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Lección 2. Observación de microorganismos
1.
Fundamentos del microscopio óptico
1.1 El microscopio de campo claro
1.2 Tinción de microorganismos para su observación al
microscopio de campo claro
1.3 Microscopio de contraste de fases
1.4 Microscopio de campo oscuro
1.5 Microscopio de fluorescencia
2. Microscopio confocal de barrido con láser
3. Fundamentos del microscopio electrónico
3.1 Microscopio electrónico de transmisión
3.2 Microscopio electrónico de barrido
Recorrido
de la luz
Aumento
Imagen
visualizada
ojo
Lente ocular
Imagen intermedia
(invertida respecto
a la muestra)
Lente objetivo
Muestra
Ninguno
Condensador
Fuente de luz
Microscopio óptico
Tinción de células para
la observación microscópica
Extensión de una fina capa
de células sobre el porta
Adición del colorante
lavado y secado
Secado al aire
Fijación por flameado del porta
Se coloca una gota de aceite
de inmersión sobre el porta y
se observa con el objetivo de
100X
Tinción de Gram
Tinción del frotis
Paso 1
Paso 2
Previamente fijado al calor,
con cristal violeta
Durante 1 minuto.
Todas las células se tiñen
de color azul-violeta.
Añadir Lugol,
dejar actuar 2 minutos
Todas las células siguen
de color azul-violeta.
Gram +
Decolorar con alcohol
Paso 3
Las células Gram +
siguen de color azul-violeta.
Las Gram negativas
se decoloran.
Tinción de contraste
Con safranina 2 minutos.
Las células G+
se ven azul-violeta.
Paso 4
Las G- rosas o rojas.
Gram -
Microscopio de
Campo Claro
Alga verde
(eucariota)
Microscopio de
Fluorescencia
Bacteria filamentosa
Teñida con naranja
de acridina
Microscopio de Contraste
de Fases
Saccharomyces cerevisiae
Microscopía
Confocal por Láser
Cianobacteria
filamentosa
Microscopio láser
de barrido confocal
Sonda filogenética
Colorante fluorescente
Microscopio de fluorescencia
Tinción células con sondas filogenéticas unidas a un
colorante fluorescente
FISH aplicado a bacterias nitrificantes de aguas residuales
Rojo: bacterias oxidadoras de amonio (NH3 → NO2-)
Verde: bacterias oxidadoras de nitritos (NO2- → NO3-)
Oxidación anaerobia de metano en sedimentos marinos
Agregados de bacterias metanogénicas (rojo)
rodeados por bacterias reductoras de sulfato (verde)
Cada tipo celular está teñido con un colorante filogenético (FISH)
diferente
Bacterias
sulfato-reductoras
Bacterias metanogénicas
Micrografía Láser Confocal de una
muestra de fango de aguas residuales
Microscopio Electrónico
Transmisión
Barrido