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27 Prevalencia de Colonización por Enterococcus Vancomicina Resistente(EVR) en Pacientes Trasplantados Renales: Estudio Prospectivo de Vigilancia 16 min. Introducción: Las infecciones por Enterococcus Vancomicina Resistente (EVR) causan significativa morbi – mortalidad en pacientes trasplantados renales o en espera de trasplante. Se realiza un estudio prospectivo en estos pacientes con el objetivo de evaluar prevalencia y variables significativas asociadas a la colonización por EVR previamente y con posterioridad al trasplante. Métodos: Todos los pacientes adultos, mayores de 21 años, que presentaban estadio IV o V de insuficiencia renal crónica, en espera de trasplante renal y post trasplante renal fueron incluidos en el estudio. Datos demográficos y microbiológicos, así como el cultivo de hisopados rectales, fueron registrados para el análisis estadístico. Resultados: La portación fecal de EVR en pacientes trasplantados renales es comparable (12.31%) con la reportada para otros grupos de riesgo, aislándose en todos los casos Enterococcus faecium. La colonización por EVR no es una contraindicación para el trasplante renal en nuestro nosocomio. Aunque existe una fuerte 28 correlación entre colonización e infección, durante el período estudiado no observamos ninguna infección por EVR. El análisis de algunas variables significativas que fueron registradas en el presente trabajo, ponen de manifiesto la necesidad de implementar medidas de control de infecciones para disminuir el riesgo de colonización nosocomial con EVR en este grupo vulnerable. Muñoz M. S1; Minoli M. J1; Gasparotti, L2: Novoa P.3; Aiassa M. S1; Perlo O.1; 1 Sección Bacteriología. Servicio de Bioquímica. Hospital Córdoba 2 Lic en Enf. en Epidemiología del Comité de Infecciones Hospitalarias. 3 Servicio de Nefrología y Trasplante. Hospital Córdoba. Córdoba. República Argentina E-mail: munsol@hotmail.com prolongados, en los que han recibido tratamiento con antibióticos de amplio espectro (que no actúan sobre Enterococcus), inmunocomprometidos (trasplantados, oncológicos) o con enfermedades subyacentes serias (diabetes, insuficiencia renal y/o cardíaca, fallo hepático) y en aquellos sometidos a técnicas invasivas (catéteres vasculares, sondas urinarias, cirugías previas).(4 - 7) Las infecciones producidas por Enterococcus Vancomicina Resistente (EVR) son causa de una significativa morbi –mortalidad en pacientes hemodializados y trasplantados.(8, 9) Las producidas con mayor frecuencia por estos microorganismos son las infecciones urinarias,(10, 11) seguidas por infecciones intraabdominales, abscesos pélvicos, heridas post quirúrgicas y bacteriemias.(10 - 13) La prevalencia de colonización e infección por EVR es particularmente elevada en unidades de cuidado intensivo y salas oncológicas y de trasplante. (8, 9, 14 – 19) Introducción El nombre Enterococcus fue descripto por primera vez por Thiercelin en el año 1899 en Francia.(1) Los enterococos forman parte de la flora gastrointestinal, aislándose en más del 90% de los individuos sanos. En los últimos años, han llegado a ser una causa importante de infección nosocomial debido a la selección de cepas resistentes a una gran cantidad de los agentes antimicrobianos disponibles en el arsenal terapéutico.(2) La mayoría de las infecciones causadas por estos microorganismos en el ser humano se originan en la microflora intestinal del sujeto; aunque también se pueden transferir por diseminación nosocomial o a través de las manos del personal de salud o bien adquirirse por el consumo de agua o alimentos contaminados.(3) Las infecciones enterocóccicas son m á s f re c u e nte s e n l o s p a c i e nte s hospitalizados durante períodos Debido a su rápida diseminación, la posible transferencia de la resistencia a vancomicina a otros patógenos de mayor impacto clínico, como Staphylococcus aureus,(20) y las posibilidades terapéuticas limitadas para el tratamiento de las infecciones causadas por EVR, éstos se han convertido en un problema clínico importante. Los pacientes trasplantados serían más propensos a adquirir altas tasas de colonización e infección por EVR debido al frecuente uso de antimicrobianos, particularmente vancomicina antes y después del trasplante. Sin embargo, si bien el riñón es el órgano que se trasplanta con más frecuencia, muy poco se conoce acerca de su prevalencia y los factores asociados a la colonización fecal por EVR en estos pacientes. El objetivo de este estudio es evaluar la prevalencia de colonización fecal por EVR en pacientes renales e identificar factores asociados a esta portación previamente y con posterioridad al trasplante. Con este propósito se realiza un estudio prospectivo en pacientes en espera de trasplante renal, hemodializados y post trasplante. Materiales y Métodos El estudio es llevado a cabo en el Hospital Córdoba situado en la ciudad de Córdoba, entre el área de Bacteriología del servicio de Bioquímica y el servicio de Nefrología a partir de noviembre de 2007 hasta abril de 2009, habiendo sido aprobado por el Comité Institucional de Ética de la Investigación en Salud de este nosocomio polivalente. El diseño del estudio fue prospectivo, observacional, descriptivo y analítico. Se estudiaron 65 pacientes adultos, mayores de 21 años de edad, que presentaban estadio IV o V de insuficiencia renal crónica, en espera de trasplante renal y post-trasplante renal. Los pacientes fueron incluidos en el protocolo de estudio al momento de consulta bajo consentimiento por escrito para su participación en el mismo, habiendo sido informados de los riesgos y beneficios asociados. Se excluyeron todos los pacientes menores de 21 años como así también aquellos que presentaban todo tipo de patología anal, cualquiera sea y/o que no hubieran otorgado su consentimiento. La colonización por EVR se investigó en distintos grupos de pacientes, en diferentes períodos: 1) pacientes previamente trasplantados al inicio de la investigación; 2) pacientes en espera de trasplante; 3) pacientes recientemente trasplantados (de 1 semana de evolución). Se controló el registro de los pacientes para evitar su inclusión en distintos grupos al momento de analizar los datos obtenidos. El esquema de inmunosupresión administrado a estos pacientes se realiza con inhibidores de calcineurina, micofelonato mofetil o sódico y meprednisona o alternativamente inhibidores de la señal de 30 Bioanálisis I Nov · Dic 10 30 proliferación durante seis meses o más. Se dosan periódicamente estas drogas para ajustar los niveles. Aciclovir y la profilaxis antibiótica con trimetoprima – sulfametoxazol y nistatina se indica como tratamiento por seis meses a todos los pacientes. Ganciclovir se utiliza solamente para tratamiento de pacientes con antigenemia positiva para Citomegalovirus en la primera semana post trasplante. Las muestras se tomaron de la región perianal con hisopos estériles, inmediatamente procesados o colocados en medio de transporte. Se enriquecieron en caldo cerebro – corazón con un disco de 30 µg/L de vancomicina, incubándose por 18 a 24 hs para luego ser sembrado. Los cultivos se realizaron en medios cromogénicos y selectivos, altamente específicos y sensibles, para screening de EVR: chromID VRE de BioMérieux Ref 43002, el cual utiliza como sustratos cromogénicos α glucosidasa y β galactosidasa, y 8 mg/L de vancomicina. La identificación de las cepas sospechosas se realizó, en primera instancia, a partir de la coloración característica de las colonias en el medio cromogénico, la tinción de Gram, la prueba de la catalasa, pirrolidonil aridamidasa (PYR), bilis esculina y desarrollo en caldo con 6,5% de NaCl. La confirmación e identificación a nivel de especie de los aislamientos compatibles con enterococos se realizó con el sistema automatizado VITEK BIOMÉRIEUX. Se evaluó la resistencia a ampicilina, vancomicina, teicoplanina, estreptomicina de alta carga, gentamicina de alta carga y tetraciclina tanto por el método de difusión de discos propuestos por Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) como por el sistema automatizado. Además, se determinó la susceptibilidad a linezolid, minociclina, y quinupristin – dalfopristin por el método de difusión. Las cepas resistentes a vancomicina se confirmaron a través de la realización de la prueba de concentración inhibitoria mínima (CIM) por el método de dilución en agar según las recomendaciones del CLSI y por E-test. Se emplearon las cepas de Enterococcus faecalis vancomicina sensible ATCC 29212 y Enterococcus faecium vancomicina resistente ATCC 51299 para el control de calidad. Las siguientes variables fueron obtenidas y definidas para cada paciente, por entrevista personal y consulta de las historias clínicas: nombre, sexo, edad, patología renal primaria, modalidad de reemplazo renal empleada inmediatamente antes del trasplante (hemodiálisis, diálisis peritoneal o tratamiento conservador), período de tiempo en diálisis previo al trasplante, tratamiento previo con antimicrobianos, empleo de vancomicina como terapia antibiótica previo al trasplante, colocación de catéteres temporales y/o permanentes. en estudio; tres pacientes previamente trasplantados, dos en espera de trasplante y tres recientemente trasplantados. (Figura Nº1) En todos los casos se aisló Enterococcus faecium vancomicina resistente. Figura 1: Distribución de la población en estudio según pacientes colonizados, sexo y grupos de edad (N=65) Resultados En este estudio prospectivo se evaluó prevalencia y variables significativas asociadas a la colonización de EVR en pacientes renales. Entre los factores de riesgo asociados con infección y/o colonización, la b i b l i o g ra f í a re p o r t a : t ra t a m i e n t o antibiótico previo - especialmente cefalosporinas de tercera generación y el uso de vancomicina vía parenteral –, exposición a instrumentos médicos como estetoscopios, cercanía a un paciente infectado/colonizado con EVR, manos de los trabajadores de salud, neutropenia, insuficiencia renal, trasplante (hepático, medular y renal), catéteres, sondas urinarias, tiempos de internación prolongados. (4 - 7, 12, 13, 21) Entre noviembre de 2007 y mayo de 2009, se estudiaron 80 hisopados rectales de pacientes renales: 44 correspondían al grupo 1 (pacientes previamente trasplantados al inicio de la investigación); 20 al grupo 2 (pacientes en espera de trasplante); y 16 al grupo 3 (pacientes recientemente trasplantados de 1 semana de evolución). Las muestras se tomaron de un total de 65 pacientes: 34 hombres (52.31%) y 31 mujeres (47.69%). La edad promedio fue de 42.2 ± 12.0 años con un rango de 21 a 68 años. La colonización gastrointestinal por EVR se detectó en 8 pacientes, correspondiendo al 12.31% de la población De la población total (65), 75.38% (49) presentaba una fístula arteriovenosa, 1.55% (1) un injerto, 6.15% (4) ambos accesos vasculares y 16.92%(11) sin accesos. El rango etáreo de los pacientes colonizados osciló entre 40 y 59 años con una edad promedio de 50.9 ± 4.2 años. Todos ellos presentaron un acceso vascular, ya sea una fístula arteriovenosa (dos pacientes en espera de trasplante y cinco pacientes trasplantados) o injerto (un paciente post trasplante). Ninguno de los pacientes sin acceso vascular resultó colonizado. En referencia a los catéteres, 45 pacientes del total (69.23%) presentaban un catéter temporario y sólo tres de ellos estaban colonizados. El 3.08% lo tenían en forma permanente sin evidencia de desarrollo de EVR; y el mismo porcentaje de pacientes poseía ambos catéteres resultando colonizados. Un 24.61% no tenían catéter, y aún así tres cultivos desarrollaron. Considerando la diálisis peritoneal, sobre 58 pacientes que no fueron 32 Bioanálisis I Nov · Dic 10 32 dializados, seis estaban colonizados. De los siete pacientes restantes sometidos a diálisis, dos presentaron un cultivo positivo para EVR. Treinta pacientes recibieron tratamiento antibiótico previo; y de ellos, se obtuvo desarrollo de EVR en cinco cultivos. En contrapartida, de los 35 restantes que no recibieron terapia antimicrobiana, tres estaban colonizados. En particular, el tratamiento con vancomicina recibido por el 13.85% (9) de los pacientes, arrojó dos colonizados. Del 86.15% de los no tratados, seis resultaron positivos. Desde el punto de vista microbiológico, al determinar la susceptibilidad a vancomicina por el método de dilución en agar, se obtuvieron en todos los casos CIM ≥256 µg/mL, hecho que confirma la franca resistencia. Igualmente, cuando se realizó la lectura de los diámetros de los halos obtenidos por el método de difusión, en todos los casos se obtuvo 06 mm. Discusión E l gé n e ro E nte ro co c c u s h a adquirido en las últimas décadas un papel protagónico fundamental como patógeno nosocomial a pesar de su escasa virulencia, debido a su sorprendente capacidad natural de adquirir, acumular y transferir determinantes de resistencia. Esto debe disparar estrategias para la detección precoz de pacientes colonizados como así también la aplicación de medidas de aislamiento de contacto con el propósito de evitar su diseminación y conducir a una disminución de los índices endémicos. Los EVR se aislaron inicialmente en 1986 en Francia y el Reino Unido y, poco después, en Estados Unidos.(3, 22) Desde entonces, se han descripto EVR como causantes de infecciones nosocomiales en todo el mundo, aunque con una incidencia variable según el área geográfica y las instituciones hospitalarias.(3, 23, 24) En la provincia de Córdoba, el primer aislamiento de E. faecium vancomicina resistente se detectó en 1998 en el Hospital Córdoba.(25) En nuestra población de pacientes trasplantados renales, la colonización de EVR es comparable (12.31%) a la reportada para otros grupos de riesgo como pacientes en hemodiálisis, oncológicos o en áreas de cuidados intensivos. Sin embargo, hay posiciones encontradas con respecto a vancomicina como factor predisponente para la adquisición de EVR.(17, 26) Young-Bern y col.(5) dejan claramente expuesto la falta de significancia estadística del uso de vancomicina y cefalosporinas de tercera generación como factores predictivos en un área de cuidados intensivos de pacientes neuroquirúrgicos. Su resistencia a los antimicrobianos dificulta el tratamiento de las infecciones graves. La resistencia a los glucopéptidos resulta de especial interés ya que ocasiona la pérdida de una importante alternativa terapéutica en un género que presenta resistencia intrínseca a muchos antibióticos utilizados contra bacterias gram positivas. En contraposición, Torres y col(12) revelaron una asociación estadísticamente significativa de la adquisición de cepas EVR con el uso previo de vancomicina, cefalosporinas de tercera generación y aminoglucósidos, solos o administrados de forma conjunta. Además, no debe descartarse la posibilidad de transferencia in vivo de esta resistencia a patógenos más virulentos y prevalentes como el género Staphylococcus spp y Streptococcus pneumoniae, hecho que plantea graves dificultades terapéuticas, sobretodo en los Staphylococcus aureus resistentes a meticilina y en neumococos resistentes a β lactámicos. Byers y col(27) muestran con resultados contundentes que la presión antibiótica selectiva para la adquisición de EVR es un factor importante, pero insuficiente para su desarrollo en pacientes no expuestos previamente. Sin embargo, una vez colonizados, son capaces de desarrollar infecciones producidas por EVR cuando son tratados con antibióticos. En nuestro estudio, una vez que la colonización por EVR tuvo lugar, la persistencia demostró ser extremadamente habitual. Como no se han establecido aún conductas terapéuticas frente a la portación por EVR, los pacientes no fueron tratados y continuaron colonizados al momento del trasplante. Por lo tanto, la colonización por EVR no es una contraindicación para el trasplante renal en nuestro nosocomio. Sin embargo, cabe destacar que aunque existe una fuerte correlación entre colonización e infección, particularmente en huéspedes inmunosuprimidos (8, 18, 28, 29), durante el periodo de estudio no observamos ninguna infección por EVR en nuestra población. No es posible demostrar que tanto el tratamiento previo con antibiótico como la presencia de accesos vasculares necesariamente se asocian con la portación de EVR. Sin embargo, en la totalidad de las muestras positivas, los pacientes habían recibido tratamiento antimicrobiano previo y presentaban una fístula arteriovenosa y/o catéteres temporales. Los datos que se recogieron en el presente estudio promueven un trabajo hospitalario multidisciplinario para minimizar la transmisión nosocomial de EVR, buscando un uso prudente de vancomicina, ofreciendo capacitación y educación continuas del personal, otorgándole importancia fundamental a microbiólogo como primera línea de defensa en la detección e implementando medidas de control de infecciones. (5, 27, 30-32) Este trabajo tiene como limitación la falta de seguimiento de las infecciones asociadas en los pacientes colonizados, días de internación, etc.; variables que nos permitirían ampliar los objetivos del estudio para poder evaluar los factores de riesgo estrictamente vinculados a este grupo de pacientes. Agradecimientos La realización de este trabajo fue 34 Bioanálisis I Nov · Dic 10 NextLAB BY Genetrics S.A. Nicolás de Vedia 1644 1er. Piso “1" C1429EIB Nuñez Buenos Aires T. (+5411) 60 91 30 94 Rot F. (+5411) 60 91 21 00 Ext 3094 info@nextlab.com.ar 34 posible gracias a la ayuda técnica de Rosa Luna, Mirta Muñoz y Susana Houbron. Se agradece también el apoyo incondicional del Dr. Gallerano, la opinión de los infectólogos, Dr. Carlos Bergallo y Dr. Fernando Riera, y especialmente la colaboración desinteresada del Dr. Ariel Fernández. Por último, se agradece el apoyo de Biomerieux y particularmente la gestión de la Dra. Raquel Cimman. Bibliografía: (1)Leclerq R, Derlot E, Duval J, Courvalin P. Plasmid mediated resistance to vancomycin and teicoplanin in Enterococcus faecium strain. N. Engl. J. Med. 1988; 319: 157 – 161 (2)Shepard BD, Gilmore Ms. Antibiotic – resistant enterococci: The mechanisms and dynamics of drug introduction and resistance. Microbes Infect. 2002; 4: 215 – 224 (3)Cetinkaya Y, Falk P, Mayhall CG. Vancomycin – resistant enterococci. 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