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TÉCNICAS DE PROPAGACIÓN APLICADAS A LA CONSERVACIÓN DE ESPECIES SILVESTRES DE FLORA AMENAZADA EN LA PROVINCIA DE CÓRDOBA Josefa Prados Ligero, Mª Auxiliadora Díaz López, Francisca Herrera Molina & J. Esteban Hernández Bermejo. Banco de Germoplasma Vegetal Andaluz (BGVA). IMGEMA Jardín Botánico de Córdoba (JBC). Avda. de Linneo s/n, E-14004 Córdoba. bgva@telefonica.net, jardinbotcord@telefonica.net INTRODUCCIÓN El trabajo se ha desarrollado como una colaboración del Banco de Germoplasma Vegetal Andaluz en los proyectos de “Consultoría y Asistencia Técnica para la Conservación de la Flora de la provincia de Córdoba” que desde el año 2001 viene ejecutando la Consejería de Medio Ambiente de la Junta de Andalucía. El objetivo fue la obtención de un contingente de plantas que permitiera desarrollar ensayos de fortalecimiento y/o reintroducción en poblaciones naturales de Lithodora nítida (Em) R. Fern. (EN) y Sarcocapnos crassifolia subsp. speciosa (Boiss.) Rouy (VU). MATERIAL Y MÉTODOS Los métodos de propagación utilizados se detallan a continuación. Todos los ensayos se han llevado a cabo a partir de material (semillas y estaquillas) colectado en sus poblaciones naturales durante el periodo 2002 y 2003. SIEMBRAS Especie Lote (Nº semillas) S. crassifolia L-1 (1070) Sustrato Temperatura Fotoperiodo Pretratamiento PFP* 10/20 ºC 8h osc/16h luz Estratificación fría en arena 1 mes S. crassifolia L-2 (100) GP** 10/20 ºC 8h osc/16h luz Desinfección*** Estratificación fría en turba 1 mes S. crassifolia L-3 (238) GP 10/20 ºC S. crassifolia L-4 (139) GP 20ºC PFP 10/20 ºC 8h osc/16h luz Desinfección Estratificación fría en arena 3 semanas 8h osc/16h luz Desinfección Estratificación fría en arena 3 semanas oscuridad Estratificación fría en turba 1 mes L. nítida L-5 (48) *PFP Papel de filtro y perlita **GP geotextil y perlita ***Desinfección = hipoclorito sódico 20 % 10 min. Para determinar el % de germinación se utilizó como criterio la emergencia de la radícula. Se realiza el trasplante a maceta con mezcla de sustrato: turba rubia:arena (½: ½: 1). ESTAQUILLADO Se realiza el estaquillado tomando esquejes de 10-15 cm long., referentes a : 81 individuos en L. nitida y 20 para S. crassifolia speciosa. ESPECIE S. crassifolia speciosa L. nitida *A: arena FECHA Nº IND. (Nº ESTAQ.) LUGAR SUSTRATO* TRATAMIENTO 1-4-03 16 (52) Macetas invernadero (sombra) 1:1 A:S IBA 90 ppm (18 h) 27-5-03 4 (23) Germinador 10/20 ºC 8h osc/16h. luz 2:1 P:S IBA 50 ppm (24 h) 30-6-03 12 (25) Germinador 24 ºC 8h osc/16h. luz 1:1 P: S IBA 80 ppm (18 h) 12-02-03 52 (52) Cama caliente 16 º C 1:1:1 S:P:A IBA 1000 ppm (3-4 s) 12-02-03 52 (52) Cama caliente 16 º C 1:1:1 S:P:A IBA 50 ppm (24 h) 25-03-03 29 (41) Cama caliente 16 ª C 1:1:1 S:P:A En blanco S: sustrato P: perlita RESULTADOS Planta infectada por Rhizoctonia sp. MICROESTAQUILLADO Curvas de GERMINACIÓN en S. crassifolia speciosa Lote 1 80 Lote 2 60 Lote 3 40 Lote 4 % VARIABILIDAD INICIAL ESPECIE ORIGEN DEL EXPLANTO S. crassifolia speciosa 0 L. nitida 19 34 56 PERDIDAS EN INICIACIÓN RESULTADOS Nº INDIVIDUOS Nº EXPLANTOS Nº INDIVIDUOS Nº EXPLANTOS INDIVIDUOS NO ENRAIZADOS INDIVIDUOS ENRAIZADOS Macetas semillero afectadas por Rhizoctonia sp. 57 135 16 45 2 39 uds. (95 %) Restos de estaquillado plantas in situ 14 50 2 15 1 11 uds. (92 %) Macetas semillero sanas 13 34 3 6 0 10 uds. (100%) Restos de estaquillado plantas in situ 16 39 7 9 0 9 uds. (100%) 20 6 MICROESTAQUILLADO MEDIANTE CULTIVO IN VITRO Los explantos utilizados para el cultivo de ambas especies fueron segmentos nodales (0.5-1 cm long,, 1-4 hojas), procedentes de restos del material empleado para estaquillar, de plantas de semillero que fueron atacadas por Rhizoctonia sp., y plantas de semillero sanas. Para las dos especies se ensayaron diferentes medios de cultivo, antes de la elección final del medio de proliferación y enraizamiento utilizado. MEDIO DE CULTIVO PARA MICROPROPAGACIÓN Desinfección: hipoclorito sódico (10% 10 min.) con 2 gotas de Tween 20, lavado posterior con agua estéril tres veces durante 5, 10 y 15 min consecutivamente. Medio de proliferación: medio base MS (Murashige y Skoog, 1962) durante un mes a 25ºC y fotoperiodo (luz/oscuridad) 16/8 h. Enraizamiento: MS con carbono activo suplementado con IBA 1 mg/l durante 1.5-4 meses para Sarcocapnos y de 1-2 meses en Lithodora. Aclimatación: realizada en germinador (20 ºC, 16/8h y humedad relativa al 65%). Trasplante del material obtenido a macetas con mezcla pasterizada (autoclave ½h.) de sustrato:turba rubia:arena (1/2:1/2:1) en el caso de Sarcocapnos y mezcla pasterizada de sustrato:arena (1:1) para Lithodora. 87 dias después de siembra SUPERVIVENCIA DE PLANTAS La germinación de Lithodora nítida se inicia a los 21 días de siembra con un tiempo de germinación de 7 meses. Porcentaje de germinación 63 %. ESPECIE SIEMBRAS MICROESTAQUILLADO ESTAQUILLADO >1 MES >2 MESES >4 MESES germinador invernadero Enraizamientos >1 MES radícula y cotiledones >2 MESES nomófilos >4 MESES S. crassifolia speciosa 73% 36% 29%* 93% 79% 74% 0 L. nitida 86% 43% 10% 25% 16% 0% 1 Aclimatación * El porcentaje es aun menor si contabilizamos las pérdidas por Rhizoctonia sp. L. nitida CONCLUSIONES ¾Respecto a S. crassifolia speciosa: S. crassifolia speciosa Cuatro meses de cultivo Los mejores resultados de germinación se obtienen con las condiciones de ensayo L-4, alcanzándose el 71% de semillas germinadas. MATERIAL PROPORCIONADO A LA CONSEJERÍA DE MEDIO AMBIENTE PARA REINTRODUCCIÓN Sarcocapnos crasifolia speciosa La velocidad de germinación está influida por la temperatura de ensayo, observándose los mejores resultados a 20ºC (L-4), donde a los 48 días se alcanza el 71% de la germinación. Este porcentaje se alcanza con 10/20ºC (L-3) a los 71 días. FECHA ENTREGA El uso de arena como sustrato empleado en estratificación influye favorablemente, tanto en el porcentaje final de germinación, como en la velocidad de la misma. En 22 días se obtiene el 50% de semillas germinadas en L-4 y L-3, frente a los 48 días que tarda en alcanzarse el mismo porcentaje, utilizando como sustrato turba (L-2). Respecto a las técnicas de propagación empleadas, el microestaquillado ha sido el procedimiento que en número de individuos y tiempo de obtención de los mismos, ha proporcionado una cantidad de planta adecuada para los programas de recuperación. ¾La supervivencia de plantas de L. nitida en invernadero no supera el año, por lo que se ha establecido la micropropagación por cultivo in vitro como método de stock de planta para posteriores ensayos de propagación. ¾Se establece la técnica de micropropagación por cultivo in vitro como una herramienta eficaz para recuperar individuos afectados por enfermedades criptogámicas. ORIGEN DEL MATERIAL siembra microestaquillado 19/03/04 22 28 16/12/04 10 15 13/04/05 2 39 15/04/05 - 20 22/04/05 - 22 Agradecimientos : Al personal de la Consejería de Medio Ambiente. TOTAL PLANTAS 34 Junta de Andalucía, que nos han facilitado la labor en las poblaciones naturales. A. Prados (protección de cultivos CIFA Córdoba) por la colaboración en la determinación del patógeno causante de la muerte en plántulas de semillero de S. crassifolia subsp. speciosa 124
