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PATOGENIA DE EII EN PERROS
Karin Allenspach, Dr.med.vet., FVH, PhD, Dip ECVIM-CA, FHEA
Ames, IA, EE.UU.
INTRODUCCIÓN
La enfermedad inflamatoria intestinal (EII) es el nombre con el que conocemos a un grupo de trastornos
intestinales poco comprendidos que suelen afectar a personas y animales. Cada vez se considera que
EII, tanto en personas como en animales, es una consecuencia de una inflamación intestinal
descontrolada en respuesta a una combinación de factores ambientales, constituyentes de la luz
intestinal (sobre todo microbios y la dieta) y factores inmunorreguladores en individuos genéticamente
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susceptibles .
PAPEL DEL INFLAMASOMA EN LA EII CANINA
El inflamasoma es un complejo multiproteico intracelular que coordina la maduración de la Interleucina (IL)1beta y IL-18 en respuesta a patógenos y señales de peligro metabólicas. Estas moléculas tienen un papel
importante en EII humana y se incrementan en la mucosa durante los recrudecimientos agudos de EII.
Estudios recientes han demostrado desequilibrios en la expresión ARNm de varias proteínas señaladoras
de la vía del inflamasoma en perros con enteropatías crónicas. Por tanto, hemos realizado un estudio
recientemente en que investigamos la expresión de la proteína IL-1beta en el intestino de los perros con
EII.
Este estudio investigó la expresión de IL-1beta en la mucosa duodenal en perros con enteropatías crónicas
con respuesta a alimentos (ERA) antes y después del tratamiento y en perros sanos mediante
inmunohistoquímica. Se incluyó a nueve perros con ERA en el estudio y se trataron con una dieta
hidrolizada durante 6 semanas. Al final del estudio disponíamos de biopsias de 5 de estos perros. Se
calcularon los índices clínicos (CCECAI, Allenspach 2007) antes y después del tratamiento. Se utilizaron
biopsias de 11 perros Beagle sanos como control. Se realizó la inmunohistoquímica usando un anticuerpo
primario policlonal anti-humano de conejo a dilución 1:400 (ab34837, Abcam, Cambridge, UK) seguido del
dispositivo polímero peroxidasa de detección anti-conejo ImmPress™ proporcionado por Vectorlabs. Los
cortes se observaron a 40 aumentos usando un microscopio Olympus BX60. Se contaron las células en 10
regiones con vellosidades seleccionadas aleatoriamente y en 10 regiones de la lámina propia (LP) debajo
de las vellosidades y expresadas como células positivas por campo a gran aumento (cga). EL recuento total
de células productoras de IL-1beta se incrementó en perros ERA en comparación con los controles, y
disminuyó después del tratamiento con la dieta de eliminación (número medio de células positivas/cga en
perros sanos: 9,7, intervalo 1,5-33,2, ERA antes del tratamiento: 17,5, intervalo 1,1-54,5, ERA después del
tratamiento 6,5, intervalo 2,5-13; Kruskal Wallis p=0,03, prueba t pareada ERA antes frente a después del
tratamiento p=0,01): Curiosamente, esto no se reflejó en un cambio cuantitativo de las células productoras
de proteína IL-1beta en las vellosidades (número medio de células positivas/cga en perros sanos: 9,6,
intervalo 1,4-29,8, ERA antes del tratamiento: 10,6, intervalo 0,5-38, ERA después del tratamiento 3,8,
intervalo 1-6,5; Kruskal Wallis p=0,06), sino que estuvo causado mayoritariamente por un incremento de las
células positivas en la LP, que no volvió a las valores basales después del tratamiento (número medio de
células positivas/cga en perros sanos: 1,2, intervalo 0,1-5,2, ERA antes del tratamiento: 6, intervalo 0,620,6, ERA después del tratamiento 2,7, intervalo 1,5-7,3; Kruskal Wallis p=0,002, prueba t no pareada
sanos frente a ERA: p=0,0002; prueba t pareada antes frente a después del tratamiento p=0,003): El
incremento de células positivas a IL-1beta en la LP se correlacionó con el CCECAI (correlación de los
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rangos de Spearman r = 0,67). Para concluir, este estudio indica que la expresión de la proteína IL-1beta
se incrementa en perros con ERA en comparación con los perros sanos, disminuye tras el tratamiento, y se
correlaciona con CCECAI.
BASE GENÉTICA DE EII EN PERROS PASTOR ALEMÁN EN EL REINO UNIDO: RECEPTORES
TIPO TOLL
Estudios recientes en el laboratorio de este autor han identificado algunas similitudes den la patogenia
molecular de EII en perros Pastor Alemán (PPA) y seres humanos. El microbioma intestinal en PPA con
EII se altera y muestra parecidos con la disbiosis que se encuentra en personas con EII, con
determinadas especies bacterianas, tales como E.coli y Lactobacilli sobrerrepresentados en el
microbioma de PPA con EII2. Además, se halló una expresión diferencial alta y baja de los receptores de
reconocimiento de patrones TLR4 y TLR5 en la mucosa de los PPA afectados, lo que refleja hallazgos
similares en EII humana y patrones murinos de EII3,4. Se exploró la posibilidad de que variaciones
alélicas de los receptores de reconocimiento de patrones TLR2, 4 y 5 pudieran contribuir a una respuesta
funcionalmente anómala a la microbiota intestinal en PPA mediante al abordaje a un gen candidato para
identificar polimorfismos de un solo nucleótido (PSN)5. Se identificaron 3 PSN no sinónimos en el gen
TLR5 y 2 PSN no sinónimos en el gen TLR4 respectivamente y se evaluaron en un estudio de casos y
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controles y se halló que estaban asociados de forma significativa a EII . Es más, la mutación G22 en el
gen TLR5 canino (TLR5c), que estaba asociada a un incremento en 8 veces del riesgo de sufrir EII, se
ha demostrado que es funcionalmente hiperrreactiva a su ligando natural, la flagelina6. Estos estudios se
realizaron in vitro con células renales embrionarias humanas que fueron transfectadas con el TLR5c
mutante y salvaje, y confirmados con estudios ex vivo en sangre periférica de perros portadores de los
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alelos mutantes o salvajes . Es más, también se ha visto que la mutación G22 del gen TLR5 contribuye a
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un incremento del riesgo de desarrollo de EII en otras 38 razas además del PPA en el Reino Unido . Esto
se suma a la evidencia de que las mutaciones de este gen en particular pueden estar implicadas como
causa en la patogenia de la enfermedad.
BASE GENÉTICA DE EII EN PERROS PASTOR ALEMÁN EN EL REINO UNIDO: HAPLOTIPOS DLA
Los polimorfismos de los genes del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) clase II están
asociados a varias enfermedades inmunomediadas caninas, incluyendo alguna típicas del PPA tales
como la furunculosis anal y la queratitis superficial cónica. Además, la región del CMH clase II está
fuertemente asociada a la colitis ulcerosa, una forma de EII en humanos, además de a muchas oras
enfermedades inmunomediadas en personas. En consecuencia, quisimos investigar so los genes del
CMH clase II (DLA-DRB1, DLA-DQA1 y DLA-DQB1) estaban asociados a EII en PPA. Se extrajo ADN
genómico de restos de muestras diagnósticas de sangre con EDTA de 56 PPA con EII y 50 perros
mestizos geriátricos, de al menos 8 años de edad, sin historia de signos GI crónicos. Los perros con
historia previa o actual de enfermedad inmunomediada o dermatológica fueron excluidos del estudio. Se
determinaron los genotipos CMH clase II de todos los perros. El hapolotipo de riesgo DLADRB1*015:01/DQA1*006:01/DQB1*003:01 estaba significativamente asociado a EII, mientras que el
haplotipo DLA-DRB1*015:02/DQA1*006:01/DQB1*023:01 resultó ser protector para EII. La
homocigosidad para el haplotipo de riesgo incrementaba mucho más el riesgo de sufrir EII, lo que
sugería un efecto de dosis genética.
Los hallazgos de este estudio respaldan la naturaleza inmunógena de EII en PPA, y demuestran que es
probable que muchos factores genéticos tengan un papel.
¿A DONDE VAMOS AHORA?
Sin embargo, como revelaron los estudios de asociación del genoma completo (GWAS) en EII en seres
humanos, es improbable que las mutaciones que hemos hallado hasta la fecha sean las responsables de
toda la susceptibilidad genética de los PPA a EII. Es probable que la EII canina sea una enfermedad
poligénica, y que muchas otras mutaciones con poca penetrancia puedan contribuir a la susceptibilidad a
esta enfermedad. Estaría justificado usar otros abordajes como GWAS, además de estudios
epidemiológicos de los factores ambientales de riesgo, para intentar definir aún más la patogenia.
BIBLIOGRAFÍA
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