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ESCUELA DE BIOTECNOLOGIA
PRACTICA N0 1
DEMOSTRACIÓN DE LA NATURALEZA PROTEICA
DE LA ENZIMA CATALASA EN VEGETALES
I.- INTRODUCCION
Las enzimas son la clase más numerosa y especializada de las proteínas que
funcionan como catalizadores biológicos para las reacciones celulares. Las enzimas
tienen enorme poder catalítico, gran especificidad y actividad regulada, intervienen
en la transformación de la energía en diversas formas de trabajo. Las reacciones
mas simples como son la “autólisis” de los tejidos animales, de considerable interés
para la industria alimenticia, en lo que se refiere al ablandamiento de la carne
durante el sazonado, son catalizadas por las catepsinas, las cuales se liberan y
activan luego de ocurrida la muerte. El efecto acelerador es uno de los más altos
que se conocen, multiplica la velocidad de la reacción hasta en un millón de veces.
Las enzimas son proteínas que contienen los mismos aminoácidos que se
encuentran en otras proteínas. Al igual que otras proteínas también tiene una
estructura tridimensional, que representa la conformación de contenido de energía
mínimo, y pueden consistir de una sola o de varias cadenas polipeptídicas.
El objetivo del presente experimento es evidenciar que las enzimas son proteínas
que gozan de las propiedades de éstas y que son sensibles a todos los agentes
físico-químicos que actúan sobre los mismos, haciendo variar su comportamient o y
actividad.
II.- OBJETIVOS
Obtener un extracto crudo de la enzima catalasa
Demostrar cualitativamente el efecto de ácidos, bases y sales sobre la
actividad de la catalasa.
III. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS
3.1
EQUIPOS
3.1.1
3.1.2
3.1.3
3.2
Congeladora
Centrífuga
Estufa
MATERIALES Y REACTIVO
PROPORCIONA DO POR EL ALUMNO
3.2.1
3.2.2
3.2.3
Tomates verdes (inmaduras)
Papas verdes (inmaduras)
Manzanas verdes (inmaduras)
PROPORCIONADO POR EL LABORATORIO
3.2.4 Hidróxido de sodio 2N
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3.2.5 Ácido clorhídrico 0.5N
3.2.6 Acido tricloroacético 20%
3.2.7 Sulfato de cobre 20%
3.2.8 Buffer fosfato 0.05 M, y 0.1 M pH 6,5
3.2.9 Peróxido de hidrógeno 3%
3.2.10
Cloruro de sodio 0.15 M
3.2.11
Tubos de ensayo
3.2.12
Embudos
3.2.13
Matraces
3.2.14
Pipetas de 5 y 10 ml
IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
4.1
OBTENCION DEL EXTRACTO CRUDO
4.1.1. Pelar los tomates verdes y eliminar la cáscara, el pericarpio
almacenarlo a -7 0 C
4.1.2. Limar el pericarpio congelado, adicionar 3 ml de Buffer fosfato 0.1 M
pH 6,5
4.1.3. Filtrar el extracto crudo a través de 2 capas de gasa y centrifugar a 10
000 rpm por 15 minutos y guardar las alícuotas a -18 0 C
4.2
DEMOSTRACIÓN DE LA NATURALEZA PROTEICA
4.2.1
Armar el siguiente sistema:
TUBOS (ml)
Enzima
NaOH 2N
I
II
III
IV
1.0 1.0 1.0 1.0
--- 2.4 --- --HCl 0.5N
--- --- 2.4 --ATCA 20%
--- --- --- 2.4
CuSO4 20%
--- --- --- --Buffer Fosfato 0.05 M pH --- --- --- --6,5
Dejar en reposo los 6 tubos durante 20 minutos
4.2.2
V
1.0
------2.4
VI
1.0
--------2.4
--a 30 0 C
Preparar el siguiente sistema
TUBOS (ml)
Buffer fosfato 0.05 M pH
6,5
NaCl 0.15 M
H2 O2 3%
I
2.0
II
2.0
III
2.0
IV
2.0
V
2.0
VI
2.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
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4.2.3
4.2.4
Preincubar por 2 minutos a 25 0 C, luego agregar a cada uno de los
tubos 2,0 ml de la enzima tratada en el paso 4.2.1.
Dejar en incubación durante 5 minutos a 25 0 C y determinar la
actividad enzimática cualitativamente de la siguiente manera:
Presencia de actividad enzimática (+)
gas
Ausencia de actividad enzimática
(-)
=
Formación
de
=
Ausencia de gas
V.- RESULTADOS Y DISCUSION
TUBOS
I
II
III
IV
V
VI
Tomates
Papas
Manzanas
VI. CONCLUSIONES
6.1. Anotar sus conclusiones de la práctica.
VII. CUESTIONARIO
7.1. ¿Qué es un extracto crudo?
7.2. ¿A qué clase de enzima corresponde la catalasa? Su nombre y su código EC.
7.3.
¿Qué otros factores pueden considerarse para demostrar que las enzimas
son proteínas?
7.4. Indique 4 enzimas que pueden extraerse de vegetales
7.5. Importancia de las enzimas
VIII.- REFERENCIAS BIBLIOGRA FICAS
8.1. Braverman, J.B. 1980. Introducción a la Bioquímica de los alimentos. El manual
moderno. México.
8.2. Metzler, E.D. 1981. Bioquímica, Omega. Barcelona.