Download Salicilic acid effect on carotenoid production and carotenogenic

Establecimiento de cultivos de callo y células en suspensión de Tamarindus indica L.
Francelvia Pérez-Hernández1, Jesús Hernández-Ramírez1, Leticia Buendía-González2 y Juan Orozco-Villafuerte1
1Facultad
de Química, 2Facultad de Ciencias, Universidad Autónoma del Estado de México, Campus El Cerrillo Piedras Blancas,
Carretera Toluca-Ixtlahuaca Km 15.5, C.P 50200, Toluca, Estado de México, México. E-mail: celviperez_qa@hotmail.com
Palabras clave: Tamarindus indica, cultivo de tejidos vegetales, producción de metabolitos secundarios
Introducción
El Tamarindo (Tamarindus indica L.) es una especie
vegetal utilizada tradicionalmente en México como materia
prima en el procesamiento de dulces y bebidas; diversos
estudios fitoquímicos han evidenciado que es una buena
fuente de antioxidantes, los cuales se pueden encontrar en
el fruto, semillas y hojas. De Caluwé y Halamová (2010). El
presente trabajo tuvo como objetivo establecer cultivos de
callo y células en suspensión de T. indica, productores de
compuestos fenólicos.
Metodología
Se sembraron semillas de T. indica en medio de cultivo MS
suplementado con sacarosa, carbón activado, ácido cítrico,
ácido ascórbico y diferentes concentraciones y
combinaciones de reguladores de crecimiento vegetal
(BAP, Kinetina y 2,4-D).
Una vez desarrolladas las plántulas in vitro (Fig. 1a), se
tomaron como fuente de explantes los hipocótilos y
epicótilos, cotiledones y hojas, los cuales fueron
sembrados en medio de cultivo MS fresco, suplementado
con la misma combinación y concentración de reguladores
de crecimiento vegetal ensayados en la germinación.
Todos los cultivos se incubaron por 25 días.
Trascurrido el tiempo de incubación, se cuantificó la
formación de callo en los diferentes tratamientos. Se
seleccionó el tratamiento que presento la mayor formación
de callo friable y la totalidad de los callos formados se
resembraron en este tratamiento con la finalidad de
generar suficiente biomasa para los siguientes
experimentos y análisis.
A partir de los callos generados, se establecieron cultivos
de células en suspensión. Los cultivos líquidos se
mantuvieron en agitación constante a 120 rpm, a una
temperatura de 25 °C bajo un fotoperiodo de 16 horas luz
y 8 horas de oscuridad.
Parte de la biomasa producida (células en suspensión) se
cosecho y liofilizó para posteriormente someter dicha
biomasa a una extracción metanólica. Al extracto obtenido
se le determinó la presencia y concentración de
compuestos fenólicos totales.
Resultados y Discusión
El porcentaje de germinación obtenido en el tratamiento
control carente de reguladores de crecimiento, fue del
100%, mientras que los porcentajes registrados por los
cultivos suplementados con los diferentes reguladores del
crecimiento ensayados, variaron entre un 40 a un 80%. Lo
cual indica que la presencia de los reguladores inhibe en
diferente magnitud el proceso germinativo. El efecto de los
reguladores también se pudo observar en la morfología de
las plántulas obtenidas.
Con respecto a la inducción de callogénesis, el medio de
cultivo suplementado con la combinación de 1 mg/L de
BAP y 2,4-D, fue el que registro la mayor cantidad de callo,
mientras que los hipocótilos fueron la mejor fuente de
explante para este propósito (Fig. 1b).
A partir del callo generado se establecieron cultivos en
suspensión. La cinética de crecimiento de los cultivos se
obtuvo a partir del registro de las variables peso fresco y
seco. Los cultivos alcanzaron la fase estacionaria de
crecimiento a los 17 días de incubación.
1a
1b
Fig. 1 a) Plántula de T. indica generada in vitro; b) hipocótilos con
presencia de callo.
Una vez terminado el tiempo de incubación de los cultivos
en suspensión, la biomasa se cosecho y se sometió a un
análisis cuantitativo para determinar la producción de
compuestos fenólicos totales. Los resultados obtenidos
indican que los cultivos están produciendo 3.16 mg
EAG/mL de extracto.
Conclusiones
Se estableció un protocolo que permitió generar cultivos de
callo y células en suspensión de Tamarindus indica
productores de compuestos fenólicos.
Agradecimientos
Los autores agradecen al CONACyT por el financiamiento
de este trabajo a través del proyecto CB-2011/167564.
Referencias
De Caluwé, E. Halamová, K., 2010 “Tamarindus indica L. – A
review of traditional uses, phytochemistry and pharmacology”.
AFRIKA FOCUS, Vol. 23, Nr. I pp.53-83.