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Taxonomía Fungal
La clasificación fungal es nueva y ha
cambiado
 Clasificación, según Bar (1988):

División
 Subdivisión
 Clase
 Orden
 Familia

Eumycota
Mastigomycota
Chytridiomycetes
Spizellomycetales
Neocallimasticaceae
Género

El género es distinguido por la morfología




Thallus: Monocéntrico y policéntrico.
Rizoide: Filamentos y bulbos.
Zoosporas: Uni- o Multiflageladas
Todos los géneros rizoides tiene filamentos,
excepto las especies caecomyces.
(Trinci et al. 1994)
Especies
Son separadas por sus características
morfológicas y estructurales.
 Las Piromonas y Sphaeromonas se
asumía que eran protozoarios por lo que
fueron cambiados a:
Piromyces y Caecomyces

(Trinci et al. 1994)
Fungis Policéntricos
Neocallimastix joyonii (Breton et al. 1989)
Orpinomyces joyonii (Trinci et al.
1994) debido asu patrón de crecimiento
policéntrico
 Ruminomyces y Anaeromyces tienen
características similares al monocéntrico

Aislamiento y Enumeración

Han sido aislados de: bovinos, ovinos, caballos,
canguros y elefantes

En heces y tractos gastrointestinales y fluido ruminal

Orpinomyces fue aislado en charcos y pasturas de las
vacas

La dieta animal tiene efectos sobre las poblaciones
fungales

La biomasa fungal es difícil determinar
 La estimación:método gravimétrico con
digestión enzimática con quitina
 El conteo (103 – 107 ml) no provee una
adecuada estimación fungal
 Para el tamaño de las poblaciones
fungales se han utilizado diluciones en
agar y otra soluciones
Condiciones para aislamiento

Anaerobiosis
 pH de 6.5 a 6.7
 T° de 39°
Materiales para aislamiento





Bufer: Carbonato/Fosfato
Fluido ruminal
Resazurina (indicador redox)
Carbohidratos
Antibióticos
Almacenamiento
T° de 39° C
 Fibra en agar
 Nitrógeno líquido
 Dimetilsulfóxido
 Enfriamiento a 1.5°C
 Glicerol

Cultivos y Almacenamiento







Mantenidos por transferencia frecuente ( 2 a
7 días).
Algunas especies 24 a 48 horas.
Otros Intervalos semanales.
Isolados monocéntricos – 2 a 3 días.
Isolados policéntricos – semanalmente.
Mantenimiento largo en tiempo – 39 oC en
fibra Sisal embebida en agar.
En nitrógeno líquido con dimetilsulfoxido
como crioprotector para “fungi” anaeróbico
sirve también para largo tiempo.
Preservación 1.5 oC por minuto hasta 70 oC con glicerol como crioprotector.
 Resucitados a 39 oC.
 Restos de esporas “fungi” ruminales,
 Esporas anaeróbicas de heces.
 Inducidas in vitro, no germinadas in
vitro (Wubah et al., 1991b).

proceso de manipulación de formación
y germinación de esporas – método de
conservación.
 “Fungi” anaeróbicos no son listados en
la ATCC (American Type Culture
Collection) como “Fungi” filamentosos o
Protistas.

6. Protozoarios Ruminales
6.1 Introducción






Basados en el tamaño relativo
Primeros microorganismos ser descubiertos
Muy móviles y viables en el rúmen y retículo
Inmóviles y aparentemente desintegrados en
el omaso y abomaso.
Los Protozoarios celulares no identificados en
intestino delgado.
Utilizados como alimento.
Explicación de Sobrevivencia
 Especificidad del hábitat, esencialidad
para el huésped.
 Defaunación.
 Alta especialización al rúmen o hábitat.
 Actividades metabólicas (relación
bacterias y “fungi”).








Protozoas Flagelados.
Baja población
Zoosporas Fúngicas (decrecimiento)
Limitados
Esquema de Clasificación ha cambiado
algunas veces en 30 años.
Terminología difícil
Referencia a “Holotrichs” y “Entodiniomorphs”
Papeles en el rumen:
Clasificación de efectos
a) Medio ambiente del rumen
b) Componentes de la sangre
c) Metabolismo y digestión en el rumen
d) Sobre el animal
Fermentación de carbohidratos solubles

Holoctrichs como principal degradador

Entodinromorphs

Procurar incrementar la población de
Holotrichs
Digestión de almidón
 Entodiniomorphs como principales
degradadores
 Isotricha
 Uso como fuente de energía o
síntesis intracelular de polisacáridos
 Principales productos

Digestión de Carbohidratos Estructurales





Actividad celulolítica (orden entodiniomorfos)
Epidinium caudatum, Eudiplodium maggii,
Ostrocadinium dilobum y varias Spp
Entodinium
Holotricha
Enzimas que degradan hemicelulosa (10
géneros, entodiniomorfos, subfamilias
Diplodiniinae y Ophryoscoliceneae.
Baja actividad Orden holotricha
Monosacáridos, disacáridos y
oligosacáridos
 Spp de protozoarios poseen la
hidrolasa glicosidica
 Pectina es depolimerizada por los
protozoarios (metanol, ac.
Galacturónico o poligalactoranidos)

Digestión de la Proteína

Los entodiniomorfos digieren la caseína
insoluble

Son importante en la degradación de
proteínas insolubles

Sp isotricha (caseína soluble e insoluble)

Mayor actividad proteolítica en el citoplasma
Absorción y digestión de bacterias






-Gutierrez 1955. Isotricha. No se desarrolla sin
bacterias.
-Probablemente bacterias proveen mayoría de N
para crecimiento.
-Inhabilidad para biosintetizar o interconvertir
aminoácidos (E. caudatum.
-Pérdida gradual de enzimas.
-Compuestos preformados por crecimiento de
bacterias
-Protozoarios pueden “absorber” < 1% de total
bacterial / minuto concentrados.

Productos de digestión de bacterias:
Aminoácidos , 50% retenido
VFA
Amonia

 Amoniácidos bacterianos en el animal,
digestibilidad de proteina protozoaria.


Limitado pasaje ruminal.
Relacionado con  normal después de
alimentación.
Cambios en población de protozoarios

Establecimiento de poblaciones:

Contacto directo en etapas jóvenes.

Presencia en la boca de la madre

Saliva en las plantas

Aerosoles entre animales
Variación en el horario
Diferencias entre entodiniomorfos y holotricos
Alimentación 1 / día, entodiniomorfos  5-6
horas / gradual 20 a 22 hrs.
Holotrichs, pico momentos antes o después
de alimentación / 
Entodiniomorfos Diluciones asociadas a
alimentación. Y cambios en crecimiento celular.
Migraciones celulares:
Paredes rumen, retículo y porción
ventral.
OTROS FACTORES QUE AFECTAN LA
CONCENTRACION DE PROTOZOARIOS
DIETA  forraje : concentrado
 20 – 40 % de concentrado maximiza la Ι
protozoariosΙ
  60 %  entodinium
El efecto del concentrado se puede disminuir
controlando el consumo
FRECUENCIA DE ALIMENTACION
GEOGRAFICAS i.e. Polyplastron multivesiculatum
VARIACION ANIMAL i.e. Ophryoscolecidae y
Caloscolex
DEFAUNACIÓN
Se han usado varios tipos de procedimientos para
obtener ruminantes libre de protozoarios ciliados.
La manera más eficaz y simple de obtener
animales
libres-protozoario
es
aislarlos
inmediatamente de todos y de otros rumiantes
después del nacimiento u obtenidos por
histerectomía normal.
Defaunacion se han establecido e intentado por medios
físicos y dietéticos:
Físicos: Involucra el vaciando y lavado del rumen, mata
los protozoarios en los volúmenes y los devuelve al
“protozoario-libre” del rumen.
Dietéticos: Han ido de inanición y han alimentado con
pura leche, alimentando hidratos de carbono altos para
inducir acidosis apacible y los compuestos del antiprotozoal
alimentando como sulfato cobrizo, ácidos, o surfactantes.
El aislamiento al nacimiento ha sido criticado en base
a las mezclas de las poblaciones bacterianas y
fungicas no desarrollan en el animal protozoariolibre. La efectividad de otras técnicas del
defaunación es inconstante, y los compuestos
diferentes mataban a los protozoarios pueden tener
efectos adversos en el animal, en los
microorganismos de otros, o de ambos
ANTIBIÓTICOS
Se han usado los antibióticos ionofosforados, principalmente la
monensin
y
lasalocid,
ampliamente
como
promotores
del
crecimiento para el ganado de carne y corderos. Dos de estos
compuestos tienen un efecto tóxico en los ciliados del rumen y han
disminuido su concentración notablemente en volúmenes del rumen
. Sus niveles de efectividad han reducción en números de
protozoarios. La mayoría de los
antibióticos comúnes, a este
niveles son bactericida, no son tóxico a los protozoarios del rumen.
Clasificación de los Protozoarios
Ruminales
Identificación de Protozoos ruminales
 Como nombrar las partes de un
protozoo.
 Parte bucal hacia delante se le marca a
las 12 hrs.
 La parte mas cercana al observador se
le denomina superficie superior y la
contraria se le denomina superficie
inferior.