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ALGORITMO PARA EL DIAGNOSTICO
DE INFLUENZA
INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS
DEPARTAMENTO DE VIROLOGIA
LABORATORIO DE VIRUS RESPIRATORIOS
191
CONDICIONES PARA LA RECEPCIÓN DE MUESTRAS
Toma de muestra
Material
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm de poliestireno o vidrio, con tapa de rosca
(estériles),
conteniendo 2.5 ml de medio de transporte viral o solución salina estéril al 0.85% y gradilla
(para exudados faríngeos y nasofaríngeos).
Hisopos con mango de plástico estériles (con punta de rayón o dacrón) y abatelenguas
estériles (para exudados faríngeos).
Hisopos con mango de alambre flexible estériles (con punta de rayón o dacrón) (para
exudados nasofaríngeos).
Hielera conteniendo hielo o una bolsa refrigerante para mantener las muestras a 4°C.
Formato de la solicitud de procesamiento de muestras (anexo No. 4).
Guantes, cubrebocas, batas, tela adhesiva y bolígrafo.
Procedimiento
1.
2.
Antes de tomar las muestras es indispensable llenar con los datos que se solicitan el
formato de solicitud de laboratorio (ver anexo).
Las muestras deben ser tomadas tan pronto como sea posible en la fase aguda de la
enfermedad, de preferencia durante las primeras 96 horas de iniciado el cuadro clínico del
paciente. Para limitar la el posible contagio del tomador de muestras, todas estas deberán
tomarse asépticamente (usar bata, guantes y cubrebocas). Las muestras deben mantenerse
sobre hielo o en refrigeración, hasta su procesamiento.
Exudado faríngeo
El exudado faríngeo se recomienda para niños y adultos y la forma adecuada para tomarlo y
obtener una buena muestra para la detección de virus respiratorios es la siguiente:
1.
Se sujeta la lengua del paciente con el abatelenguas y se frota con firmeza la pared
posterior de la garganta (orofaringe) con el hisopo con mango de plástico estéril (con punta
de rayón o dacrón) al frotar obtenemos células infectadas por el virus; se debe tener
cuidado de no tocar la úvula para no provocar el vomito en el paciente.
2.
El hisopo se introduce en el tubo de ensayo (que contiene medio de transporte viral o
solución salina estéril), la parte del hisopo que contiene la muestra se mantiene dentro del
tubo, el resto se corta y se desecha, el tubo se cierra perfectamente y se mantiene a 4ºC.
3.
Cada tubo se marca colocando una tela adhesiva (evitar papel engomado, masking-tape o
“diúrex”), en la cual se escribe el nombre del paciente y la fecha de la toma.
4.
Los tubos con las muestras deben mantenerse en refrigeración o en la hielera con la bolsa
refrigerante si van a ser transportadas, (ver transporte de las muestras), hasta su
procesamiento en el laboratorio.
192
4-8°C
Exudado nasofaríngeo
1.
2.
El éxito del diagnóstico virológico depende principalmente de la calidad de la muestra, de
las condiciones de su transporte y del almacenamiento de la muestra antes de procesarla en
el laboratorio.
Las muestras para aislamiento de Influenza en cultivo celular o embrión de pollo, igual que
las muestras para la detección directa de antígenos virales o de ácidos nucleicos, deben
tomarse dentro de las primeras 96 horas del comienzo de los síntomas clínicos (durante la
etapa febril).
Procedimiento
Antes de tomar las muestras es indispensable llenar con los datos que se solicitan el formato de
solicitud de laboratorio (ver anexo SISVEFLU).
El exudado nasofaríngeo se recomienda para bebés y niños muy pequeños; la forma adecuada
para tomarlo y obtener una buena muestra para la detección de virus respiratorios es la siguiente:
1.
Recostar al paciente y elevar un poco su cabeza, introducir suavemente el hisopo con
mango de alambre flexible estériles (con punta de rayón o dacron), paralelo al paladar, casi
en su totalidad hasta llegar a la nasofaringe (aproximadamente 2.5 cm en adulto y un poco
menos en niños); una vez ahí, rotar suavemente el hisopo para frotar la pared de la
nasofaringe (al frotar obtenemos células infectadas por el virus) y retirarlo cuidadosamente
sin dejar de rotar. Esto se hace para ambas narinas con diferente hisopo.
2.
Introducir la punta del hisopo en el tubo de ensayo (que contiene medio de transporte viral
estéril o solución salina al 0.85% estéril), el resto se corta y se desecha, el tubo se cierra
perfectamente y se mantiene a 4ºC.
3.
Cada tubo se marca colocando una tela adhesiva (evitar papel engomado, masking-tape o
“diúrex”), en la cual se escribe el nombre del paciente y la fecha en que se hizo el exudado
faríngeo.
4.
Los tubos con las muestras deben mantenerse en refrigeración (o en la hielera con la bolsa
refrigerante si van a ser transportadas, ver transporte de las muestras), hasta su
procesamiento en el laboratorio.
Nota: Las muestras para aislamiento viral deberán refrigerarse inmediatamente después de
tomarlas y se deberán inocular lo antes posible, ya sea en embrión de pollo o en cultivo celular.
De no poder procesarse las muestras en las próximas 48 a 72 hrs, se mantendrán entre 4-8ºC.
Evitar mantener las muestras por mas de 5 días en refrigeración (muestra en medio de transporte
viral) o más de 24 horas si las muestras fueron recolectadas en solución salina, para que el virus
no pierda infectividad.
193
4-8°C
Hisopo de
rayón o
dacron
Medio de transporte
Para preparar 100 ml
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Albúmina bovina al 5 %............................................................ 10 ml
Gentamicina (4 mg/ml) ............................................................ 2.5 ml
Penicilina / estreptomicina (50,000 U/50,000 µg ..................... 1.0 ml
Fungizona (l mg/ml) ................................................................0.25 ml
NaHCO3 al 7.5 % .................................................................0.4 – 0.7 ml
Solución balanceada de Hank’s........................................... . 85.5 ml
Ajustar el pH de 7.0 a 7.2 y esterilizar por filtración.
Envasar 2.5 ml en tubos estériles.
Solución salina balanceada de Hank´s:
Componentes
g/litro
1.
NaCl......................................................................................... 8.0 g/l
2.
KCl........................................................................................... 0.4 g/l
3.
MgSO47H2O.............................................................................. 0.2g/l
4.
CaCl2H2O............................................................................ 0.185g/L
5.
Na2HPO4.............................................................................. 0.046g/l
6.
KH2PO4................................................................................. 0.06g/l
7.
Glucosa................................................................................... 1.0g/l
8.
NaHCO3.................................................................................. 0.35g/l
9.
Rojo de fenol........................................................................ 0.02g/l
Albúmina bovina al 5%
5 g de albúmina bovina fracción V en 100 ml de agua.
Esterilizar por filtración.
194
Muestras para control de calidad
1.
2.
Envio de laminillas (teñidas mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta y sin teñir
con su correspondiente hoja de trabajo) para llevar acabo aseguramiento de la calidad en el
InDRE.
Envió de sobrenadantes de muestras positivas y negativas al InDRE para llevar a cabo el
aislamiento del virus (se deberán enviar congeladas y en un lapso no mayor de 48 horas de
haber procesado la muestra).
HOJA DE TRABAJO PARA CONTROL DE CALIDAD
DE VIRUS DE INFLUENZA
SERVICIOS DE SALUD EN ______________
LABORATORIO ESTATAL DE SALUD PUBLICA
Fecha__________________________
No. de Placa:_____________
No. DE POZO
1
No. DE MUESTRA
DIAGNOSTICO
A
2
B
3
A
4
B
5
A
6
B
7
A
8
B
RESULTADO
Observaciones:
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Realizo:_______________________________
Vo.Bo. ______________________
195
Transporte de las muestras clínicas
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
Es importante tener en cuenta que los virus requieren de células vivas para replicarse,
consecuentemente la cantidad de virus no se incrementará después de ser tomada la
muestra, sino al contrario, declinará dependiendo de la temperatura y de otras condiciones.
Por lo tanto es importante que el tiempo en tránsito sea lo más corto posible: antes de 24
horas, si las muestras están en solución salina y máximo 5 días si el medio de transporte
contiene alguna proteína estabilizadora, las muestras siempre se transportan entre 4-8 ºC.
En el caso de haber sido tratada en el laboratorio los sobrenadantes se congelaran a -20ºC
transportándose rodeados de refrigerantes y hielo seco, los sedimentos se fijaran en
laminillas para inmunofluorescencia con teflón y se enviaran a temperatura de refrigeración.
Nota: Los laboratorios de la red que tienen la capacidad de realizar la prueba de
inmunofluorescencia indirecta y han sido liberados por el InDRE, enviaran todos los
sobrenadantes (en hielo seco) acompañados de una copia de su correspondiente solicitud de
laboratorio y sus resultados de inmunofluorescencia, para llevar acabo el aislamiento viral.
Los laboratorios de la red que tienen la capacidad de realizar la prueba de
inmunofluorescencia indirecta y no han sido liberados por el InDRE enviaran todas sus
laminillas para llevar acabo el aseguramiento de la calidad, acompañados de una copia de
su correspondiente solicitud de laboratorio y su hoja de trabajo con los resultados de sus
lecturas de inmunofluorescencia, así como los sobrenadantes (en hielo seco) para realizar el
aislamiento viral.
Una vez que las muestras han sido colocadas en el interior del recipiente térmico, ésta se
cierra y debe sellarse perfectamente con tela adhesiva.
El recipiente térmico debe rotularse de la siguiente forma:
Nombre del Centro de Salud, Clínica u Hospital que envía las muestras
Se debe enviar a:
Instituto de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos (InDRE)
Dirigido a: Q.B.P. Miguel Iguala Vidales, Jefe del Laboratorio de IRA’s
virales,
Tel. directo 01 55 53410404, conmutador 0155 53427550 ext. 372
miiguala@salud.gob.mx
196
SISTEMA NACIONAL DE S ALUD
Sistema de Vigilancia Epidemiológica de la Influenza (SISVEFLU)
Solicitud de procesamiento de muestra para casos de influenza
I. Datos del paciente
No. folio
Nombre
Dirección
Municipio o delegación
Ocupación
No. lab estatal
Edad
años meses días
Sexo
Teléfono
Estado
II. Síntomas
(1=SI ó 2=NO)
Fecha de inicio de los signos y síntomas de la enfermedad
Inicio súbito
Cefalea
Fiebre ( ? 39' C indic. temp.)
Dolor de garganta
Tos
Disfonía
Malestar general
Dolor abdominal (niños)
Mialgias
Conjuntivitis
Postración
Disnea
Rinorrea hialina
Cianosis
Otros (especifique)
Escalofrío
Congestión nasal
Si
¿Hubo contacto con otros casos de influenza?
¿Presenta alguna enfermedad crónica?
No
Si
Se ignora
Cual
Se ignora
¿Tuvo contacto con pollos, otras aves o cerdos
en los últimos 5 días antes de iniciados los síntomas?
Si
No
día/mes/año
En caso de respuesta afirmativa indicar lugar y fecha de contacto
¿Viajó 5 días antes de iniciada la enfermedad?
Si
No
día/mes/año
Si la respuesta afirmativa indicar lugar y fecha
¿Vacunación antiinfluenza?
Si
No
Fecha
¿Tratamientos individuales?
Si
No
Fecha
III. Estudio de laboratorio
Tipo de muestra:
Ex. Faríngeo
Ex. Nasofaríngeo
Lavado BronqueoAlveolar
Suero 1
Suero 2
Fecha de tom a
Nombre del médico
Institución
Domicilio
Teléfono
197
Bibliografía
1.
2.
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ALGORITMO PARA EL DIAGNOSTICO
DE IRAS VIRALES
INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS
DEPARTAMENTO DE VIROLOGIA
LABORATORIO DE VIRUS RESPIRATORIOS
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201
ALGORITMO PARA EL DIAGNOSTICO
DE IRAS VIRALES
INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS
DEPARTAMENTO DE VIROLOGIA
LABORATORIO DE VIRUS RESPIRATORIOS
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CONDICIONES PARA LA RECEPCIÓN DE MUESTRAS
PARA EL DIAGNOSTICO DE ADENOVIRUS SE UTILIZAN MUESTRAS FARINGEAS ANTES
DESCRITA LA METODOLOGIA, ADEMAS EN CASO DE CONJUNTIVITIS SE UTILIZARA LA
SIGUIENTE METODOLOGIA:
EXUDADO DE CONJUNTIVA
Este procedimiento tiene como finalidad unificar la forma adecuada para la toma de muestras
clínicas para diagnóstico de conjuntivitis por Influenza.
Va dirigido a todo el personal involucrado con la toma de muestras en los diferentes Centros de
Salud, Hospitales, el Departamento de Recepción de muestras.
Material:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Tubos de ensayo de 13X100 mm de poliestireno o vidrio, con tapa de rosca (estériles),
conteniendo 2.5 ml de medio de transporte viral o solución salina estéril.
Gradilla
Hisopos de Rayon o Dacron con mango de plastico estériles.
Hielera conteniendo hielo o una bolsa refrigerante para mantener las muestras a 4ºC.
Formato para el envío de muestras
Guantes, cubrebocas, bata y goggles o anteojos.
Tela adhesiva, bolígrafo.
Antes de tomar las muestras es indispensable llenar el formato de envío de solicitud de
laboratorio, en el cual se registra la fecha y el nombre de la persona a quien se debe enviar el
resultado, el nombre de la institución a la que pertenece, el domicilio y el teléfono en el que se le
puede localizar; los datos del paciente como su nombre completo, edad, fecha de nacimiento,
sexo (masculino o femenino), dirección, ocupación, fecha de inicio de la enfermedad (es
importante saberlo para un mejor diagnóstico), la sintomatología. También es necesario saber si
la persona tuvo contacto con casos semejantes, si ha efectuado algún viaje y a dónde (de esta
manera es posible detectar la presencia de brotes nuevos o es posible saber si la persona estuvo
en algún donde se sabe con anterioridad de la existencia de un brotes o epidemia). Debe anotarse
el tipo de muestra que se tomó (en este caso exudado de conjuntiva).
Para limitar la contaminación y el posible contagio del tomador de muestras, todas las muestras
deben tomarse asépticamente (usar bata, guantes, gogles o anteojos y cubrebocas); asi como
lavarse las manos inmediatamente después de tomar las muestras. Las muestras deben
mantenerse siempre sobre hielo o en refrigeración (4ºC) hasta su procesamiento.
Procedimiento
1.
2.
3.
Elevar un poco la cabeza del paciente, pedirle que vea hacia arriba, exponer la conjuntiva
inferior (jalando ligeramente el párpado inferior hacia abajo con el dedo índice) y la superior
e introducir el hisopo de Rayon o Dacron raspando vigorosamente ambas superficies
conjuntivales, rotando el hisopo durante el proceso de muestreo para asegurar que toda la
superficie de la conjuntiva se está muestreando, de tal forma que se puedan obtener células
infectadas por el virus.
Introducir el hisopo en un tubo de ensayo (con medio de transporte viral o solución salina
estéril, el tubo se cierra perfectamente y se mantiene a 4ºC.
Cada tubo se marca colocando una tela adhesiva (evitar papel engomado, "masking-tape" o
"diurex"), en la cual se escribe el nombre del paciente y la fecha en que se hizo la toma de
muestra.
203
4.
Los tubos con las muestras deben mantenerse en refrigeración (o en hielera con bolsas
refrigerantes si van a ser transportadas), hasta su procesamiento en el laboratorio.
Girar el hisopo
4 a 8°c
Hisopo de Rayon o Dacron
Bibliografia
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ALGORITMO PARA EL DIAGNOSTICO
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