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INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIO EN PLACAS LISTO
PARA SU USO
PA-254010.07
Rev.: April 2013
BD Desoxycholate Agar
USO PREVISTO
BD Desoxycholate Agar es un medio de diferenciación débilmente selectivo para el
aislamiento de bacilos entéricos gram negativos (principalmente Enterobacteriaceae) a partir
de muestras clínicas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico
Desoxycholate Agar fue presentado por Leifson para una mayor obtención de patógenos
intestinales en las muestras que contienen flora entérica1. Es principalmente inhibidor sólo para
las bacterias gram-positivas, aunque originalmente se ha utilizado para la detección de
Salmonella y Shigella en las muestras fecales humanas. En la actualidad este medio se utiliza
como alternativa al agar MacConkey como medio universal para el aislamiento diferencial de
todos los bacilos entéricos2,3.
Las dos peptonas proporcionan nitrógeno y carbono para las necesidades generales del
crecimiento. La lactosa es el carbohidrato fermentable. El cloruro de sodio y el fosfato dipotásico
conservan el equilibrio osmótico del medio. El desoxicolato y los citratos de sodio inhiben las
bacterias gram-positivas. El rojo neutro es un indicador del pH. La diferenciación se basa en la
fermentación de la lactosa. Las bacterias que fermentan la lactosa producen ácido y, en
presencia de rojo neutro, forman colonias rojas. Las bacterias que no fermentan la lactosa
forman colonias incoloras. La mayoría de bacterias intestinales normales como la E. coli
fermentan la lactosa (colonias rojas) en tanto que las especies de Salmonella y Shigella no lo
hacen (colonias incoloras).
REACTIVOS
BD Desoxycholate Agar
Fórmula* por litro de agua destilada
Digerido pancreático de caseína
Digerido péptico de tejido animal
Lactosa
Desoxicolato de sodio
Cloruro sódico
Fosfato dipotásico
Citrato férrico
Citrato sódico
Agar
Rojo neutro
5,0 g
5,0
10,0
1,0
5,0
2,0
1,0
1,0
16,0
0,033
pH 7,3 0,2
*Ajustada o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
PRECAUCIONES
. Para uso exclusivo por parte de profesionales.
No usar placas que presenten señales de contaminación microbiana, decoloración, desecación,
roturas u otras señales de deterioro.
Consultar en las INSTRUCCIONES GENERALES DE USO los procedimientos de
manipulación aséptica, peligros biológicos y eliminación del producto después de su uso.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el
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calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre que
se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 °C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las siguientes cepas (consultar las INSTRUCCIONES
GENERALES DE USO para obtener instrucciones detalladas). Incubar las placas en
condiciones aerobias a una temperatura de 35 ± 2 °C durante un período de 18 a 24 horas.
Cepas
Escherichia coli ATCC 25922
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Proteus mirabilis ATCC 12453
Salmonella Abony DSM 4224
Salmonella Typhimurium ATCC 14028
Shigella flexneri ATCC 12022
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Sin inocular
Resultados del crecimiento
Crecimiento de bueno a excelente, colonias de color
rosa a rojo con halos de precipitación biliar
Inhibición entre parcial y completa
Crecimiento de adecuado a excelente, colonias desde
incoloras hasta de color tostado; inhibición de la
proliferación
10 a 100 colonias de color amarillento a tostado
Crecimiento de bueno a excelente, colonias de color
amarillento a tostado
Crecimiento de bueno a excelente, colonias pequeñas o
medianas de color amarillento a rosa
Inhibición completa
Rosa claro
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Desoxycholate Agar (placas Stacker de 90 mm). Controladas microbiológicamente.
Materiales no suministrados
Medios de cultivo auxiliares, reactivos y equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
Este es un medio selectivo para bacilos gram negativos que se puede utilizar en todo tipo de
muestras clínicas (véase también CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES
DEL PROCEDIMIENTO).
Procedimiento de análisis
Una vez recibida la muestra en el laboratorio, extenderla tan pronto como sea posible. La
placa de extendido se emplea sobre todo para aislar cultivos puros en muestras que
contengan flora microbiana mixta. Si por el contrario el material se cultiva directamente
empleando una torunda, hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde, extendiendo
luego para hacer el aislamiento a partir de esta área inoculada.
Incubar las placas, protegidas de la luz, a una temperatura de 35 ± 2 °C durante un período de
18 a 24 h.
Resultados
La morfología característica de las colonias en el BD Desoxycholate Agar es la siguiente:
Cepas aisladas
Resultados del crecimiento
E. coli
Colonias grandes, planas, de color rosa o rojo. Pueden estar
rodeadas de una zona de precipitación biliar
Enterobacter/Klebsiella Colonias grandes, mucoides, pálidas con centro rosa
Proteus
Colonias grandes, incoloras o de color tostado, sin proliferación
Salmonella
Colonias grandes, incoloras o de color tostado
Shigella
Colonias incoloras o de color rosa
Pseudomonas
Colonias irregulares, incoloras o de color marrón
Bacterias gram-positivas Inhibición entre parcial y completa
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CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
En este medio crecerán microorganismos de la familia Enterobacteriaceae y una diversidad de
otros bacilos gram-negativos, p. ej. Pseudomonas y Aeromonas2,3.
El medio no diferencia entre Proteus y otros bacilos gram-negativos negativos para la lactosa
como Salmonella o Shigella.
En este medio las colonias de Proteus y Salmonella no serán negras.
Ciertas pruebas de diagnóstico pueden efectuarse directamente en este medio; no obstante,
para lograr la identificación total se necesitan pruebas bioquímicas, y (si así se indica)
pruebas inmunológicas usando cultivos puros4.
REFERENCIAS
1. Leifson, E. 1935. New culture media based on sodium desoxycholate for the isolation of
intestinal pathogens and for the enumeration of colon bacilli in milk and water. J. Pathol.
Bacteriol. 40: 581-599.
2. Farmer III, J. J., and M. T. Kelly. 1991. Enterobacteriaceae. p.360-383. In: A. Balows, W. J.
Hausler, Jr., K. L. Herrmann, H. D. Isenberg and H. J. Shadomy (ed.), Manual of clinical
microbiology, 5th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
3. MacFaddin, J. F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical
bacteria, vol. 1, p. 269-275.Williams & Wilkins, Baltimore, MD. Hynes, M. 1942. J. Pathol.
Bacteriol. 40: 581-599.
4. Farmer III, J. J.. 2003. Enterobacteriaceae: introduction and identification. In: Murray, P. R.,
E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
ENVASE Y DISPONIBILIDAD
BD Desoxycholate Agar
Nº de cat. 254010
Medio en placas listo para su uso, 20 placas
INFORMACION ADICIONAL
Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD.
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