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TEMA 3 ORGANIZACIÓN DEL MATERIAL HEREDITARIO EN PROCARIOTAS GENÓFORO DE LOS VIRUS -Virus ARN -Virus ADN-fago GENÓFORO BACTERIANO -Cromosoma bacteriano -ADN extracromosómico: PLÁSMIDOS -clasificación -utilización tecnología ADN recombinante GENÓFOROS VIRALES CON ARN Especie a la que afectan: -vegetal -animal -bacterias (fagos) Tipo de ARN: -sencillo o doble -enteros o segmentados Muy empaquetados y plegados (proteínas similares a histonas) Gran variación peso molecular VIRUS ARN Tipo de Molécula Tipo de Hélice Sencilla Tipo de virus según huésped. Familia de virus Fago MS2, f2, Q Animal Picornavirus (polio) Togavirus Rhabdovirus (estomatitis, rabia) Myxovirus (gripe) Paramyxovirus (Sendai, paperas) Vegetal Virus mosaico tabaco (TMV) Fago Ø6 Animal Reovirus Vegetal Tumor de las heridas Vegetal Viroide (PSTV) Lineal Doble Circular Sencilla VIRUS TMV GENÓFOROS VIRALES CON ADN Especie a la que afectan: -animal -bacterias Tipo de ADN: -sencillo o doble -lineal o circular -con/sin extremos cohesivos (fago ) Gran variación peso molecular VIRUS ADN Tipo de Molécula Tipo de virus según huésped. Familia de virus Fago ØX174 M13 Animal Parvovirus Doble Animal Papovavirus (SV40, polioma) Adenovirus Herpetovirus (Herpes) Poxvirus (viruela) Iridovirus (peste porcina) Doble Fago Extremos cohesivos: Fago Ø80, 434, P2, 186) Redundancia terminal: serie T-par, T3 y T7 Tipo de Hélice Sencilla Circular Lineal FAGO M13 FAGO lisis bacteria ciclo lisogénico infecta E. coli cápside icosaédrica, DNA doble hélice lineal con ~ 48.000 pb extremos cohesivos: extremos 5’ nucleótidos de secuencia complemenaria) monocatenarios (12 VIRUS ARN-ADN Tipo de Molécula Lineal Tipo de Hélice Tipo de virus según huésped. Familia de virus Animal Retrovirus (Ribodesoxivirus) - Sarcoma de Rous (Pollo) - Leucemia de Rauscher (ratón) - HIV (virus de inmunodeficiencia humana causante del SIDA) Sencilla VIRUS ARN-ADN Tipo de Molécula Tipo de Hélice Tipo de virus según huésped. Familia de virus Circular Doble (gap) Animal Hepatitis B VIRUS HIV VIRUS HEP. B GENÓFORO BACTERIANO ADN doble hélice circular tamaño variable (0,1 a 8 x109 dalton) E. coli (1.100 m longitud, 3,2 x105 pares nucleótidos) Material genético NUCLEOIDE ARN (30%) PROTEÍNA (5-10%) LÍPIDOS ADN (60%) (1%) GENÓFORO BACTERIANO ADN altamente organizado Plegamiento formando DOMINIOS SUPERENRROLLAMIENTO GENÓFORO BACTERIANO Nº dominios en E. coli variable (12 a 80 dominios) Composición: ADN dúplex condensado + proteínas básicas GENÓFORO BACTERIANO PROTEÍNAS BÁSICAS DETECTADAS EN BACTERIAS Proteína Composición Contenido por células Semejanza con eucariontes HU Dímero subunidades y de 9.000 d. 40.000 dímeros Histona H2A H Dímero subunidades idénticas de 28.000 d. 30.000 dímero Histona H2B IHF Subunidad de 10.500 d. Subunidad de 9.500 d. Desconocido Desconocida H1 Subunidad de 15.000 d. 10.000 copias Desconocida HLP1 Monómero de 15.000 d. 20.000 copias Desconocida P Sububnidad de 3.000 d. Desconocido Protaminas -Fis -Dan (DNA-binding protein under anaerobic conditions) = YgiP (Nucleic Acids Research, 2010, Vol. 38, No. 11 3605–3618) ADN EXTRACROMOSÓMICO PLÁSMIDOS ADN doble y circular Replicación autónoma; información no vital Posibilidad de integración en cromosoma principal bacteriano EPISOMA - secuencias inserción y transposones Tamaño variable: 2.000 a 100.000 pb ADN bacteriano plásmidos FUNCIÓN PLÁSMIDOS TRANSFERENCIA FACTOR FERTILIDAD (F) ENTRE BACTERIAS CONJUGACIÓN F+ F- FUNCIÓN PLÁSMIDOS Hfr factor F integrado en genóforo bacteriano transferencia de marcadores cromosómicos a F- con elevada frecuencia transferencia desde punto fijo y en un orden determinado (integración específica factor F) FUNCIÓN PLÁSMIDOS plásmido E. coli resistente a ampicilina (ampr) y tetraciclina (tetr) ESTIRPE A ESTIRPE B cys+, leu+, thr+ cys-, leu-, thr-- medio mínimo con leucina y treonina medio mínimo con: -treonina -leucina -sin suplementos A.- Medio mínimo con leucina y treonina: -cys+, leu+, thr+ -cys+, leu-, thr- B.- Medio mínimo con: - TREONINA: cys+, leu+, thr+ Y cys+, leu+, thr- - LEUCINA: cys+, leu+, thr+ Y cys+, leu-, thr+ - MEDIO MÍNIMO: cys+, leu+, thr+ TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE” comparación secuencias ADN de genes evolución -rasgos característicos gen (nº intrones, posición) -estructura producto proteico gen FUNCIÓN modificación parte de secuencia ADN de un gen y reinserción CONSTRUCCIÓN ADN RECOMBINANTE TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE” TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE” DIGESTIÓN ADN (enzimas de restricción) corte ADN en fragmentos para su clonación cortes escalonados ADN recombinante TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE” clonación gen específico TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE” diseño plásmidos como vectores de clonación de ADN