Download Diagnostico Genetico

EVELAM 2013 – MEXICO
Diagnóstico Genético y Molecular de las
Enfermedades Neuromusculares Hereditarias
Dr. Alberto L. Rosa
Laboratorio de Biología Celular y Molecular
Laboratorio Diagnóstico de Genética y Biología Molecular
Servicio de Genética Médica
Sanatorio Allende & Fundación Allende – CONICET
Córdoba, Argentina
Debilidad Muscular
Neurona
motora
Sindrome
miasténico
Neuropatía
periférica
Distrofia Muscular
o Miopatía
fibra muscular
nervio
asta anterior
CMTs
(Charcot-Marie-Tooth)
AME
Tipo I
Tipo II
Tipo III
ELA
Miastenia gravis
Sindromes
miasténicos
congénitos
Duchenne - Becker Cinturas
(LGMD) Emery-Dreiffus
FSHD
Miopatías congénitas
DMC
Steinert / Thomsen
Mitocondriales
Metabólicas
Miositis
Heterogeneidad Clínica
Heterogeneidad Genética
α 7 INTEGRIN
ITGA7
UCMD
Collagen VI
COL6A1,A2,A3
LOCUS 3p 23
(α
α 9 INTEGRIN)
ITGA9
RSMD-1
SEPN-1
L-CMD
LMNA
MDC1C
FKRP,FKTN
FCMD
FKTN
Marinesco-Sjoegren Sd”
SIL-1
“Salih CMD”
Titin
MEB
POMGnT1
WWS
POMT1
POMT2
FKTN
FKRP
LARGE
MDC1D
LARGE
MDC1A
LAMA2
“Adducted Thumbs”
Nesprin-1
Modified from S. Quijano
Gen SMN1
AME tipos I, II y III
Examen Clínico
Imágenes
(RMN músculos)
Electrofisiología
Anatomía Patológica
Genética y
Biología Molecular
I
I
I
II I I I I I
I
I
II
I
II
I
I I II
I II
I II
I
I
I
I
I
I
I
I
I
II
I
I
I
23 “pares”
I
46 cromosomas (ADN)
I
I
gen
ATG
TGA
D
5'-UTR
exón
deleción
intrón
E
F
G
exón
inversión
H
3'-UTR
ATG
A
TGA
B
C
A
B
5'-UTR
C
D
E
F
G
H
3'-UTR
duplicación
ATG
TGA
3'-UTR
5'-UTR
ATG GCA ATT GCT TTT TTA CGT AAC CCG
Mutación puntual
DNA
transcripción
pre -mRNA
procesamiento mRNA
mRNA
proteína
ribosoma
traducción
ATG
TGA
3'-UTR
5'-UTR
ATG GCA ATT GCT TTT TTA CGT AAC CCG
Mutación puntual
DNA
Amino ácido
ATG GCA ATT GCT TTT TTA CGT AAC CCG
Met
Ala
Ile
Ala Phe Leu Arg Asn
Pro
ATG GCA ATT GCT TTT TCA CGT AAC CCG
Met
Ala
Ile
Ala Phe Ser Arg Asn
Pro
ATG GCA ATT GCT TTT TGA CGT AAC CCG
Met
Ala
Ile
Ala Phe STOP
ATG GCA ATT GCT TTT TAC GTA ACC CG
Met
Ala
Ile
Ala Phe Tyr Val
Thr
normal
Arg
mutación de sentido
cambiado (missense)
mutación sin sentido
(nonsense)
deleción 1 pb
cambio marco de lectura
(frameshift)
Gowers (+)
Déficit muscular cintura pelviana
Amiotrofia proximal MMii
CPK: 8760 Ui/l
Gen DYS: Estudio de PCR multiplex
(deleción)
45
Pm
48
3
19
43
49
17
50
13
9
51
6
8
42
47
60
12
44
46
52
4
Chamberlain
Beggs
Set C
Gen DYS: Estudio de MLPA
(deleción o duplicación)
Gen DYS: MLPA para estudio de portadora (deleción heterocigota)
A- control
Gen DYS
B- paciente
X X
C- madre
Microchips de ADN (DNA-microarrays)
Estrategia CGH (Comparative Genomic Hybridization)
“Fragmentos de DNA (oligonucleótidos)
representativos del genoma humano
inmovilizados sobre una matriz sólida”
1)
2)
3)
4)
Duplication exons 2–4
Deletion exon 44
Deletion of exons 17–44
Deletion of exons 48–52
Hegde et al. (2008) Microarray-based mutation detection in the dystrophin gene. Hum Mutat. 29, 1091
WES
WGS
A
B
C
LGMD1E / DNAJB6 -
A
LGMD1E / DNAJB6 -
Diagnóstico molecular
Metodologías
PCR: deleción de exones (homocigota)
MLPA: deleción y duplicación de exones (homo & heterocigota)
PCR alelo específica y/o secuencia: mutación puntual
PCR, TP-PCR, Southern blot: expansiones de nucleótidos
Análisis de microsatélites: dosis génica (Ej. microduplicaciones)
Secuencia de paneles de genes: gen no definido (screening)
CGH-DNA arrays: escaneado del genoma, análisis global
WES (Exoma) / WGS (Genoma): Next generation sequencing
Servicio de Genética Médica y
Laboratorio Biología Celular y Molecular
Fundación Allende – CONICET - Argentina
alrosa@sanatorioallende.com