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Problemas de preparación de soluciones
1.
Para la extracción de una enzima se necesita preparar la siguiente solución
amortiguadora: 250 mM Sacarosa, 2 mM EDTA, 1 mM ATP, 70 mM Tris/HCl pH 8.0,
BSA 1% y 15 mM -mercaptoetanol. Datos: peso molecular de la sacarosa es 342.3
g/mol, EDTA 368.4 g/mol, BSA 66.43 g/mol. El ATP fue preparado previamente y la
solución está a una concentración de 300 mM pH 7.0 (ya que el ATP se hidroliza
fácilmente a pHs ácidos), Tris o Trizma base (sólido) tiene un pH 9.0 en solución,
peso molecular 121.1g/mol y disponen de HCl para ajustar el pH. El mercaptoetanol es líquido, peso molecular 78.13 g/mol, =1.115g/mL, pureza 99%.
2. Par la detección de fosfatos por el método de Summer se necesita preparar 6.6% de
molibdato de amonio en 7.5 N de H2SO4. Peso molecular H2SO4 49 g/mol, =1.84
g/mL, pureza 99.4%.
3. Se necesita tener lista una solución amortiguadora denominada de transferencia de
proteínas, la cual contiene 25 mM de Trizma Base, 192 mM Glicina, 20% Metanol y
0.02% SDS. Peso molecular glicina 75.07 g/mol.
4. Se necesita preparar una solución 4 M wormanina, tomando en consideración que
el reactivo lo venden en un vial que contiene 0.25 mg y una vez abierto hay que
disolverlo todo:
a. ¿Cuál es el volumen total de la solución que se tendrá que preparar?
b. ¿Cuál será el volumen total de la solución si en lugar de preparar 4 M
wormanina, se hiciera una solución a 400 M? peso molecular wormanina 428.4
g/mol.
c. ¿Qué volumen de wormanina necesitan añadir a 2 mL de una solución en la que
se incuba tejido adiposo de rata, si tienen un stock preparado de 4 M wormanina
y desean que la concentración final sea de 100 M?
d. Y si usarán el stock 400 M ¿qué problemas encontrarían para tener 2mL de
solución 100? Y ¿cómo lo resolverían?
5.
Las soluciones que llevan reactivos susceptibles a procesos redox, generalmente se
preparan justo antes de usarse. Un reactivo caro y que generalmente se utiliza para
medir actividad enzimática es el NAD+. Se necesita preparar una solución que
contenga 5 mM de NAD+, 50 mM de amortiguador de fosfatos pH 7.0 y 1 M de NaCl.
Ya se tiene preparada la solución con todos los componentes excepto NAD +, el cual
para evitar desperdiciarlo se añadirá sólido. ¿Cuánto de NAD+ hay que pesar? Peso
molecular 663.43 g/mol, volumen total de la solución 20 mL.