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CTK OnSite - Prueba Rápida de Dengue Ag (Cassette/Suero o Plasma) Número de Catálogo R00630C 4. Introduzca todos los reactivos a temperatura de interior (15º - 30ºC) antes de usar. 5. No utilice componentes de cualquier otra prueba como substituto a los componentes de este kit. 6. No utilice muestras de sangre bemolizada para esta prueba. 7. Utilice ropa protectora y guantes desechables mientras utilice los reactivos del kit y los especímenes clínicos. Lávese las manos con cuidado después de desempeñar la prueba.8. 8. Usuarios de esta prueba deberán seguir las precauciones universales US CDC para la prevención de transmisión de HIV, HBV y otros patógenos. 9. No fume, beba, o coma en áreas en las que los especímenes están siendo manejados. 10. Deseche todos los especímenes y materiales como desechos biológicos. 11. Maneje los controles de la misma forma que los especímenes de pacientes. 12. Los resultados del examen deberán leerse dentro de 25 minutos después de que el espécimen es aplicado a la ranura de muestra o a la almohadilla del dispositivo. Leer después de 25 minutos puede dar resultados erróneos. 13. No realice la prueba en un cuarto con mucho flujo de aire, por ejemplo, con ventiladores eléctricos o un fuerte aire acondicionado Diagnostico In Vitro INTENCION DE USO La prueba rápida OnSite Dengue Ag es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral para la detección cualitativa del antígeno del virus del dengue (Dengue Ag) en suero humano, plasma. Su intención de uso es diagnosticar la infección por virus del dengue . Cualquier muestra positiva confirmada con la prueba rápida OnSite Dengue Ag debe de ser confirmada con un método alternativo y hallazgos clínicos. RESUMEN Y EXPLICACION DE LA PRUEBA PREPARACION DE LOS REACTIVOS E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Todos los reactivos están listos para utilizar como fueron provistos. Almacene los dispositivos sin utilizar a temperaturas de 2º - 30º C. Los controles positivos y negativos deben guardarse a 2ºC - 8ºC, asegúrese que el dispositivo de prueba se encuentra en temperatura de interior antes de abrir. El dispositivo de prueba es estable hasta la fecha de expiración impresa en el sobre laminado. No congele el kit ni lo exponga a temperaturas mayores a 30ºC. Los virus del dengue, una familia de 4 serotipos distintos de virus de dengue (Den 1,2,3,4), de cadena simple, envueltos, virus de RNA positivo . El virus es transmitido por mosquitos diurnos de la familia Stegemyia, principalmente Aedes aegypti, y Aedes albopictus. Hoy, más de 2.5 billones de personas que viven en áreas tropicales Asia, África, Australia, y América que están en riesgo de infección por dengue. Un estimado de 100 millones de casos de fiebre de dengue y 250,000 casos de fiebre que amenazan la vida con dengue hemorrágico que ocurren alrededor del mundo1-3. La detección del anticuerpo Serológico IgM es el método más común para el diagnostico del virus del dengue. Últimamente, la detección de antígenos liberados durante la replicación del virus en pacientes infectados muestra resultados prometedores . Permite el diagnostico desde el primer día o al día siguiente de que comienza la fiebre hasta el 9no día, una vez que se acabe la fase clínica de enfermedad, permute el tratamiento temprano luego que se acabe la enfermedad, por lo tanto permite el tratamiento precoz en en lugar adecuadoy4-. La prueba rápida OnSite Dengue Ag esta desarrollada para detectar el antígeno de dengue circular en suero o plasma. La prueba puede ser realizada por personal sin capacitación ni equipo de laboratorio. COLECCIÓN DEL ESPECÍMEN Y MANEJO Considere cualquier material de origen humano como infeccioso y manéjelo utilizando procedimientos de bio-seguridad estándar. Plasma 1 Recolecte el espécimen de sangre en un tubo de colección de tapa lila, azul o verde (conteniendo EDTA, citrato o heparina, respectivamente en Vacutainer®) por punción. Separe el plasma por centrífuga. Cuidadosamente retire el suero en un nuevo tubo previamente etiquetado. A S 2 3 PRINCIPIO DE LA PRUEBA La prueba rápida OnSite Dengue Ag es un inmunoensayo cromatográfico prueba de cassette consiste en: 1) una almohadilla de conjugado con colorante tinto que contiene ratón anti-dengue NS1 conjugado con oro coloidal de conjugado de dengue Ab, 2( una tira de membrana nitrocelulosa que contiene una línea de prueba (Línea C) y una línea de control (línea C). La línea T esta previamente rociada anticuerpo ratón anti-dengue NS1IgG y la línea C esta previamente rociada con anticuerpos de los 4 serotipos del virus del dengue. Suero A M A G 1 2 3 4 Coleccione el espécimen de sangre en un tubo de colección de tapa roja (conteniendo ningún anticoagulante en Vacutainer®) por punción. Permita que la sangre se coagule. Separe el suero mediante centrífuga. Cuidadosamente retire el suero en un tubo nuevo previamente etiquetado. Los especímenes de prueba tan pronto y sea posible después de colectarse. En caso de no hacer la prueba inmediatamente, almacene los especímenes entre 2° y 8°C. Almacene los especímenes entre 2° y 8°C por hasta 5 días. Los especímenes deberán congelarse a -20°C para un mayor almacenaje. Cuando hay cantidad de muestra suficiente en el cassette, os extractos migran por acción capilar a lo largo del cassette de prueba. Si están presentes Los anticuerpos ratón anti-dengue NS1 en los extractos, se empatarían a los conjugados de proteína A. El inmunocomplejo es entonces capturado por la membrana por el ratón anti-dengue NS1 formando una línea T color tinto, indicando un resultado positivo de Dengue Ag. Evite ciclos múltiples de congelamiento-descongelamiento. Antes de realizar la prueba, lleve los especímenes a temperatura de interior lentamente y mezcle gentilmente. Los especímenes que contengan materia de partículas visibles deberán ser aclarados por centrífuga antes de realizar la prueba. La ausencia de la línea T sugiere un resultado negativo. La prueba contiene un control interno (Línea C) el cual debe exhibir una línea color tinto del inmunocomplejo de los conjugados de proteína A anticuerpo de proteína A conjugado-de-oro, independientemente del desarrollo de la línea T. De lo contrario, el resultado de prueba es inválido y el espécimen debe someterse a prueba de Nuevo con otro dispositivo. Paso 1: REACTIVOS Y MATERIALES PROVISTOS 1. 2 3. Cada kit incluye de 25 a 30 dispositivos de prueba, cada uno sellado en un sobre laminado y con tres artículos en su interior: a. Un cassette b. un desecante c. gotero de plástico PROCEDIMIENTO DE ENSAYO Paso 2: Paso 3: Paso 4: µl Nota: Practique un par de veces antes de la prueba para familiarizarse con el mini gotero. Para transferir la muestra de5 µl de volumen. Mantenga el gotero verticalmente y dispense el espécimen en la ranura de muestra, asegurando que no hay burbujas de aire. Después añada (alrededor de 70-100 µL) de diluyente inmediatamente. Diluyente de muestra (1 bote de 5 mL) Un inserto (instrucciones de uso) MATERIALES QUE PUEDEN SER PERO NO SE PROVEEN 1 2 Control Positivo Control Negativo 3 4 MATERIALES REQUERIDOS NO PROVISTOS REACTIVOS Y MATERIALES PROVISTOS Cronómetro o Timer Lancetero para sangre entera Lleve el espécimen y los componentes de prueba a temperatura de interior si se encuentran refrigerados o congelados. Mezcle el espécimen bien una vez descongelado antes de llevar a cabo el ensayo. Estando listo para llevar la prueba, abra el sobre y retire el dispositivo. Coloque la prueba en una superficie limpia y plana. Asegúrese de etiquetar el dispositivo con el número de identificación del espécimen. Llene el gotero plástico con el espécimen. El volumen de muestra es de alrededor 5 Resultado 1 gota de espécimen 1 gota de diluyente 15 minutos ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 1. 2. 3. Para uso de Diagnostico y In Vitro Este inserto deberá ser leído por completo antes de desempeñar el examen. No leer las instrucciones puede llevar a tomar resultados imprecisos. No abra el sobre laminado, hasta estar listo para llevar a cabo la prueba. No utilice dispositivos caducos. Paso 5: Paso 6: Inicie el Cronómetro Los resultados pueden leerse en 10 minutos. Resultados positivos pueden ser visibles tan pronto como en un minuto. No lea los resultados después de 25 minutos. Para evitar confusión, deseche el dispositivo luego de interpretar el resultado. CTK OnSite - Prueba Rápida de Dengue Ag (Cassette/Suero o Plasma) CONTROL DE CALIDAD REFERENCIAS El uso de los cassettes individuales de La prueba rápida OnSite Dengue Ag se describe en el procedimiento de ensayo, haga un control positivo y un control negativo (provistos bajo requerimiento si los controles de calidad no están disponibles en laboratorio) bajo las siguientes circunstancias para monitorear el desempeño del cassette. 1 2 3 4 5 Un operador usa el kit por primera vez, antes de probar con especímenes. Un nuevo kit se va a utilizar. Un nuevo embarque se kits de va a utilizar. La temperatura utilizada durante el almacenaje esta fuera de 2 – 30 C. La temperatura del cuarto de pruebas esta fuera de 15 – 30 C. 1. Gubler DJ, Clark GG. Dengue/dengue hemorrhagic fever. The emergence of a global health problem. Emerg Infect Dis 1995;1(2):55–57. 2. Gubler DJ, Trent DW. Emergence of epidemic dengue/dengue hemorrhagic fever as a public health problem in the Americas. Infect Agents Dis 1994;2:383–393 3. Monath TP. Dengue: The risk to developed and developing countries. Proc Natl Acad Sci U S A 1994;91:2395–2400. European Authorized Representative: Index of CE Symbol INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS DE ENSAYO The Netherlands. Tel.: +31 (0)6.516.536.26 Desempeño Clínico CEpartner4U , Esdoornlaan 13, 3951DB Maarn. 1. RESULTADO NEGATIVO: Si solo la línea C se desarrolla, la prueba indica que no hubo la detección de c. trachomatis en el espécimen. El resultado es negativo. Fabricado para: CTK Biotech, Inc. 6748 Nancy Ridge Drive, San Diego, CA 92121, USA Tel: 858-457-8698, Fax: 858-535-1739, E-mail: info@ctkbiotech.com 2. RESULTADO POSITIVO: Si tanto las líneas C y T se presentan, la prueba indica la presecia del Dengue Ag en el espécimen. El resultado es positivo. PI-R0030C Rev. C Effective date: June-01-2006 Spanish Version A S Muestras con resultados positivos deberán confirmarse con método(s) alternativo(s) y averiguaciones clínicas antes de determinarse como positivas. 3. INVÁLIDO: Si no se presenta una línea C, el ensayo es invalido independientemente de la línea T, como se indica. Repita el ensayo con un nuevo dispositivo. A G CARACTERÍSTICAS DE DESEMPEÑO Desempeño Clínico Un total de 114 muestras de sujetos susceptibles fueron examinados con la prueba rápida OnSite Dengue Ag y por una prueba comercial de EIA. La comparativa para todos los sujetos se muestra en la siguiente tabla: OnSite Dengue Ag – Prueba Rápida 1 2 3 4 5 6 7 M A Prueba de Latex Positivo Negativo Total Positivo 66 3 69 Negativo 2 43 45 Total 68 46 114 INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DE ENSAYO El procedimiento de ensayo y la interpretación de los resultados del ensayo deben seguirse de cerca al realizar pruebas de anticuerpo al virus del dengue en suero o plasma de individuos. La prueba rápida OnSite Dengue Ag esta limitada a la detección cualitativa de Dengue Ag en suero humano o plasma. La intensidad de la línea de prueba no tiene una correlación con la cantidad de anticuerpo presente en el espécimen. Un resultado negativo para un individuo indica la ausencia de dengue Ag detectable. Sin embargo, un resultado negativo no excluye la posibilidad de exposición a dengue Ag. Un resultado negativo puede ocurrir si la cantidad de dengue Ag presente en el espécimen esta por debajo de los límites de detección del ensayo, o los anticuerpos que se detectan no están presentes durante la etapa de la enfermedad en la que se colecto la muestra. Algunos especímenes que contienen inusualmente altas concentraciones de anticuerpos heterofilos o factor reumatoide pueden afectar los resultados esperados. Si persisten los síntomas, mientras no esta activo el resultado con la prueba rápida OnSite Dengue Ag . Se recomienda volver a tomar la muestra al paciente días después con un método de prueba alternativo tal como PCR, ELISA os resultados obtenidos con esta prueba deben solo ser interpretados con otros procedimientos de diagnóstico y averiguaciones clínicas. In Vitro Diagnostics