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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico CARACTERIZACIÓN DE DOS MUTANTES DE LA PROTEÍNA GrlR, REGULADOR NEGATIVO DE LA ISLA LEE EN EPEC. José Mauricio Arcos Almazán Unidad Académica de Ciencias Químico Biologías de la Universidad Autónoma de Guerrero, jse_mauricio91@hotmail.com. Asesores Emma Aurora Cruz Gómez, Abraham Medrano López y Ricardo Oropeza Navarro Instituto de Biotecnología UNAM, emmacg@bt.unam.mx; medlop@ibt.unam.mx ; oropeza@ibt.unam.mx. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA E. coli enteropatógena (EPEC) es uno de los principales agentes causales de diarrea infantil en el mundo. En la patogénesis de EPEC está involucrado el locus cromosomal LEE (Locus of Enterocyte Effacement). LEE es una isla de patogenicidad organizada en 5 operones policistrónicos, dos bicistrónicos y algunos genes individuales, localizada en el cromosoma de EPEC y la cual contiene los genes que codifican para las proteínas requeridas para causar la lesión histopatológica A/E (Adherencia y Eliminación). La expresión de esta isla es controlada por tres proteínas codificadas dentro de LEE; Ler y GrlA las cuales actúan como activadores y GrlR como represor, los cuales permiten que la isla se exprese o no bajo ciertas condiciones ambientales y nutricionales. En el laboratorio se ha observado que GrlR es capaz de reprimir la expresión de los operones en la isla y la interacción con GrlA evita su efecto represor. Por lo que es importante conocer si mutaciones en el dominio de interacción GrlR-GrlA afecta la capacidad de represión de GrlR sobre la expresión de los genes en EPEC afectando la virulencia de la bacteria. METODOLOGÍA Para evaluar el efecto de las mutaciones se cuantificaran fusiones reporteras a genes de la isla LEE , se empleará una cepa de EPEC mutante (cepa E2348/69 ΔgrlR) y los plásmidos pMPM-T3, pT3 grlR (tiene el gen grlR silvestre), pT3 grlR D35A (derivado de pT3grlR con sustitución en el aspártico 35 por alanina) y pT3 grlR N66A (derivado de pT3grlR con sustitución en la asparagina 66 por alanina) estas sustituciones en grlR se generaron a partir de la construcción con el gen silvestre mediante una técnica molecular conocida como PCR sobrelapado. Para crecimiento de las bacterias se empleará el medio LB (Luria- Bertani) adicionado con antibióticos (Ampicilina, Kanamicina, Tetraciclina y/o Estreptomicina) cuando así se requiera. CONCLUSIONES La presente investigación no ha concluido, en ella se pretende caracterizar el efecto de dos mutantes en la proteína GrlR sobre su capacidad represora de la expresión de los genes de LEE. De acuerdo a los avances realizados hasta el momento no podemos indicar con exactitud cuál es el efecto de las mutantes sobre los genes de la isla LEE. © Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico Agosto 2014
