanding effective mechanisms of bioremediation. In this literature review, we have emphasized the action of microorganisms and endophyte colonization of plants by rhizobacteria and its role for the plant-bacteria interactions and enhanced recently with genetically modified organisms bioremediation. Keywords: Mitigation, ecosystem degradation, endophytes, rhizobacteria. INTRODUCCIÓN La rápida expansión de la actividad minera, la disposición de residuos industriales, la aplicación de productos químicos en la agricultura y el efecto de las aguas 1 Universidad Nacional del Centro del Perú, Satipo-Perú. Email:octubre028@hotmail.com Universidad Nacional San Antonio Abad del Cusco-UNSAAC. Email: violetaqs@yahoo.es 3 Universidad Nacional José Faustino Sánchez Carrión, Huacho-Perú. Email: scontreras@unjfsc.edu.pe 2 Cultura Viva Amazónica - Revista de Investigación Científica - Pucallpa, Perú. 1(2)2016 21 UPP Universidad Privada de Pucallpa Resolución 093-05-CONAFU Vicerrectorado de Investigación de regadío residuales pueden resultar en contaminación por metales pesados de los recursos hídricos y del suelo. Los elementos tóxicos, principalmente metales pesados, se encuentran generalmente en bajas concentraciones en el medio ambiente, aunque como resultado de dichas actividades antropogénicas sus niveles se han incrementado. Se considera que existe contaminación del suelo cuando la composición del mismo se desvía de su concentración normal. También se define la contaminación del medio ambiente como la presencia de algún constituyente originado por la actividad humana en una concentración tal que afecta negativamente su funcionamiento y/o a los organismos vivos presentes en él. La remediación de la contaminación con metales pesados de los recursos suelo y agua son útiles para la remediación de sitios contaminados con metales pesado disponibles e incluyen la excavación (eliminación física de los materiales peligrosos) y la fitorremediación (acumulación de metales pesados por las plantas) (Liu et al., 2015). Algunas aplicaciones biotecnológicas como: bioestimulación de las poblaciones microbianas nativas, bioacumulación, bio-absorción, rizo-remediación (interacción planta-microbio) y la fito-remediación, pueden ofrecer alternativas altamente específicas que se utilizan en gran escala (Sharma, 2012). La fito-remediación es una estrategia barata, energéticamente eficiente y la más segura en relación a los métodos convencionales, para acumular metales pesados del suelo y para mejorar la calidad del medio ambiente y la salud humana. En esta revisión de literatura se presenta una visión general del papel potencial de los microorganismos asociados a las raíces en la bio-remediación de suelos contaminados con metales pesados y proponemos una reflexión sobre cómo los microrganismos podrían ser utilizados para restaurar ecosistemas degradados. Consecuencias de la contaminación química y biorremediación Los metales pesados en el suelo suponen un riesgo por: su lixiviación hacia aguas superficiales y subterráneas, absorción por las plantas y finalmente, su paso a la cadena trófica. Cuando se dan niveles muy altos de biodisponibilidad, tanto los elementos esenciales (Cu, Zn, Mn, Fe, Ni, Mo) como los no esenciales (Cd, Pb, Hg, Cr) pueden ser tóxicos. La amenaza que suponen para la salud humana y animal se agrava por su larga persistencia en el suelo (Carpena y Bernal, 2007). Los endófitos se definen como microorganismos (esencialmente hongos y bacterias) que colonizan los tejidos internos de las plantas sin causar ningún efecto negativo inmediato. El término endófito fue introducido en 1886 por De Bary para los microorganismos (hongos, levaduras, y bacterias) que colonizan los tejidos internos de la planta (Stępniewska & Kuźniar, 2013). La bioremediación es un enfoque que cumple criterios para descontaminar el medio ambiente, mediante el cual la acción de las plantas y los microorganismos 22 asociados específicamente con ellos, se ha optimizado para secuestrar, degradar, transformar, asimilar, metabolizar o detoxificar contaminantes en suelos, sedimentos o aguas (Adams et al., 2000). La asociación planta-endofito proporciona una excelente puerta de entrada hacia la restauración de la contaminación en los ecosistemas degradados. Las interacciones entre ambos pueden ser manipuladas mediante la introducción de genes catabólico /metabólicos en la planta huésped o en el genoma de las bacterias endofíticas. Por su parte, la alteración genética de las plantas mejoradas por microorganismos, puede incrementar el catabolismo en la propia maquinaria enzimática de la planta o lograr una mayor absorción y acumulación de contaminantes para su posterior desintoxicación por endófitos complementarios. El potencial de los organismos manipulados para degradar o acumular contaminantes es mucho más amplio que en sus parientes silvestres (Amna et al., 2015). Los efectos negativos de metales pesados en las actividades microbianas del suelo han sido reportados recientemente. Por ejemplo, la alta concentración de Cadmio (40 mg Cd/kg de suelo) inhibió la tasa de crecimiento microbiano, la fosfatasa ácida del suelo, la fosfatasa alcalina y a la ureasa (Renella et al., 2006). Una mayor concentración de Cu (150 a 450 mg / kg de suelo) inhibió significativamente las deshidrogenasas del suelo, ureasa y catalasa (Wyszkowska et al., 2009). Los metales pesados causan disminución significativa del crecimiento de la planta y el contenido de proteína a altas concentraciones. Por ejemplo, el cadmio (13-26 mg.kg-1 de suelo) y mercurio (303 a 608 mg.kg-1 de suelo) fueron los metales pesados más tóxicos, con inhibición del peso seco de raíces y brotes del 13,8% al 70,5%, disminución del rendimiento de semilla en 40% y reducción del contenido de nitrógeno en el brote y raíz entre 68,6% a 79,4% (Ghani, 2010). Efecto benéfico de los endófitos y rizobacterias Para una fito-remediación exitosa, la planta debe ser capaz de crecer rápidamente, llegar a una alta biomasa y absorber grandes concentraciones de metales en los suelos contaminados a través de las raíces (Liu et al, 2011). Para su crecimiento normal, las plantas necesitan una nutrición adecuada, agua, micro y macronutrientes tales como nitrógeno (N), fósforo (P) y potasio (K) y adecuadas características del suelo (textura, pH, salinidad, humedad. Las plantas también requieren ciertos metales pesados para su crecimiento y desarrollo, pero excesivas cantidades de estos metales pueden llegar a ser tóxicos (Chibuike & Obiora, 2014). Las concentraciones de los metales en el suelo probablemente inhiben el crecimiento y desarrollo de las plantas y por lo tanto pueden reducir la eficiencia de la fitoremediación (Ali et al., 2014). Por ejemplo, Agnihotri et al. (2014) observaron que el cobalto (Co) en concentraciones de 50 y 100 mM, tuvo un efecto tóxico sobre el porcentaje de germinación, el crecimiento temprano de las plántulas, área foliar, radicular el desarrollo y la composición de pigmentos Cultura Viva Amazónica - Revista de Investigación Científica - Pucallpa, Perú. 1(2)2016 UPP Universidad Privada de Pucallpa Resolución 093-05-CONAFU Vicerrectorado de Investigación clorofila y carotenoides) del frijol mungo (Vigna radiata) en comparación con el control. Las deficiencias de nutrientes también afectan negativamente el crecimiento y desarrollo de la mayoría de las plantas hiperacumuladoras (Dary et al., 2010), inhibiendo su actividad fito-extractora. Los microorganismos y las plantas asociadas estimulan el crecimiento de las raíces, la absorción de nutrientes y reducen las enfermedades transmitidas por el suelo a través de diversos mecanismos, que incluyen: producción de fitohormonas (Egamberdieva et al., 2014), 1aminocyclopropane-1-carboxilato de la enzima deaminasa (ACC) (Shahzad et al., 2013), osmo-protección (Berg et al., 2013), producción de sideróforos y ácidos orgánicos (Ma et al., 2009), solubilización del fósforo (Erkovan et al., 2010), y la bio-absorción de metales pesados (Chen et al., 2014). También mejoran la resistencia de las plantas a estreses ambientales adversos como la sequía, salinidad, metales pesados y deficiencia de nutrientes (Egamberdieva et al., 2015). De acuerdo a El-Bestawy et al., (2013), siete especies bacterianas pertenecientes a 4 géneros (Enterobacter, Pseudomonas, Bacillus, Providencia) se encontraron con resistencia a la atrazina y con notable estimulación en su crecimiento. Por lo tanto, de manera eficiente se pueden utilizar para la degradación de la atrazina en suelos contaminados o en aguas residuales. |Las bacterias, en particular las actinobacterias asociadas a Salix caprea que acumulan metales pesados, tienen potencial para aumentar la absorción de metales pesados como cadmio y zinc y pueden ser estimados por experimentos de movilización aplicables en la fito-remediación. El aislado de la rizósfera Burkholderia sp. incrementó la captación de metales reducidos en las raíces, mientras que una Actinobacteria endófita presentó mayor acumulación de metales en las hojas, aunque el crecimiento de las plantas no fue promovido (Kuffner et al. 2010). Se ha reportado que en la rizósfera de frijol contaminada con querosene, se encuentran numerosas poblaciones de bacterias fijadoras de N atmosférico y bacterias fijadoras de N atmosférico hidrocarbonoclastas, que actúan como microorganismos bio-degradadores (Hernández, Ferrera-Cerrato y Rodríguez, 2003). Los endófitos bacterianos podrían funcionar con mayor eficacia que las bacterias incorporadas al suelo porque participan en un proceso de conocido como bioaumentación (Newman y Reynol 2005). Un gran número de cepas bacterianas aisladas de la vid se reportaron resistentes al plomo, mercurio, níquel, zinc y manganeso (Altalhi, 2009). En la figura 1 podemos apreciar un esquema de cómo ocurre la descontaminación de iones metálicos en un proceso natural de fito-remediación. Es conveniente señalar que este proceso se ha estudiado en diversas especies de bacterias, actinomicetos y hongos del suelo que suelen estar en interacción con las plantas con capacidad de fito-remediación. Figura 1 Esquema general de la descontaminación de iones metálicos en un proceso natural de fitorremediación (Singh et al., 2003). Cultura Viva Amazónica - Revista de Investigación Científica - Pucallpa, Perú. 1(2)2016 23 UPP Universidad Privada de Pucallpa Resolución 093-05-CONAFU Vicerrectorado de Investigación Asociación de las raíces de las plantas y los microorganismos del suelo La rizosfera es colonizada más intensamente por los microorganismos que las otras regiones del suelo debido a su rica fuente de nutrientes (Egamberdieva, 2005, 2012;. Prashar et al, 2014); estos microbios puede ser beneficiosos, neutrales o patógenos y compiten por los nutrientes y nichos bajo condiciones muy variables (Berg et al, 2010). Tabla 1 Ejemplos de fito-remediación asistida por endofitos para diferentes contaminantes Planta (especie) Salix alba Sedum alfredii Brassica juncea Festuca arundinacea Brassica juncea Salix alba Ricinus communis Brassica napus Orychophragmus violaceus Lycopersicon esculentum Populus trichocarpa Lolium multiflorum L. multiflorum P. trichocarpa Pisum sativum P. trichocarpa P. trichocarpa P. sativum Triticum spp. Endofito Contaminante Burkholderia sp. HU001, Pseudomonas sp. HU002 Sphingomonas SaMR12 Rhizobium leguminasarum Neotyphodium coenophialum Cd Enterobacter aerogenes Pseudomonas putida PD1 Cd Pseudomonas sp. M6, Pseudomonas jessenii M15 Pseudomonas fluorescens G10, Microbacterium sp. G16 Cd Zn Zn Cd Ni y Cr Cd Ni, Cu y Zn Pb and Cd Flavobacterium sp. Zn Elymus dauricus Methylobacterium oryzae strain CBMB20 Enterobacter sp. strain PDN3 Pseudomonas sp. strains ITRI53,MixRI75 Enterobacter ludwigii strains Pseudomonas putida W619-TCE Pseudomonas putida Burkholderia cepacia VM1468 Natural endophytes Pseudomonas putida VM1450 Herbaspirillum sp. K1 Pseudomonas aeruginosa R75,P. savastanoi CB35 P. trichocarpa P. sativum Methylobacterium populi Pseudomonas sp. Cd TCE Diesel Diesel TCE Naphthaleno BTEX and TCE BTEX 2,4-D PCBs and TCP Chlorobenzoic acids TNT, RDX and HMX 2,4-D Fuente: Modificado de: Amna et al. (2015) Las bacterias benéficas en la rizosfera son de dos tipos generales: aquellas que forman una relación simbiótica con la planta y las que son de vida libre en el suelo y raíz (Lugtenberg y Kamilova, 2009). Las rizobacterias promotoras del crecimiento de plantas (PGPR) juegan un papel importante en la producción agrícola debido a que: (1) estimulan el crecimiento de las raíces (Egamberdiyeva y Höflich, 2003), (2) hacen que los nutrientes del suelo estén disponibles para las raíces de las plantas (Ipek et al., 2014), (3) fijan el nitrógeno del aire y mejoran la fertilidad del suelo (Rejili et al., 2012), (4) suprimen en el suelo los patógenos y protegen a las plantas 24 contra diversas enfermedades (Egamberdieva et al., 2015), (5) mejoran la tolerancia de las plantas a diversos estreses ambientales como la sequía, salinidad, temperaturas altas y metales pesados (Berg et al., 2013). Los microorganismos son capaces de sobrevivir el frío extremo y al calor del desierto, a condiciones de sainidadl debido a su posibles actividades enzimáticas, lo que les permite convertir los compuestos peligrosos en formas inofensivas (Ali et al, 2013;.. Singh et al, 2014). Algunos microorganismos han desarrollado diferentes mecanismos de resistencia para evitar la toxicidad de los Cultura Viva Amazónica - Revista de Investigación Científica - Pucallpa, Perú. 1(2)2016 UPP Universidad Privada de Pucallpa Resolución 093-05-CONAFU Vicerrectorado de Investigación metales y pueden estar adaptados a vivir en la presencia de contaminantes en el suelo (Kuffner et al., 2010). Las bacterias resistentes al níquel se han encontrado en la rizósfera de las especies hiperacumuladoras Thlaspi goesingense (Idris et al., 2004) y Alyssum lusitanicum subsp. serpyllifolium. (BecerraCastro et al., 2009). Entre las especies bacterianas, Arthrobacter spp. y Streptomyces spp. fueron las principales que podrían tolerar hasta 10 mM de Ni en ensayos de placa petri. Phyllobacterium myrsinacearum cepa RC6b se aisló de la rizosfera de Sedum plumbizincicola desarrollado en Pb y Zn, mostraron resistencia a 350 mg.L-1 Cd, 1,000 mg.L-1 Zn, y 1 200 mg. L-1 Pb (Ma et al., 2013). Tabla 2 Endofitos genéticamente modificados para mejorar la Fito-remediación con diferentes especies vegetales. Endofito Especie Vegetal Transgenes Burkholderia cepacia, Lupinus luteus, nre Ni Herbaspirillum seropedicae Contaminantes Lolium perenne Methylobacterium sp. BJ001 Populus tremula pNAH7 TNT, RDX,HMX Pseudomonas sp. GF3 Triticum aestivum Unknown phenanthrene Phenanthreno degradation Burkholderia vietnamiensis BU61 Salix alba MMO TCE Pseudomonas putida W619-TCE P. tremula ncc-enre Ni y TCE Pseudomonas putida W619-TCE Populus deltoides tomA4 TCE Burkholderia cepacia G4 L. luteus nre Tolueno Extraído de: Amna et al(2015). TCE= tricloroetileno. Wu et al. (2006) estudiaron las bacterias del suelo que eran resistentes a los metales (Zn, Cu y Pb) y encontraron que especies P-solubilizantes (Bacillus megaterium HKP-1) y K-solubilizantes (Bacillus mucilaginosus HKK-1) tenían una alta resistencia a la toxicidad de metales pesados (Zn, Cu y Pb: 250, 100, y 300 mg.L-1, respectivamente) debido a la formación de endosporas, que son capaces de soportar condiciones extremas. De acuerdo a Naik et al. (2012), Pseudomonas aeruginosa cepa WI-1 podía tolerar hasta 0,6 mM de nitrato de plomo. Según Guo et al. (2015) aislados de la bacteria fosfato-solubilizante Burkholderia metalliresistens. cepa D414T degradaba metales pesados (Pb, Cd, Cu y Zn) en suelos de arroz de China. La cepa fue capaz de tolerar Cd (2000 mg.L-1), Pb (800 mg.L-1, Cu (150 mg .L-1), y Zn (2,500 mg.L-1). En otro estudio, se encontró que P. aeruginosa era altamente resistente a Zn, que tiene una mínima concentración inhibitoria que varía desde 1000 hasta 1500 mg. kg P. aeruginosa (Islam et al., 2014). La inoculación de Cultura Viva Amazónica - Revista de Investigación Científica - Pucallpa, Perú. 1(2)2016 25 UPP Universidad Privada de Pucallpa Resolución 093-05-CONAFU Vicerrectorado de Investigación trigo con Zn tolerantes a P. aeruginosa mejoró la biomasa vegetal y la absorción de N y P, aumentó la clorofila de la hoja y la proteína soluble total en las plantas que crecen en suelos contaminados que contienen 1000 mg.kg de la hoja de Zn (Islam et al., 2014). Los microorganismos asociados a la raíz también podrían mejorar las actividades química y biológicas de los suelos contaminados con metales pesados. Por ejemplo, la inoculación de Brassica juncea con Staphylococcus arlettae resiste una mayor tensión de las deshidrogenasas del suelo, como las fosfatasas, el carbono orgánico total, y el fósforo disponible en arsénico-enriquecido (5, 10, y 15 mg.kg-1) en dicho suelo (Srivastava et al., 2013). Los simbiosis leguminosa-rizobio también se ha reportado como uno de los enfoques mas importantes para la remediación de metales pesados (Teng et al., 2015). Sin embargo, su rendimiento se ve obstaculizado por la simbiótica en los metales pesados, la reducción de la colonización rizobial en la actividad de la raíz y de la nitrogenasa (Chaudhary et al.,2004). De acuerdo con estudios previos, una inhibición de la fijación de nitrógeno se ha observado para los guisantes (Pisum sativum) cultivados en un suelo contaminado con Zn (366 mg.kg Zn1) (Obbard y Jones, 2001). Tabla 3 Especies vegetales genéticamente modificadas para aumentar su capacidad de Fito remediación. Especies Contaminantes Oryza sativa Atrazine, metolachlor, norflurazon Brassica juncea Atrazine, metolachlor, phenanthrene Nicotiana tabacum Alachlor Arabidopsis thaliana Atrazine N. tabacum Pentachlorophenol N. tabacum Trinitroglycerin and TNT Arabidopsis thaliana RDX N. tabacum TCE,ethylenedibromide Populus tremula VOCs A. thaliana Trichlorophenol N. tabacum Aromatic hydrocarbons A. thaliana As Liriodendron Hg tulipifera Populus deltoides Hg A. thaliana Methyl mercury Cottonwoods Phenylmercuric acetate Spartina alterniflora Mercuric chloride A. thaliana Se Nicotiana glauca d, Pb, Cu and B A. thaliana Pb and Cd P. tremula TNT Phenol N. tabaccum O. sativa Diphenyl ether, oxyflufen Transgenes CYP1A1, CYP2B6 and CYP2C19 GST GST I atzA Mn peroxidase PETN xplB and xplA CYP2E1 CYP2E1 LAC1 DbfB and DhaA ArsC and γ-ECS merA merA merA y merB merA y merB merA y merB Selenocysteine lyase Phytochelatin synthase YCF1 pnrA tpx1 and tpx2 Protox Fuente: Modificado de: Amna et al.(2015). 26 Cultura Viva Amazónica - Revista de Investigación Científica - Pucallpa, Perú. 1(2)2016 UPP Universidad Privada de Pucallpa Resolución 093-05-CONAFU Vicerrectorado de Investigación Por ejemplo, en el caso de los metales pesados, ha sido exitosa la expresión de genes correspondientes a quelantes metálicos, como las fitoquelatinas (PC), metalotioneínas, y el GSH, fomentando la captura y la compartimentación de metales pesados en los tejidos del huésped (Amna et al, 2015). Una gran cantidad de investigaciones se han llevado a cabo en la reciente década para la modificación genética de las plantas y así mejorar su eficiencia en la fito-remediación (Tablas 2 y 3). Conclusiones El desarrollo de la simbiosis entre plantas y microorganismos útiles con tolerancia a metales pesados es una necesidad absoluta para permitir el crecimiento de diversos organismos en un medio ambiente degradado. Los endófitos, por un lado, residen dentro de las plantas y por lo tanto pueden reducir la fitotoxicidad así como aumentar la metabolización de las plantas para una serie de contaminantes. Por otra parte, ambos socios pueden ser genéticamente modificados para producir nuevos miembros de interacciones planta-endofitos que alberguen transgenes, los cuales les permitirían reducir contaminantes orgánicos y dado el caso, con resistencia a metales pesados, para desintoxicación de una gama más amplia de contaminantes, incluyendo los xenobióticos. La bioingeniería de especies de plantas que contienen degradación apropiada y genes metabólicos de fuentes eucariotas o procariotas tiene un gran potencial para la fitoremediación mejorada que ocurre en suelos y aguas contaminadas con contaminantes orgánicos o metales pesados. Referencias bibliográficas Altalhi, A.D. (2009). Plasmids profiles, antibiotic and heavy metal resistance incidence of endophytic bacteria isolated from grapevine (Vitis vinifera L.). Afr J Biotechnol 8:5873–5882. Amna, I., Asma, I., Anwar ul Haq, M., Khan Q.M., & Afzal, M. (2015). Phytoremediation: recent advances in plant-endophytic synergistic interactions. Plant Soil: DOI 10.1007/s11104-015-2606-2. Carpena R.O., Bernal M.P. (2007). Claves de la fitorremediación: fitotecnologías para la recuperación de suelos. Ecosistemas 16 (2): 1-3. El-Bestawy, E; Sabir, J.A.; Mansy, H.; Zabermawi, N. (2013). Isolation, identification and acclimatization of Atrazine-resistant soil bacteria. 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