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Insectos y hongos asociados al chancro resinoso de los pinos causado por Fusarium circinatum en plantaciones de Pinus radiata en Cantabria. Bezos D., Fernández M., Martínez-Álvarez P., Lomba J.M, Diez J.J. Instituto Universitario de Investigación y Gestión Forestal Sostenible. Universidad de Valladolid – INIA. dbezosg@pvs.uva.es Introducción La enfermedad del chancro resinoso de los pinos (PCD) está causada por el hongo Fusarium circinatum. Algunos insectos de la subfamilia Scolytinae como Pityophthorus pubescens o Hylurgops palliatus entre otros son capaces de trasportar las esporas de este hongo transmitiendo así la enfermedad de unos árboles a otros (Storer et al., 2004; Romón et al., 2007). El objetivo de este estudio es conocer los insectos y los hongos asociados a las plantaciones afectadas por F. circinatum. Fig 1. Localización de la zona de muestreo. Fig 2. Parcela de P. radiata afectada la enfermedad del chancro resinoso en Cantabria. Fig 3. Chancro provocado por F. circinatum en P. radiata. Fig 4. Aislado de F. circinatum en medio de cultivo PDA. Materiales y Métodos Se establecieron tres tipos de trampas en una parcela (mitad podada y mitad sin podar) de P. radiata afectada por la enfermedad: cuatro trampas multiembudo cebadas con pityol, seis trampas multiembudo cebadas con alfa-pineno y etanol y doce montones de entre 5 y 7 trozas cebo de P. radiata. Se recogieron semanalmente los insectos de trozas y embudos, además de muestras vegetales de xilema y floema de las trozas. Las muestras de material vegetal fueron cultivadas en medio de cultivo PDA y los insectos fueron cultivados en medio selectivo de Fusarium (FSM). Las especies de hongos resultantes fueron clasificadas por morfotipos e identificadas mediante técnicas moleculares. F. circinatum fue identificado según el protocolo descrito por Schweigkofler et al. en 2004. El fragmento ITS de los demás morfotipos y el factor de elongación (TEF) de algunos hongos del género Fusarium fueron amplificados y secuenciados. Extracción de ADN Fenol PCR ITS 1F- ITS 4 CIRC 1 a-CIRC 4 a EF 1-EF2 Celofán Gene Bank Fig 5. Trampa multiembudo cebada con etanol y alfa-pineno Fig 6. Trozas cebo Fig 7. Insectos de la subfamilia Scolytinae. De izquierda a derecha: Ips sexdentatus, Hylastes ater, Hylastes angustatus, Hylastes attenuatus, Pityophthorus pubescens. Resultados Fig 8. Pasos para la identificación de las especies fúngicas: extracción de ADN, reacción en cadena de la polimerasa (PCR), secuenciación y búsqueda en la base de datos (NCBY). Tabla 3. Hongos aislados a partir de las trozas. Tabla 2. Hongos aislados a partir de insectos. Tabla 1. Insectos capturados según el tipo de trampa 160 140 Especies de hongos en insectos Especies de Insectos Número total Trozas Etanol Pityol 100 Hylastes attenuatus 85 83 2 0 Neonectria radicola 80 Hylastes angustatus 23 23 0 0 Penicillium spinolosum 120 60 40 Total number 20 Hylastes linearis Xyleborus dispar Xyleborinus saxeseni Ips sexdentatus Pityophthorus pubescens Crypturgus mediterraneus Hylastes ater Hylurgops palliatus Orthotomicus erosus Hylastes attenuatus Hylastes angustatus 0 Fig 9. Número total de insectos capturados con las trampas multiembudo y las trozas cebo. Candida fructicans Especies de hongos en trozas Pestalotiopsis sp. Mucor sp. Trichoderma sp. Sphaeropsis sapinea Fusarium sp. Hylastes ater 25 20 5 0 Orthotomicus erosus 30 30 0 0 Hylurgops palliatus 9 9 0 0 Ips sexdentatus 116 116 0 0 F.circinatum F. oxyosporum Fusarium lateritium Fusarium sp. F. circinatum F. sp. cf. heterosporum Pityophthorus pubescens 143 0 0 143 F. oxyosporum spp. Complex F. oxyosporum spp. complex F. avenaceum F. sp. cf. sporotrichioides Crypturgus mediterraneus 26 26 0 0 F. sp. cf. tumidum Xyleborinus saxeseni 22 1 21 0 Trichoderma atroviridae Penicillium glabrum Xyleborus dispar 4 0 4 0 Gliocladium roseum Trichoderma harzianum Hylastes linearis 1 1 0 0 Fig 10. DCA representando los hongos asociados a las diferentes especies de insectos. Referencias -Nirenberg H.I., O´Donnell K., 1998. New Fusarium species and combinations within the Gibberella fujikuroi species complex. Mycologia 90,434-458. -Romón P., Iturrondobeitia J.C., Gibson K., Lindgren B.S., Goldarazena A., 2007. Quantitative association of bark beetles with pitch canker fungus and effects of verbenone on their semiochemical communication in Monterrey pine forests in northern Spain. Community and Ecosystem Ecology 36, 743-750. -Storer A.J., Wood D.L., Gordon T.R., 2004. Twig beetles, Pityophthorus spp. (Coleoptera: Scolytidae),as vectors of the pitch canker pathogen in California. Canadian Entomologist 136, 685693. -Schweigkofler W., O’Donnell K., Garbelotto M., 2004. Detection and Quantification of Airborne Conidia of Fusarium circinatum, the Causal Agent of Pine Pitch Canker, from Two California Sites by Using a Real-Time PCR Approach Combined with a Simple Spore Trapping Method. Applied and Enviromental Microbiology 70, 3512-320. Fig 11. CCA representando la distribución de los hongos aislados de las trozas en función de las distintas variables ( tipo de tejido, tipo de troza, tipo de parcela y día). Agradecimientos F. avenaceum
