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Poliploidización inducida como método para la obtención de nuevos cultivares de Calibrachoa La Llave & Lexarza (Solanaceae) Hagiwara, J.C.; Kato, A.E.; García Lager, E.A.; Mori, M.; Greppi, J. Instituto de Floricultura INTA Castelar. De los Reseros y Las Cabañas, Cautelar, Buenos Aires. E-mail: jhagiwara@cnia.inta.gov.ar Introducción Calibrachoa La Llave & Lexarza (Solanaceae) es un género que en estos últimos años ha adquirido mucha importancia como planta ornamental anual de propagación vegetativa (Berghauer E.M., 2004). Actualmente, a nivel mundial, existe un desarrollo de nuevos cultivares por parte de numerosas empresas comerciales a nivel mundial (Bodger Seeds Ltd.; Sakata Seed Co.; Suntory Ltd.; Goldsmith Seeds Inc.; etc.). En la Argentina existen 12 especies nativas consideradas por algunos autores como pertenecientes del género Calibrachoa (Ando et al., 2005), siendo C. pygmaea (R.E. Fr.) Wijsman y C. linearis (Hook.) Wijsman dos de ellas. La poliploidización inducida es un procedimiento útil para la obtención de nuevos cultivares, especialmente empleada en la mejora de especies ornamentales debido a que el aumento del nivel de ploidía suele producir gigantismo, aumento de tamaño de órganos como las flores. Pero también puede producir caracteres no deseados como una disminución en la velocidad de desarrollo (Cubero, J.I.,2003). Hasta el momento las variedades comerciales son diploides (2n=18), no existiendo reportes sobre cambios a nivel morfológicos o de desarrollo, debido a la poliploidización en calibrachoas. Objetivo Determinar la existencia de cambios morfológicos y de desarrollo debido a un aumento del nivel de ploidía en C. pygmaea y C. linearis, a partir de la comparación entre individuos diploides y tetraploides. Materiales y métodos Material Vegetal: Se emplearon: a). Semillas provenientes de individuos tetraploides de C. pygmaea y C. linearis obtenidas a partir de tratamientos in Vitro de colchicina (Hagiwara et al., 2002) en el Instituto de Floricultura de materiales selectos por sus aptitudes ornamentales. b). Plantas diploides de C. pygmaea y C. linearis a partir de las cuales se obtuvieron individuos diploides. c). Semillas de C. pygmaea y C. linearis recolectadas en las provincias de Entre Ríos y Corrientes. Ensayos: Para la comparación se realizaron dos ensayos. Ensayo I: El 5 de enero de 2005 se pusieron a enraizar, esquejes provenientes de las plantas diploides y tetraploides de C. pygmaea y C. linearis, en bandejas con sustrato vermiculita. El 2 de febrero de 2005 se transplantaron 15 plantas, por especie y por nivel de ploidía, a macetas termoformadas Nº12 con un sustrato a base de tierra orgánica, resaca de río y pinocha (1:1:1 v/v). A la semana, se realizó un pinzado de formación y el 19 de abril de 2005, en plena floración, se realizaron las siguientes mediciones: diámetro mayor de la flor en el momento de la antesis, largo de la flor, ancho y largo de la hoja de cuya axila emergió la flor. Se realizaron 5 mediciones por macetas. Ensayo II: Semillas de C. pygmaea y C. linearis tetraploides y recolectadas diploides, fueron sembradas en bandejas con sustrato comercial (Canadian GrowingMix2 Conrad Fafard, Inc. Canadá) y colocadas en una cámara de crecimiento (Fitotron) a 16/8hs de luz/oscuridad, 25/20ºC, 20.000lux de intensidad lumínica y 80% de humedad relativa. A los 15 días, 15 plántulas fueron transplantadas a macetas de plástico (6x6x6cm) con el mismo sustrato comercial y fueron ubicadas nuevamente en el Fitotron. Los parámetros que se midieron fueron: nº de días desde el transplante hasta la primera floración y altura de la planta en el momento de la primera floración. Se empleó un diseño completamente aleatorizado y los datos fueron analizados por comparación múltiple de medias utilizando el Test de Tukey (p<0,05). Resultados y discusión Ensayo 1: La Tabla 1 muestra los resultados obtenidos en las mediciones en las flores y hojas. En el caso de C. linearis, no hubo diferencias significativas de las mismas, pero en C. pygmaea hubo un aumento de tamaño, tanto de las flores como de las hojas al aumentar el nivel de ploidía de 2 a 4. Ensayo 2: En ambas especies, los individuos tetraploides demoraron más días en florecer que los diploides (Tabla 2). En el caso de C. linearis, además, los individuos tetraploides tuvieron menor altura en el momento de la primera floración (Tabla 2, Fig.1) y desarrollaron menos ramificaciones en la base (Fig.1) que los individuos diploides. Tabla 1. Diámetro y largo de flores y hojas de C. linearis y C. pygmaea 2n y 4n. Especie/ploidía Diám. de la flor Largo de la flor Ancho de la hoja Largo de la hoja (mm) (mm) (mm) (mm) C. linearis 2n 30,9x±1,4yaz 17,9±0,6 a 6,5±0,8 a 18,4±1,3 a C. linearis 4n 32,3±1,3 a 18,2±0,7 a 7,1±0,9 a 19,1±0,9 a C. pygmaea 2n 11,2±1,7 b 12,4±0,5 b 1,8±0,6 b 11,8±0,8 b C. pygmaea 4n 18,2±1,9 c 13,8±0,6 c 4,1±0,8 c 18,3±1,2 c x Valores promedios. y Valores de desvío estándar. z Valores seguidos por letras minúsculas distintas indican diferencias significativas entre niveles de ploidía dentro de una misma especie (test de Tukey p<0,05). Tabla 2. Días a floración y alturas de las plantas de C. linearis y C. pygmaea 2n y 4n. Especie/ploidía Diás hasta el inicio de la floración 65,1 x±2,4yaz 70,3±2,6 b 41,1±1,7 c 47,7±3,1 d Altura (cm) C. linearis 2n 24,6±2,1 a C. linearis 4n 18,7±2,3 b C. pygmaea 2n 12,3±1,9 c C. pygmaea 4n 11,9±2,1 c x Valores promedios. y Valores de desvío estándar. z Valores seguidos por letras minúsculas distintas indican diferencias significativas entre niveles de ploidía dentro de una misma especie (test de Tukey p<0,05). Fig.1. Planta diploide (derecha) y tetraploide (izquierda) de C. linearis y C. pygmaea. Conclusiones La autopoliploidización inducida, de diploide a tetraploide, no produjo el mismo efecto en C. pygmaea y C. linearis. Si bien en ambas especies hubo un retrazo en la floración, morfológicamente fueron afectados de diferente forma. En C. pygmaea, que como individuo diploide posee flores más pequeñas que las C. linearis, aquellos tetraploides tuvieron flores y hojas significativamente más grandes, pero la altura de las plantas no difirió de las diploides. En cambio, en C. linearis, el tamaño de las flores y hojas no se incrementó en la generación tetraploide, pero sí hubo una disminución de la altura y menor ramificación basal de las plantas. Bibliografía Ando, T.; Kokubun, H.; Watanabe, H.; Tanaka, N.; Yukawa, T.; Hashimoto, G.; Marchesi, E.; Suárez, E. and Basualdo, I. (2005). Phylogenetic Analisis of Petunia sensu Jussie (Solanaceae) using Chloroplast DNA RFLP. Annals of Botany 96: 289-297. Berghauer, E.M. (2004). Photoperiodic response of comercial Calibrachoa cultivars. Thesis presented to the Graduate School of the University of Florida in partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Science. 53p. Cubero, José Ignacio (2003). Introducción a la mejora genética vegetal. 2ª edición. Ed. MundiPrensa. ISBN: 84-8476-099-5. Hagiwara, J.C.; Kato A.; Mori, M.y Miyajima I. (2002). Obtención de poliploides en Calibrachoa pygmaea mediante el uso de colchicina in vitro. En 1er Congreso Argentino de Floricultura y Plantas Ornamentales y 4tas Jornadas Nacionales de Floricultura Bs.As. p.90.