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Nombre del grupo: Estrategias Quimiopreventivas frente a Compuestos Carcinogénicos de la Dieta Dieta.. Acrónimo: EQUIMDIET. EQUIMDIET Web: http://www.ucm.es/info/nutricio/. http://www ucm es/info/nutricio/ E-mail: E mail: pmorales@vet pmorales@vet.ucm.es ucm es Keywords: Seguridad Alimentaria, Genotoxicidad, Apoptosis, Quimiopreventivos, Carcinógenos. De epartamento de Nutrición, Bromatología y Tecnología de los Alimentos. Facultad de Veterinaria, Universidad Complutense. Web: http://www.ucm.es/centros/webs/fvet/. E-mail: dp207@ucm.es Avda. Puerta de Hierro s/n, 28040-Madrid. Teléfono: 91-394374. Fax: 91-3943743. Nº total de integrantes: 6 N Nº de licenciados: 2 N Nº de doctores: 4 N Responsable del grupo: Pa aloma Morales Gómez, Gómez NIF: 00387908J. 00387908J Teléfono: 91-3943747. 91 3943747 E-mail: E mail: pmorales@vet pmorales@vet.ucm.es ucm es ¿Licenciado o Doc ctor? Doctor 1 Sala Estéril de Cultivos Celulares (con Filtro HEPA) 1. NPIP NDBA Objetivos: Evaluación de la citotoxicidad, genotoxicidad (daño al DNA), y estrés oxidativo de compuestos químicos presentes en los alimentos, utilizando modelos in vitro. Disulfuro de Sulfuro de Metodologías especializadas Dipropilo (DPDS) Dipropilo(DPS) 2 Cabina de Seguridad Biológica BIO-II-A 2. 3 Microscopio Óptico Olympus 3. 4 Microscopio de Fluorescencia Zeiss 4. 5 Incubador de CO2 5. 1. Ensayos de Citotoxicidad: Se utilizan algunos marcadores de citotoxicidad como son: la actividad mitocondrial (actividad de la enzima succinato mitocondrial, Método MTT), la permeabilidad de la membrana b (lib (liberación ió de d la l lactato-deshidrogenasa, l d hid Mé d LDH), Método LDH) la l pérdida é did de d potencial i l de d membrana mitocondrial (∆ψm), y el metabolismo energético (contenido en ATP). 2. Ensayos de Genotoxicidad: Ensayo Cometa (Determinación del daño al DNA): Inducción de la ruptura de las cadenas del DNA, del daño oxidativo: oxidación de purinas y pirimidinas y del daño alquilativo. l il ti 3. Ensayos de Mutagenicidad: utilizando bacterias (Test de Ames) y líneas celulares (Ensayo de Mutación Génica). 1 Título: EVALUACIÓN DE LA SEGURIDAD ALIMENTARIA DE MICROPARTÍCULAS (COLORANTES) Y 1. NANOPARTÍCULAS DE ORO Y PLATA EN CÉLULAS HUMANAS: ESTIMACIÓN DE SUS RIESGOS Y BENEFICIOS N P POTENCIALES. Entidad financiadora: Ministerio de Ciencia e Innovación. E R Referencia: AGL2010-16561, subprograma ALI. Acrónimo: SEGURNANO Alcance: Nacional 2 Título 2. Tít l : EVALUACIÓN Ó DE LAS ACTIVIDADES ANTITUMORALES DE MIELES DE DIFERENTES ORÍGENES Í B BOTÁNICOS (UNIFLORALES Y MULTIFLORALES) DE LA COMUNIDAD DE MADRID. Entidad financiadora: Programa de Creación y Consolidación de Grupos de Investigación BSCH-UCM(pendiente de E r resolución). resolución) Objetivos: Evaluar el efecto protector de compuestos organosulfurados, isotiocianatos, polifenoles, vitaminas, acidos grasos omega-3, etc. así como las interacciones entre los mismos (efectos sinérgicos, aditivos o antagónicos) frente a N N-nitrosaminas, nitrosaminas, aminas heterocíclicas e hidrocarburos policíclicos aromáticos presentes en los alimentos. A Acrónimo: ANTITUMIEL Alcance: Regional Metodologías especializadas 1. Ensayo Cometa: daño al DNA 2. Actividad de las isoformas enzimáticas humanas del citocromo P450 (Fase I): CYP 1A1 (Método de la O-deetilación de la 7-etoxiresorufina), CYP2E1 (Método de la hidroxilación del pnitrofenol) it f l) y CYP2A6 (Método (Mét d de d la l hidroxilación hid il ió de d la l cumarina). i ) 3. Actividad de las enzimas humanas de la Fase II: Determinación del glutation (GSH), de la superoxidodismutasa (SOD) de la catalasa y de la UDP-glucuroniltranferasa (UDP-GT). 1. Haza, A.I., Zabala, A. and P. Morales. 2004. Antiproliferative and protective effect of a Lb. plantarum strain of milk origin ag gainst cytotoxicity of N-nitrosamines and its induction on TNF-alfa, IL1-1 and IL-8 production. International Dairy Journal, 14: 29 9-38 (DOI: 10.1016/S0958-6946(03)00146-8). Factor de impacto: 2.031. 2. Arranz A N Haza, N., H A I García, A.I., G í A Delgado, A., D l d E Rafter, E., R ft J and J. d P. P Morales. M l 2007 Effects 2007. Eff t off organosulfurs, lf is sothiocyanates and vitamin C towards hydrogen peroxide-induced oxidative DNA damage (strand breaks and ox xidized purines/pyrimidines) in human hepatoma cells. Chemico-Biological Interactions, 169: 63-71 (DOI: 10 0.1016/j.cbi.2007.05.006). Factor de impacto: 3.09.0 3. Arranz N., Haza, A.I., García, A., Rafter, J. and P. Morales. 2007. Protective effect of vitamin C towards N- Objetivos: Determinar si los compuestos presentes en la dieta inducen apoptosis en líneas celulares tumorales humanas. Metodologías especializadas 1. Microscopía de fluorescencia: Tinción con Hoechst 33342 y con Naranja de Acridina. 2. Citometría de flujo: Contenido de ADN, Anexina, TUNEL, Actividad de Caspasas, Determinación de Proteínas Intracelulares, Especies Reactivas del oxígeno (EROs). 3 Western 3. W t Blot Bl t de las moléculas é implicadas en el proceso apoptótico ó niitrosamines-induced DNA damage in the single-cell gel electrophoresis (SCGE/HepG2 assay). Toxicology in Vitro, 21 1: 1311-1317 (DOI: 10.1016/j.tiv.2007.03.015). Factor de impacto: 2.193. 4. Arranz N., Haza, A.I., García, A., Moller, L., Rafter, J. and P. Morales. 2007. Protective effects of organosulfur co ompounds towards N-nitrosamines-induced DNA damage in the single-cell gel electrophoresis (SCGE/HepG2 as ssay. Food and Chemical Toxicology, 45: 1662-1669 (DOI: 10.1016/j.fct.2007.02.032). Factor de impacto: 2.186. 5. García, A., Haza, A.I., Arranz, N., Delgado, E. Rafter, J. and P. Morales. 2008. Organosulfur compounds alone or in n combination with vitamin C protect against N-nitrosodibutylamine and N-nitrosopiperidine-induced oxidative DNA damage in HepG2 cells. Chemico-Biological Interactions, 173: 9-18 (DOI:10.1016/j.cbi.2008.01.011). Factor de e impacto: p 3.077 6. Delgado, E., Haza, A.I., Arranz, N., García, A. and P. Morales. 2008. Dietary polyphenols protect against N- niitrosamines and benzo(a)pireno-induced DNA damage (strand breaks and oxidized purines/pyrimidines) in HepG2 p human hepatoma p cells. European p Journal of Nutrition,, 47: 479-490 ((DOI: 10.1007/s00394-008-0751-6). ) Fa actor de impacto: 1.899 Objetivos: Evaluar la producción de citoquinas por compuestos quimiopreventivos de la dieta Metodologías especializadas 1. Ensayos Inmunoenzimáticos ELISA: Se utilizan distintos formatos: ELISA Indirecto, Directo, Sándwich, Competitivo 7. García, A., Haza, A.I., Arranz, N., Rafter, J. and P. Morales. 2008. Protective effects of isothiocyanates alone or in co ombination with vitamin C towards N-nitrosodibutylamine or N-nitrosopiperidine-induced oxidative DNA damage in n the single-cell gel electophoresis (SCGE)/HepG2 assay. Journal of Applied Toxicology, 28: 196-204 (DOI: 10 0.1002/jat.1270). Factor de impacto: 2.127. 8. Arranz N., Haza, A.I., García, A., Delgado, E., Rafter, J. and P. Morales. 2008. Inhibition by vitamin C of apoptosis in nduced by N-nitrosamines in HepG2 and HL-60 cells. Journal of Applied Toxicology, 28: 788-796 (DOI: 10 0.1002/jat.1340). Factor de impacto: 2.127. 9. García, A., Morales, P., Arranz, N., Delgado, E., Rafter, J and A.I. Haza. 2008. Induction of apoptosis and reactive Objetivos: Estimación de los posibles riesgos derivados del empleo de nuevos nanomateriales (nanopartículas de oro y plata de diferentes tamaños) en contacto con los alimentos, así como sus posibles beneficios para la Industria Alimentaria. Metodologías especializadas ox xygen species i production d ti b N-nitrosopiperidine by N it i idi and d N-nitrosodibutylamine N it dib t l i i human in h l k leukemia i cells. ll Journal J l off Ap pplied Toxicology, 28: 455-465 (DOI: 10.1002/jat.1295). Factor de impacto: 2.127 10. Delgado, E., Haza, A.I., Arranz, N., García, A. and P. Morales. 2009. Myricetin, quercetin, (+)catechin and (-) ep picatechin i t hi protect t t against i t N-nitrosopiperidine N it i idi and d N-nitrosodibutylamine-induced N it dib t l i i d d DNA damage d i human in h he epatoma cells. Toxicology in vitro, 23: 1292-1297 (DOI: 10.1016/j.tiv2009.07.022). Factor de impacto: 2.473 1. Cultivo y manipulación de células humanas de hepatoma (HepG2), leucemia (HL (HL-60), 60), carcinoma mamario (Hs578T), fibroblastos de pulmón, (IMR90), fibroblastos epiteliales (NHDF), de tejido mamario (Hs 578Bst) y de adenocarcinoma de colon (Caco2), así como la determinación de la viabilidad celular, genotoxicidad y apoptosis (ver metodologías especializadas de las líneas de investigación 1 y 3). 2. Ensayos de absorción intestinal: evaluación de la integridad de la monocapa celular: Resistencia eléctrica transepitelial (TEER) y permeabilidad aparente. Evaluación de la actividad transportadora. 3. Estrés Oxidativo: determinación de Especies reactivas del oxígeno (EROs). 1 Almudena García, Paloma Morales, Nuria Arranz, Eugenia Delgado y Ana I. Haza. 2008. Free radical scavenging and anti1. apoptotic effects of vitamin C towards N-nitrosopiperidine and N-nitrosodibutylamine-induced apoptosis. 45th Congress of the E European Societies of Toxicology (EUROTOX 2008). Rhodes (Greece). Toxicology Letters, 180S: S181. Factor de impacto: 3.249. 2. Eugenia Delgado, Paloma Morales , Almudena García,, y Ana I. Haza. 2009. Differential apoptosis response of HL-60 and 2 H HepG2 cells to docosahexanoic acid. 46th Congress of the European Societies of Toxicology (EUROTOX 2009). Dresden (G Germany). Toxicology Letters, 189S: S68. Factor de impacto: 3.479. 3. Haza, A.I., García, A. and P. Morales. 2009. Vitamin C protects from oxidative DNA damage and apoptosis caused by food N3 N Nitrosamines. In: Handbook of Vitamin C Research: Daily Requirements, Dietary Sources and Adverse Effects. Eds: Kucharski, H Zajac, J. Nova Publishers, NY, USA. H., 1. Karolinska Institutet. Department of Medical Nutrition, Huddinge (Suecia). 2. University y of Applied pp Sciences of Osnabrück. Department p of Food Hygiene yg and Nutrition. Osnabrück, (Alemania). 4 Tesis Doctoral Europea. 2009. Efecto Protector de Compuestos Organosulfurados, Isotiocianatos y Vitamina C frente al Daño 4. al DNA Inducido por N-Nitrosodimetilamina y N-Nitrosopirrolidina Presentes en Alimentos: Mecanismos de Acción. Autora: N NURIA ARRANZ GUERRERO. Directoras. Paloma Morales y Ana I. Haza. Facultad de Veterinaria. Universidad Complutense de M Madrid. 5. Tesis Doctoral Europea. 5 Europea 2010. 2010 Efecto Protector de Compuestos Organosulfurados e Isotiocianatos Sólos o en Combinación con V Vitamina C frente al Daño Oxidativo al DNA Inducido por N-Nitrosodibutilamina y N-Nitrosopiperidina Presentes en los A Alimentos: Mecanismos de Acción. Autora: ALMUDENA GARCÍA PÉREZ. Directoras. Paloma Morales y Ana I. Haza. Facultad de V Veterinaria. Universidad Complutense de Madrid.