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Estructura y propiedades funcionales de proteínas de leguminosas LuisA.ChelGuerrero LuisCorzoRíos DavidA.BetancurAncona Luis A. Chel Guerrero.Doctor con especialidad en alimentos, egresado de la Escuela nacional de Ciencias Biológicas del Instituto Politécnico nacional. Investigador nacionalnivelIdelSnI.Representante del grupo de investigación del Programa IberoamericanodeCienciay TecnologíaparaelDesarrollo, consedeenArgentina. Luis Corzo Ríos. Maestro en ciencias con especialidad en alimentos, por la Escuela nacional de Ciencias BiológicasdelInstitutoPolitécnico nacional. • Revista de la Universidad aUtónoma de YUcatán Figura1 Estructura primaria R1O + H3n—C—C HO H R2 O + + H—n—C—C _ H HO H2O R1OR2O + H3n—C—C—n—C—C _ H HHO 34 • La estructura primariaestádeterminadaporlasecuenciadeaminoácidos.Esdecir,lasproteínas se diferencian por su número y composición de aminoácidos y por el orden de ellos en sus cadenaspolipeptídicas(Figura1). • La estructura secundaria consiste esencialmente en la relación espacial de un aminoácido con respectoalquelesigue,alolargo de la cadena polipeptídica. Hay variostiposdeestructurasecundariaenlasproteínas:enunode ellos se puede adoptar (plegamiento)laformadeαhéliceyen otro la conformación de lámina plegada. Las combinaciones de David A. Betancur Ancona.Doctorencienciasconespecialidad en alimentos, egresado de la Escuela nacional de Ciencias Biológicas del Instituto Politécnico nacional. Investigadornacionalnivel1 delSnI,con14publicaciones en revistas arbitradas y 10 artículosdedivulgación. E S T R U C T U R A D E L A S P R O T E ín A S Las proteínas son moléculas muy complejas;presentanunaestructura lógica y funcional específica para cadaunadeellas;tienencomocaracterísticacomúnquesusunidadesestructuralessonlosaminoácidos.Los aminoácidos se encuentran unidos entresímedianteunionescovalentes conocidoscomoenlacespeptídicos y, según el tamaño de las cadenas, puedenserdesdeunasimpleunión de dos aminoácidos llamados dipéptido,hastagrandesmacromoléculas de proteína, pasando por las detamañomedianoopolipéptidos. Los niveles de organización de las proteínasson:estructurasprimaria, secundaria,terciariaycuaternaria. U Estructuraypropiedadesfuncionalesdeproteínasdeleguminosas estasestructurassecundariasdan origenaarreglosgeométricosespecíficosquesepresentanenlas proteínas,losquesonconocidos comomotivos(Figura2). • Variosdeestosmotivossecombinan para dar origen al otro nivel de estructura: la terciaria, y es entonces conocido como dominio. éstos son clasificados en tres categorías principales: una formada exclusivamente de α-hélices,otradeláminasβ,otra deláminasβparalelasrodeadas deαhélicesyfinalmentelasque nocorrespondenapequeñasproteínas y que parecen versiones distorsionadas de las anteriores (Figura3). Figura2 Estructura secundaria •Laestructura cuaternariaserefiere alarregloespacialdeunaproteína que contiene varias cadenas polipeptídicasyeslamaneraen quecadacadenapolipeptídicaen laproteínasearreglaenelespacio conrelaciónalasotrascadenas. Cada una de esas cadenas es conocidacomounasubunidado protómeroyelcomplejocuaternarioesentoncesunaproteínaoligoméricaomultimérica(Figura4). C L A S I F I C A C I ón D E L A S P R O T E ín A S Lacomplejidadyladiversidadson características predominantes de las proteínas, por lo tanto, resulta difícil establecer una clasificación Figura3 Estructura terciaria número 227 • cUarto trimestre de 2003 • 35 LuisA.ChelGuerrero-LuisCorzoRíos-DavidA.BetancurAncona rigurosa;sinembargo,losdiversos métodosparaclasificarlassebasan en cuatro criterios fundamentales: composición, forma, solubilidad y función biológica. La clasificación másutilizadaparafinesprácticoses deacuerdoasusolubilidad,siendo elmétododeOsborne,elmásconocido y que reporta cuatro tipos de proteína(Ibáñez,1991). a) Albúminas,solublesenaguayen solucionessalinasdiluidas;precipitan en soluciones de sulfato de amonio a una concentración cercanaalasaturación. b)Globulinas,generalmenteinsolublesenaguaperosolublesensolucionessalinasdiluidas,ejemplo deéstaseslamiosina(Gueguen yCerletti,1994). c) Prolaminas, estas proteínas son solublesenetanol50-80%.Constituyen un grupo cuyo nombre se originó por el alto contenido de prolina y nitrógeno amídico proveniente de la glutamina, queeselaminoácidopresenteen altascantidadesyquejuntosen algunos casos llegan a ser hasta el 50% del nitrógeno del grano (Segura-nieto y Jiménez Flores, 1999). d)Glutelinas, que se caracterizan por ser solubles en medio ácido o alcalino, como es la oricenina del arroz. Las glutelinas cuyo representante más conocido son las gluteninas aisladas del trigo (HuangyKhan,1997). Las fracciones más importantes delasleguminosassonlasalbúminas y las globulinas, mientras que Cuadro1 Composición de proteínas de leguminosas según la clasificación de Osborne (g/100 g de proteína) Grano deleguminosa Fracciones Albúminas Globulinas Prolaminas Glutelinas 27.6-36.6 35-39.3 0.1-0.2 0.4-0.2 Frijolcomún1 Canavalia2 14 66 14 0.8 Canavalia3 12 79 6 0.3 Lupino4 11.2 71.8 1.0 5.5 Chícharo5 21 66 ——— 12 Soya6 10 90 0 1 Phaseolus vulgaris (GujskayKhan,1991) 3 Canavalia gladiata (Samonteycol.,1989) 5 Pisum. Sativum (Fukushima,1991) 36 • Revista de la Universidad aUtónoma de YUcatán 0 2 Canavalia ensiformis (Samonteycol.,1989) 4 Lupinus mutabilis Sweet(Acuñaycol.,1996) 6 Glicine max (Fukushima,1991) U Estructuraypropiedadesfuncionalesdeproteínasdeleguminosas paraelcasodeloscerealessonlas prolaminas y glutelinas. Las albúminas incluyen algunas moléculas queposeenpropiedadesfuncionales y muchas son enzimas que metabolizanlassustanciasalmacenadas enlasemilla,comoporejemplolas glicosidasas y las proteasas, que tienen un papel importante en la degradación proteínica durante la germinación.Otrasparticipanenla defensa de la planta, como son los inhibidoresdetripsinaylaslectinas (GueguenyCerletti,1994). La distribución de las proteínas dealmacenamientoenlasleguminosas,deacuerdoconsusolubilidad, revelaquelasglobulinassonelgrupoprincipalyaqueselesencuentra enlamayoríaconunintervalode35 a 72% (Cuadro 1); llegando a contenidostanaltoscomo90%parala soya(Utsumi,1992)ypasandopor el71%enellupino. en gran medida de esa funcionalidad, ya que dependiendo de ella se puedenemplearendiversostiposde productos y a la vez juega un papel importanteenlaaceptaciónporparte delconsumidor. Puedenagruparseentresgrupos (Fennema,1996;Damodaran,1997): 1.-Propiedadesdehidratación,que dependen principalmente de la interacción proteína-agua y son aquellascomolasorcióndeagua, absorción y retención de agua, solubilidad, dispersabilidad y viscosidad. 2.-Propiedadesquedependendela interacción proteína-proteína y Figura4 Estructura cuaternaria FUnCIOnALIDADDELAS PROTEínASEnLEGUMInOSAS Laspropiedadesfuncionaleshansido definidas como cualquier propiedad fisicoquímica de las proteínas, que afecta el comportamiento y característicasdelosalimentosenloscuales seencuentranosonagregadasyque contribuyealacalidadfinaldelproducto(Figura4).Estascaracterísticas pueden ser sensoriales, nutricias y bioquímicas. La aplicación práctica queunaproteínapuedetenerdepende número 227 • cUarto trimestre de 2003 • 37 LuisA.ChelGuerrero-LuisCorzoRíos-DavidA.BetancurAncona sonaquellascomolagelificación, coagulación, elasticidad, cohesividad,durezayadhesividad. 3.-Propiedades de superficie, que d e p e n d e n d e l a i n t e r a c c i ó n de la proteína con dos fases inmiscibles: agua / aceite, agua / aire que son la emulsificación, espumado,formacióndepelícula lipoproteínica, capaz de enlazar lípidos. Los parámetros estructurales en relaciónconlafuncionalidaddelas proteínasson:a)losparámetrosesféricoscomosoneltamañoyforma molecular, flexibilidad molecular y contenido de grupos SH/SS b) la hidrofobicidad, superficial y total, yelbalancehidrofóbico/hidrofílico c) los parámetros eléctricos, como son la carga neta y superficial y d)losparámetrostermodinámicos, tales como la entalpía de desnaturalizaciónylatemperaturadedesnaturalización. 1. La solubilidad de la proteína se define termodinámicamente comolaconcentracióndeproteínaeneldisolventeenestadode equilibrio en un sistema de una o dos fases, a una temperatura y presión dadas. Para que esto ocurra se requiere de un estado inicialsólidobiendefinidoyun estadodesoluciónfinal. 2. Laemulsiónesdefinidacomola 38 • Revista de la Universidad aUtónoma de YUcatán dispersión o suspensión de dos líquidos inmiscibles, en la cual intervienenfuerzasdeatracción, fuerzasderepulsión,fuerzas"estéricas"yfuerzasdeagotamiento. 3. Laespumasedefinecomounsistema coloidal bifásico donde las burbujasdegas(aireoCO2)constituyenlafasedispersagaseosaque estárodeadadeunafasecontinua de líquido. En este esquema hay dos distintas fases, la efectividad delaencapsulacióndelgas(capacidadespumante)ylavidamediade duracióndelaespuma(estabilidad delaespuma). 4. La capacidad de absorción de aguaindicalaaptitudaembeber agua en su estructura en forma espontánea, cuando se le pone encontactoconaguaatravésde una superficie que se mantiene húmedaoporinmersión. 5. Lacapacidadderetencióndeagua eslaaptituddeunmaterialhidratadoareteneraguafrentealaacción deunafuerzaexternadegravedad centrífugaodecompresiónycomprendelasumadelaguaenlazada, aguahidrodinámicayaguafísicamenteatrapada,siendoéstalaque contribuye en mayor proporción quelasotrasdos. 6. La viscosidad puede ser definida comolaresistenciaalflujoqueuna capa de un material presenta al deslizarse sobre otra, su comportamientopuedeserdescritosegún U Estructuraypropiedadesfuncionalesdeproteínasdeleguminosas laleydenewtonono(newtoniano ononewtioniano)ygeneralmente las proteínas se comportan como fluidosnewtonianossolamenteen bajas concentraciones, siendo el casomáscomúnelcomportamientopseudoplástico. 7. La gelificación es la formación de una red tridimensional que embebealdisolventeyloinmoviliza, exhibiendo propiedades microestructurales y mecánicas muydiversasyestaredseforma a través de enlaces covalentes y nocovalentes.Elgelseconsidera como una fase intermedia entre unsólidoyunlíquido. U T I L I Z A C I ón D E L A S P R O T E ín A S V E G E TA L E S E n L A F O R M U L A C I ón D E A L I M E n T O S Enlaelaboracióndealimentosprocesados,lasproteínas,comogrupo o individualmente, son de gran importancia por sus propiedades fisicas,químicasyfuncionales,que proporcionan productos de buena calidadyfacilitansuprocesamiento. La importancia de las propiedades funcionalesparalaindustriadealimentospuedesermedidaporelnúmerodeingredientesespecializados requeridos, como los mencionados enelCuadro2. Cuadro2 Principales propiedades funcionales de las proteínas, sus fuentes y aplicaciones (Mattews,1989;Hall,1996) Funcionalidad Calidaddeseada Aplicaciones Sabor blando, enlazamiento de agua, emulsificación,gelificaciónotexturización Productoscárnicos Saboracarne,aroma,color,aguayaceite, textura Mariscos Color,sabor,apariencia(brillantez), textura Imitacióndequeso Color,sabor,enlazamientodeaguay grasa,fusión,elasticidad Blancura, sabor blando, gelificación y emulsificación,fusióndelgelyelasticidad Cubiertadebatidos Espumadensa,blancura,estabilidaddela espuma Capacidadespumante,estabilidaddela emulsiónydelaespuma,solubilidad Lechedesoya ultrapasteurizada Sabor,estabilidaddelaemulsión, solubilidad Capacidademulsificante,saborblando, estabilidaddelaemulsión,solubilidad Bebidasnutrimentales paraniñosyadultos Sabor,color,estabilidaddelaemulsión ydelasuspensión,habilidadpara incorporarminerales Saborsuave,blancura,solubilidad, estabilidaddelaemulsión Productosdepanadería Retencióndehumedad,volumenytextura delahogaza Tofuinstantáneo Textura,sabor Blancura,saborblando,solubilidad, gelificación Enlazamientodeagua,formacióndela interfase,gelificación Gelificación número 227 • cUarto trimestre de 2003 • 39 LuisA.ChelGuerrero-LuisCorzoRíos-DavidA.BetancurAncona En gran medida, las semillas de lasleguminosascomestiblessonnutrimentalmenteimportantes,siendo reconocidascomolaprincipalfuente deproteínasdebajocostoenladieta del hombre, ya que su contenido oscilade20a40%,elcualessuperior al de otros vegetales como los cereales que tienen entre 7 y 14%. Sontambiénunaimportantefuente de proteínas para aves de corral y otros animales monogástricos, que proporcionanlacarneparaelconsumohumano.Asimismo,suministran calorías cuantificadas hasta en un 85%delosrequerimientosmundiales, además de las vitaminas y mi- Figura5 Diversasvariedadesdeleguminosas 40 • Revista de la Universidad aUtónoma de YUcatán nerales,importantesenlanutrición humana(Lumen,1990). De las más de 18,000 especies de leguminosas que existen, sólo unas 20sonlasqueseincorporanalaingestahumanaenformaimportantey unadocenademanerageneralizada. Otrassonpococomunesenladieta, debidoprincipalmentealapresencia decomponentesantinutricios,aunque sonutilizadasporciertossegmentos delapoblación(Figura5). Algunos avances se han logrado para incrementar la utilización extensivadeleguminosasnotradicionales,atravésdelapreparación deharinas,concentradosyaislados U Estructuraypropiedadesfuncionalesdeproteínasdeleguminosas proteínicos.Comoejemplosepuedencitarlosaisladosproteínicosde lupino(Lupinus albus)queseincorporanenlalechequesedistribuye atravésdelProgramanacionalde Desayunos Escolares en Chile; el dehaba(Vicia faba)queseproduce a nivel piloto en Inglaterra y el de chícharo(Pisum sativum)enCanadá, con explotación a nivel comercial. Actualmentesepretendeincrementarelusodeestasfuentesvegetales promisoriascomoingredientesfuncionalesenalimentosparamejorar lacalidadnutriciadelosproductos yporrazoneseconómicas. Entre los productos de leguminosas que se utilizan actualmente en la industria de los alimentos se encuentranlasharinasysémolas,los concentradosdeproteínaylosaisladosproteínicos.Losconcentradosde proteínacontienenarribadel65%de proteína, pero menos del 90%. Los concentradossongeneralmentelibres desabor,olorytienenpropiedades funcionalestalescomoabsorciónde agua y grasa, los cuales los hacen apropiadosparaelusoenproductos alimenticios,comopan,cerealespara el desayuno, productos de la carne (salchichas, carne molida y otros) y en alimentos infantiles. Debido a la calidad que presentan, pueden incluirseenlaalimentaciónhumana y compararse con la proteína de la carne, leche y huevo por contener todoslosaminoácidosesenciales. Enlaactualidadlosproductosa baseproteínavegetalqueseutilizan conmásfrecuenciasonloselaboradosconsoya.éstosseusancadavez másendiferentessistemasabasede carneprocesada,siendoeláreamás comúndeusodomésticoactual,las carnes emulsificadas (salchichas) ylascarnesmolidas(carnemolida deresparahamburguesa),alimentos de origen marino, alimentos para mascotas, productos de tipo lácteo, productos de panificación, pastas para sopa, etcétera. Como fuentealternativaalasoya,anivel experimentalsehanevaluadoenla Facultad de Ingeniería Química de laUniversidadAutónomadeYucatánlaspropiedadesfuncionalesde harinasyconcentradosprovenientes deleguminosassubutilizadas,como son la Canavalia ensiformis, Mucuna prurienes, Phaseolus lunatus y Vigna unguiculata.LoshallazgosmásrelevantesseencuentranenelCuadro3. SepuedeobservarenelCuadro3 quelaspropiedadesfuncionalesson dependientes tanto de la cantidad como de la calidad de la proteína, porloqueenfuncióndesucomportamiento pueden ser incorporados comoingredientesendiferentesproductosalimenticios.Enestesentido, ennuestraFacultadsehanrealizado trabajos adicionando concentrado proteínicodeP. lunatus endiversos productosalimenticios.Seenriquecieron botanas fritas ("churritos") número 227 • cUarto trimestre de 2003 • 41 LuisA.ChelGuerrero-LuisCorzoRíos-DavidA.BetancurAncona adicionándolesdeun5aun10%de concentrado proteínico. Se obtuvo un contenido de proteína de 15% para el producto adicionado con 10% de concentrado, así como un valordedigestibilidaddelaproteína de 72% para productos con 5 y 10% de concentrado. Cabe señalar quenosevieronafectadaslascaracterísticas sensoriales del producto, encontrandounaaceptaciónfavorableporlosjuecesenlaspruebassensoriales. También se enriquecieron tortillasysalchichastipofrankfurt, ennivelesde3.5,7.5y15%enpeso de la formulación respectiva, sin demeritarsuscaracterísticasdetextura y de aceptación por parte del consumidor,aunadoalincremento delvalornutritivoenfuncióndela cantidad de proteína incorporada. Elnivelóptimodeincorporaciónde concentradoproteínicoatortillasde maízresultóserde7.5%,conun23% deproteínaenelproducto,locual representaunimpactomuygrande en la calidad nutritiva del mismo. Elnivelóptimodeincorporaciónde concentradoproteínicoensalchichas fue de 3.5%, presentando valores deproteínade46%,locualinfluye demanerapositivaenelproducto, mejorandolacalidadfisicoquímica ynutriciadelmismo. C O n C L U S I ón En la actualidad las leguminosas son uno de los insumos nutrimen- Cuadro3 Valor de algunas propiedades funcionales de harinas y concentrados de leguminosas locales comparadas con la soya Leguminosa PropiedadFuncional Canavalia (Canavalia ensiformis) Frijolterciopelo (Mucuna pruriens) Frijolib (Phaseolus lunatus) Frijolx'pelon (Vigna unguiculata) Soya1,2 (Glycine max) H C AC H C C H A Solubilidad(%)apH7 60.8 28.5 30 15 37 5 nR 85 Absorcióndeagua(g/gmuestra) 3.8 2.5 2.1 2.7 3.5 2.5 1.8 4.4 Absorcióndeaceite(g/gmuestra) 3.2 2.7 3.13 1.8 4.5 2.3 0.6 1.5 Capacidadespumante(%)apH7 30 41 55 21 57 60 nR 48 Capacidademulsificante(%)apH7 50 52 50 48 50 55 nR nR Viscosidad(cP)apH7 7.3 3.3 nR 11.5 nR nR 65 H:harina;C:concentrado;A:aislado;nR:noreportado 1 Idouraineycol.(1991) 2 MoguelyChel(1990) 42 • Revista de la Universidad aUtónoma de YUcatán 3 U Estructuraypropiedadesfuncionalesdeproteínasdeleguminosas talmenteimportantesusadoscomo aditivosalimenticiosycomofuente deproteínasenladietadelhombre, sobretodoenaquellosquenopueden comprar productos de origen animal(carne)porsuelevadocosto. Las proteínas de las leguminosas, cuando son adicionadas a los alimentos, les confieren propiedades químicasyfuncionalesquemejoran suscaracterísticassensorialescomo sabor, olor, textura, palatabilidad. Una alternativa que pudiera resultareficazparamejorarlanutrición de la población mexicana, particularmente del medio rural, sería la adición de harinas, concentrado y/o aislados proteínicos obtenidos de leguminosas a sistemas alimenticios(tortillas,productoscárnicos, botanas, etcétera). Resultados de investigacioneshandemostradosu factibilidad tecnológica, teniendo además un impacto nutritivo muy favorable, sin demeritar las característicasorganolépticasydeaceptaciónporpartedelconsumidorde losproductosmodificados. R E F E R E n C I A S Acuña O, Castillo P, Orbea M. y Guerrero M.1996.Fraccionamientodeproteínasde Lupinoporsolubilidadydeterminación de pesos moleculares (Lupinus mutabilis Sweet).SimposioIberoamericanosobre ProteínasparaAlimentos.CYTED-InIA, BuenosAires,Argentina. 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