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BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR
TALLER No 2: AND RECOMBINANTE
1. Escriba el organismo de origen y las secuencias de reconocimiento de las enzimas de
restricción EcoRI, BamHI, HindIII, PstI, PvuI, BglIII, SmaI.
2. En la siguiente secuencia sencilla de ADN encuentre y señale todas las potenciales
secuencias de reconocimiento de enzimas de restricción, en la forma de doble hélice de
ADN.
5’ TAGAATTCGACGGATCCGGGGCATGCAGATCATTCGCGTTAAGGCCTT 3’
3. Se pretende inserta un gen Z (humano) de 700 pb dentro de un plásmido PU19. Dicho
plásmido tiene 6.5 Kb de tamaño, presenta un sitio de reconocimiento para la enzima BamHI
en 1 pb; de la misma forma presenta un sitio de reconocimiento para la enzima BseRI a 500
pb del sitio 1 pb BamHI. El nuevo plásmido recombinante se obtuvo haciendo un corte con la
enzima de restricción BamHI en el sitio 1 pb, en donde se inserta el gen Z. Con la información
anterior:
a) Dibuje el plásmido recombinante, especificando sus características y diga tu tamaño.
b) Si se cortara el plásmido recombinante con una enzima X, que generara dos cortes, uno a
800pb del sitio 1 pb BamHI y otro a 1.5 kb del sitio de reconocimiento de BseRI. Cuantos
fragmentos se generarían y de qué tamaño serían. Dibuje el plásmido.
4. Como se observaría la electroforesis de la digestión del este plásmido si se cortara con:
a)
b)
c)
d)
e)
BamHI
Pvu I
Bam HI + Pst I
Hind III + Bam HI
Con las cuatro enzimas.
1500
Bam HI
Pvu I
420
Pst I
1250
710
Hind III
2030
Bam HI
5. usted corre una electroforesis, la cual se ve a continuación, para chequear el mapa de
restricción del plásmido pVU1 que se encuentra a la derecha.
Desafortunadamente usted olvido anotar el orden de ubicación de las muestras. Utilice el mapa de
restricción para decidir que fue sembrado en cada pozo.
1
2
3
4
5
6
Hind III
5681 pb
4781 pb
3806 pb
3545 pb
3111 pb
1875 pb
1236 pb
Pst I
1875 pb
PVU1
5681 pb
900 pb
1670 pb
1236 pb
Pst I
900 pb
BamHI
1670 pb
Pozo
1
2
3
4
5
6
Enzimas utilizadas en cada pozo
6. La enzima de restricción EcoRI corta el ADN en la secuencia GTTAAC, y HaeIII en la secuencia
GGCC. Como media (o promedio) ¿con que frecuencia corta cada enzima a una molécula de ADN
de doble cadena? Es decir, ¿Cuál sería la distancia media entre los sitios de restricción?
7. Un investigador ha purificado una molécula de ADN lineal y desea localizar a lo largo de ella
sitios de corte de enzimas de restricción. Para realizar su experimento tomo el ADN problema y
decide utilizar dos enzimas de restricción BamHI y PvuI. Toma el fragmento y tras la digestión con
BamHI, obtiene cuatro fragmentos uno de 800 pb, otro de 1600 pb, otro de 1000 pb y uno de 400
pb. Tras la digestión de cada uno de ellos con PvuI observa que el fragmento 3 produce dos
subfragmentos 600 pb (31) y 400 pb (32) y el fragmento 2, tres 800 (21), 200 (22) y 600 (23). Se
percata que ha cometido un error y por consiguiente decide realizar el experimento de nuevo pero
ahora invierte el orden de las enzimas de restricción. Tras la digestión de la molécula de DNA
completa primero con PvuI, obtiene cuatro fragmentos: A, B, C y D. Cuando éstos se tratan con
BamHI, el trozo D produce los fragmentos 1 y 31, el trozo A produce 32 y 21, y el trozo B produce23
y 4. El trozo C es idéntico a 22. Dibuje un mapa de restricción corregido de este ADN indicando el
tamaño de cada fragmento, el orden correcto del fragmento y el error que cometió el investigador.