Download teco diagnostics

TECO DIAGNOSTICS
LDH-L
CINÉTICO
_____________________________________________________________________________________________________
REACTIVO PARA LDH-L
Para la determinación cuantitativa de la actividad de Lactato Deshidrogenasa en
suero.
INTRODUCCIÓN.
La enzima Lactato Deshidrogenasa (LDH – L) se encuentra distribuida en los
tejidos, particularmente en el corazón, hígado, musculo y pulmón. La enzima en
circulación es una mezcla de cinco isoenzimas de diferente movilidad.
Los niveles elevados de LDH-L en suero se hayan en infractación de miocardio,
enfermedades del hígado, enfermedades renales, ciertas formas de anemias,
enfermedades malignas y distrofia muscular progresiva.
PRINCIPIO.
L-Lactato + NAD –LDH
Piruvato + NADH + H+
La Lactato Deshidrogenasa cataliza la oxidación de Lactato a Piruvato como
reducción simultanea de NAD + NADH. La reducción del NAD se puede medir
como aumento en la absorbancia a 340 nm y es directamente proporcional a la
actividad LDH-L en suero.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS.
La concentración se refiere al reactivo reconstituido.
L-Lactato 75 mM, NAD 5.5 mM, Buffer 80 mM, PH 9.0 +/- 0.1 (30º C).
Estabilizadores no reactivos.
PRECAUCIONES.
1.- Use el reactivo solamente para diagnostico in Vitro.
2.- Requiere de la práctica de las precauciones para todos los reactivos de
laboratorio. No se recomienda pipetear con la boca.
PREPARACION DEL REACTIVO.
Reconstituya de acuerdo a la etiqueta, invierta suavemente el vial para disolver
el contenido.
ALMACENAJE DEL REACTIVO Y ESTABILIDAD
1.- El reactivo seco debe ser refrigerado de 2-8° C.
2. El reactivo reconstituido es estable 14 días a 2-8° C. y por 8 horas a
temperatura ambiente.
DETERIORO DEL REACTIVO.
1.- Si el blanco de reactivo antes de agregar suero tiene una absorbancia que
excede los 0.45 a 340 nm, el reactivo puede deteriorado.
2.- Una indicación de deterioro es el no obtener resultados precisos en las
pruebas con el material de control.
COLECTA Y MANEJO DE LA MUESTRA.
1.- Se recomienda suero no hemolisado. Las células rojas contienen grandes
concentraciones de LDH.
2.- Separe el suero del coagulo rápidamente.
3.-Corra las muestras inmediatamente. La LDH en suero es estable por 2 o 3 días
a temperatura ambiente.
4.- El LDH de hígado es particularmente sensible y se destruye si se congela y se
descongela.
INTERFERENCIAS
1.- El oxalato, oxamatos, EDTA inhiben la LDH.
2.- Vea Young para obtener una lista de drogas y substancias que interfieren con
la determinación de LDH.
MATERIALES PROPORCIONADOS.
Reactivo de LDH-L.
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROPORCIONADOS
1.- Instrumentos de pipeteo.
2.- Tubos/ gradilla.
3.- Reloj.
4.- Block térmico. (37° C)
5.- Espectrofotómetro con capacidad de 340 nm.
PROCEDIMIENTO AUTOMATICO.
Consulte la aplicación apropiada para el instrumento.
PROCEDIMIENTO MANUAL.
1.- Reconstituya de acuerdo a las instrucciones.
2.- Pipetee 1.0 ml de reactivo en los tubos apropiados y pre-incube a 37º C por
tres minutos.
3.- Ponga en ceros el espectrofotómetro con blanco de agua a 340 nm.
4. Transfiera 0.025 ml (25 µL) de muestra en los tubos respectivos, mezcle e
incube otro minuto a 37ºC.
5.-Despues de un minuto lea la absorbancia (A1) regrese los tubos a 37º C.
6.- Lea la absorbancia de nuevo (A2) 2 minutos.
7.- El cambio de la absorbancia (A2-A1) multiplicado por el factor 6592 (vea
cálculos) da el resultado en IU/L
8.- Las muestras con valores mayores de 800 IU/L se deben diluirse 1:1 con
solución salina, córrase de nuevo y multiplica por dos.
NOTA:
1.- Si el espectrofotómetro que se esta utilizando requiere un volumen final de
1.0 ml para la lectura precisa, se debe unas 3.0 ml de reactivo y 0.1 ml de
muestra. El factor para esta condición es 4984.
2.- Si el espectrofotómetro cuanta con cubeta térmica, la mezcla de reacción
puede dejarse en esta mientras se toman lecturas.
CALCULOS.
Una unidad internacional (U/L) es la cantidad de enzima que cataliza la
transformación de un micro mol de sustrato por minuto.
IU/L = (A2-A1) x 1.025 x 1000 = (A2-A1) x 6592
1 x 6.22 x .025 ML
IU/L = (A2-A1) x 1.025 x 1000
1 x 6.22 x .025 ML
Donde:
(A2-A1) = Cambio en la absorbancia.
1.025 = Volumen de reacción total en ml.
1000 = Conversión de IU/Ml a IU/L
1
= Trayecto de la luz en cm.
6.22
= Absorción mili molar de NADH
0.025 = Volumen de la muestra en ml.
Para convertir a unidades (nkat/L) multiplique IU/L por 16.76.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO:
1.- El procedimiento mide la deshidrogena láctica total sin importar su origen
orgánico.
2.- La temperatura de reacción se debe mantener durante la reacción.
CONTROL DE CALIDAD.
Se recomienda que se incluyan controles en cada grupo de pruebas. Se pueden
usar controles comerciales con valores establecidos para LDH-L. El valor
asignado del material de control se debe confirmar con la aplicación
seleccionada. Si no se pueden obtener los resultados dentro del rango apropiado
de valores, es un indicio de deterioro de reactivo, malfuncionamiento de los
instrumentos o errores del procedimiento.
CORRECION DE TEMPERATURA.
1.- Si la reacción se hace a 37ºC y se reporta a 30, multiplique por 0.6
2.- Si la reacción se hace a 30ºC y se reporta a 37, multiplique por 1.7
VALORES ESPERADOS.
Hombre
50-166 IU/L (30ºC)
80-285 IU/L (37ºC)
Mujer
60-132 IU/L (30ºC)
103-227 IU/L (37ºC)
TECO DIAGNOSTICS
LDH-L
CINÉTICO
_____________________________________________________________________________________________________
CARACTERISTICAS ESPECÍFICAS DE DESEMPEÑO.
1.- Linearidad= 800 IU/L.
2.- Comparación: Un estudio de comparación realizado entre nuestro método y
otro similar resultó en una ecuación de regresión de y=1.06x – 10.68 y un
coeficiente de correlación de 0.98
3.- Estudio de precisión.
Concentración:
129.7
365.4
Entre prueba
D.E.
6.3
27.7
CV%
4.8%
7.5%
Concentración:
151.6
449.7
Prueba a prueba
DE
5.5
23.5
CV%
3.6 %
5.2%
REFERENCIAS.
1. Henry, J.B., Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods
W.B. Saunders and Company, Philadelphia, PA p. 365 (1979).
2. Tietz, R.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, W.B. Saunders and
Company, Philadelphia, PA p 652 (1976).
3. Henry, R.J. et al., Clinical Chemistry; Principles and Techniques, 2nd Ed.,
Harper and Row, Hagerstown (MD) pg 819-831 (1974).
4. Amador, E., et al, Clin. Chem. 9-391 (1963).
5. Kreutzer, H.H., et. al., Clin. Chem Acta 9:64 (1964).
6. Young, D. S., et al. Clin. Chem., 21:ID 432D (1975).
Fabricado por:
Distribuido por:
Grupo Tecnología y Laboratorios S.A de C.V.
T. (81) 8370 7992
www.grupotecnolab.com