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VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA
HUMANA
VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA
Familia Retroviridae
Subfamilia Orthoretrovirinae
Género Lentivirus
Tipos: VIH-1 y VIH-2
 Virus esférico envuelto (90–130 nm)
 Genoma:2 hebras simples de ARN +
(9,8 kb)
 Proteínas de Superficie
gp120-gp41 // gp105-gp36
 Polimerasas unidas al ARN
p65/51; p31 // p68 – p34
 Proteinas del Core
p17 -p24 //
p16 - p26
•Los viriones contienen 2% de ácido nucleico.(2 ARN (+) y 1 ARNt (trp, pro,lys)
•Genoma : 2 moléculas de ARN de sentido positivo que poseen cap en el
extremo 5’ y una cadena polyA en su extremo 3’.
• Su tamaño varía entre 8 a 11 kb.
R: repetidos directos (18-250 nt)
U5: región no codificante. Comienza
retrotranscripción
PBS: sitio de union del primer para la
retrotranscripción
Leader: aprox 90-500 nt. Está en el extremo 5’
de todos los ARNm
VIH-1
VIH-2
PPT: zona de polipurinas. (aprox 10 nt). Lugar de
iniciación de la síntesis de la hebra + durante la
retrotranscripción
U3: Contiene los elementos promotores de la
transcripción del provirus
gag: codifica proteinas del Core y la PR
pol: codifica enzimas (RT, IN)
env: codifica glicoproteinas de superficie
Organización genómica del HIV-1
Ciclo replicativo del HIV
DIVERSIDAD GENETICA DEL VIH
TIPO
HIV-1
HIV-2
GRUPO
SUBTIPO
M
A,B,C,D,E,F
G,H,I,J,K,L
(mayor)
O
(outlier)
N
(no M, no O)
RECOMBINANTES
A,B,C,D,E,F
B/F, A/G, A/E, A/C,
A/G/J
Alta tasa de variabilidad
• Alta tasa de error en la lectura de la Retrotranscriptasa: 1 nucleótido/ciclo
replicativo
• Alta tasa de replicación viral: 4,4 x 1010 particulas virales por dia.
• Recombinacion retroviral: “Formas Recombinantes Circulantes” (CRFs),
“Formas Recombinantes Unicas” (URFs)
VIRUS
HETEROCIGOTO
VIRUS
RECOMBINANTE
ESTRUCTURA GENÓMICA DE LAS FORMAS
RECOMBINANTES
CRFs
URFs
A
B
C
D
E
F
G
H
J
K
Sin Clasificar
Sin Secuenciar
Distribución geográfica del VIH
(Tipos,Subtipos y CRFs)
A
A
B,A,C,D,G
A,C,D,F
A,B
A,B
A,D,E,O
B
A
A,B, B
A,B
B,D
C,D
,C,D
B/F,B/D
?
CRF12-BF
A
B,F,C
VIH-1
VIH-2
HISTORIA NATURAL DE LA INFECCION POR VIH
Seroconversión
4-8 semanas
Infección
asintomática
aprox. 10 años
SIDA
2-3 años
CICLO DEL VIRUS DE
INMUNODEFICIENCIA HUMANA
PCR DNA proviral
(cualitativa)
ARN viral HIV
RNA viral (cualitativa)
Carga Viral
(nºde copias ARNv /ml)
(cuantitativa)
Células blanco:
Linfocitos T CD4, Monocitos, Macrofagos, Células de Langherans,
Células dendríticas
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
Estudio de respuesta inmune humoral: IgM, IgA, IgG
•Test de Tamizaje :
• Enzimo inmuno análisis (EIA)
• Test rápidos
• Aglutinación de partículas
•Test Confirmatorios
•Western Blot (WB)
• Ensayo en Línea (LIA)
Detección directa de presencia viral
•Estudio de Proteinas virales (Ag p24)
•Estudio de Acidos nucleicos: ADN proviral
ARN viral
Estudio de respuesta inmune humoral: IgM, IgA, IgG
Los test serológicos se basan en la interacción Antígeno – Anticuerpo.
•Test de Tamizaje
•Son altamente sensibles para poder detectar los Ac en la muestra.
•Detectan anticuerpos para HIV-1 y HIV-2 (sin lograr discriminar)
•Detectan anticuerpos contra grupo M y O
•Antígenos: Lisado total de virus, Proteinas recombinantes, Peptidos
sintéticos
•Test Confirmatorios
•Son altamente específicos para confirmar con certeza la presencia de
Ac. Específicos contra HIV.
•Pueden discriminar infección por HIV-1 o por HIV-2
EIA 4ª GENERACION
Proteinas
recombinantes
HIV-2 env
HIV-1 env
HIV-1gag
Peptidos sinteticos
HIV-O
Ac paciente
Sustrato
Ag viral
Ac conjugado
•Muy buena especificidad
•Detecta bajos títulos de
Anticuerpos (seroconversión)
E
HIV-2
E
•Buena sensibilidad para Ac.
anti HIV-2 y Ac. anti grupo
M y O de HIV-1,
•Detecta IgG e IgM
•Detecta Ag virales
HIV-1 (grupo M y O)
Soporte Solido
HIV-2
TEST RAPIDOS
TEST CONFIRMATORIOS
Western Blot
LIA
ID
muestra
3.+
1+
+/gp120
gp 41
p31
p24
P17
Criterios:
WB Positivo: p24,gp41,gp120/160
(p24 con al menos otra)
WB Negativo: Ausencia total de
Bandas
gp105
gp36
WB mejorado
Algoritmo para el diagnóstico serológico de la
infección por VIH
No Reactivo
informar
Laboratorio Periférico
Técnicas de Tamizaje
Banco de Sangre
Reactivo
No Reactivo
(-/-)
informar
Laboratorio de Referencia
2 Técnicas de Tamizaje
Distinta Configuración antigénica
Reactivo
(+/+)
Discordante
(+/-)
WESTERN BLOT
INFORMAR
Positivo *
Indeterminado
Repetir serología
en 30 días
Negativo
Diagnostico Molecular de la Infección por HIV
Detección cualitativa de Acido Nucleico (ADN proviral o ARN viral)
•Diagnóstico en niños nacidos de madres seropositivas
•Serología indeterminada
•Hipoglobulinemia
Detección cuantitativa de Acido Nucleico (ARN viral)
Carga Viral ( nº copias de ARN v/ml) en pacientes infectados
Inicio de tratamiento
Evaluación de tratamiento
Cambios de tratamiento
Estudio resistencia a drogas antiretrovirales
infectado
serorrevertido
IgA en sangre: indicador de una respuesta inmunológica específica
a la infección viral en el niño.
Seguimiento en el laboratorio del niño
nacido de madre VIH +
48 hs – 2 semanas
de vida
PCR, Elisa, Western Blot
PCR -
1 – 2 meses de
vida
PCR
PCR -
>5 meses de vida
PCR
PCR +
PCR
Carga Viral
Población
Linfocitaria
PCR -
PCR -
Infección poco
probable
PCR +
nueva PCR
PCR+•PCR
•Carga Viral
•Población
Linfocitaria
PCR +
PCR -
PCR
Carga Viral
Población
Linfocitaria
PCR
PCR PCR +
PCR -
infectado
PCR +
nueva PCR
Seguimiento en el laboratorio del niño
nacido de madre VIH +
•Diagnostico de no infección: 3 PCR –
2 muestras negativas en dos momentos distintos en niños >1 mes
de vida, más 1 muestra negativa en > 4 meses de vida
•Diagnostico de infección: 3 PCR +
3 muestras positivas en dos momentos distintos y al menos una
de ellas en niños > 4 meses
•Diagnostico de serorreversión:
2 o más muestras con ELISA y Western Blot negativos entre
los 6 y 18 meses de edad y dosificación de inmunoglobulinas
normales
En todos los casos seguir con ELISA hasta 18 meses de edad
El LABORATORIO de VIROLOGÍA
EN LA INFECCIÓN POR VIH EN PEDIATRIA
Diagnostico de la Infección por VIH
•
Niños mayores de 18 meses: ELISA - Western Blot
•
Niños menores de 18 meses:
Determinación Cualitativa
ADN proviral
ARN viral
Seguimiento de Niños infectados
•
Carga Viral : nº de copias de ARN v/ ml
Inicio de tratamiento
Evaluación de tratamiento
Cambios de tratamiento
• Estudio de Resistencia a drogas antirretrovirales
ADULTOS Y NIÑOS QUE VIVIAN CON EL
VIH A FINES DEL 2006
1983 inicio de la epidemia del VIH/SIDA
6.463 casos acumulados de VIH + (1983- 06/2006)
2.895 casos acumulados de SIDA (1983- 06/2006)
9.358 casos acumulados VIH/SIDA (1983-06/2006)
MECANISMO DE TRANSMISIÓN
SIDA EN URUGUAY - 2006
4%
25%
71%
Sexual
Sanguíneo
Perinatal
RELACION H/M EN SIDA ANUAL
URUGUAY.- Años 1991-2005.
9
8
7
6
5
Rel.H/M
4
3
2
1
0
Año 1991
Año 1996
Año 2001
Año 2005
VIH Y SIDA POR GRUPOS ETARIOS
URUGUAY.- Años 1983-2005.
2500
2000
1500
Casos
VIH
SIDA
1000
500
0
0-14 15-24 25-34 35-44 45-54 55y+
Grupos etarios
s/d
Estado de Situación
• Tendencia creciente del VIH /SIDA
Prevalencia de 0,23% en el 2000 a 0,45% 2004
• Pico máxima incidencia en población joven,
con aumento progresivo de las mujeres.
JUVENILIZACIÓN Y FEMINIZACIÓN DE LA
EPIDEMIA
• La situación de vulnerabilidad de mujeres y
adolescentes / jóvenes, y de las poblaciones
con prevalencia mayor a 5%:usuarios de
drogas, hombres que tienen sexo con hombres
(HSH), personas privadas de libertad,
Uno de los riesgos de ésta
epidemia es el Silencio
Rompamos el silencio y derribemos
los obstáculos que impiden una
prevención y atención del VIH/SIDA
eficaces.