Download OC_IB_11: Inmovilización y

Tipo de Comunicación:
Comunicación Oral
Simposio:
INGENIERÍA BIOQUÍMICA: BIOCATÁLISIS, BIORREACTORES, DOWNSTREAM,
BIOSENSORES E INTEGRACIÓN DE PROCESOS
Título:
INMOVILIZACIÓN Y ESTABILIZACIÓN DE DOS ENZIMAS MULTIMÉRICAS
COMPLEJAS: DOS SACAROSA SINTASA DE ORIGEN BACTERIANO.
Autores:
Trobo Maseda Lara, Herrera Orrego Alejandro, Guisán Seijas Jose Manuel
Centro de Trabajo:
Instituto de catálisis y petroleoquímica
Email:
lara.trobo@csic.es
Palabras Clave:
UDP-glucosa; Acidithiobacillus caldus; Nitrosomonas europaea; SuSy; inmovilización
multimérica;
Comunicación:
Se han estudiado dos enzimas sacarosa sintasa (SuSy) de origen bacteriano
(Acidithiobacillus caldus (SuSyAc), Nitrosomonas europaea (SuSyNe)). Estas enzimas
catalizan la producción de UDP-glucosa a partir de sacarosa y UDP. Por ello, son muy
útiles para reciclar el costoso cofactor UDP-glucosa, utilizando un exceso de sacarosa, en
interesantes reacciones regioselectivas de glicosilación catalizadas por glicosiltransferasas.
Las SuSy tienen estructura tetramérica, lo que dificulta mucho su estabilización por
técnicas de inmovilización. Este es el reto que se intenta resolver en este trabajo. Para
llevar a cabo la inmovilización, se han usado soportes de agarosa “funcionalizados” con
grupos aldehído, lo que promueve la unión covalente multipuntual; Con este soporte se
pretende unir, de forma permanente, el mayor número de subunidades posible y lograr la
rigidificación de la enzima. Con la SuSyNe se consiguió inmovilizar las cuatro subunidades,
sin embargo con la SusyAc se consiguió inmovilizar un número menor de subunidades; a la
vista de estos resultados se procedió a aumentar el nivel de estabilización con el derivado
de SuSyAc, con el fin de fijar las cuatro subunidades, mediante modificación adicional de la
superficie del catalizador con diferentes polímeros, como dextrano aldehído y
polietilenimina (PEI), o una combinación de ambos agentes. Los catalizadores obtenidos
mediante estos procesos eran mucho más estables que el derivado de referencia a 45 ºC y
pH 5 (condiciones de reacción). En ambos casos conseguimos aumentar el factor de
estabilización, en el caso de la SuSyNe era 40 veces más estable y para SuSyAc hasta 240
veces.
Por último se realizaron ciclos de reacción, a pequeña escala, con estos derivados, usando
como substratos UDP (0,3 M) y sacarosa (1,5 M), y siguiendo las reacciones mediante el
análisis por HPLC de los productos formados (UDP-glucosa y UMP), obteniendo resultados
de conversión muy similares a los obtenidos con la enzima soluble y demostrando la
reutilización del derivado, realizando al menos dos ciclos.