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Determinación cuantitativa y simultánea de la dinámica transcripcional
de dos promotores a nivel de célula individual mediante reporteros
bioluminiscentes
Daniel Fuentes-Jiménez1, Yoshihiro Ohmiya2, Luis Covarrubias1, Christopher D. Wood1.
1
Departamento de genética de desarrollo y fisiología, Instituto de Biotecnología,
Universidad Nacional Autónoma de México, Cuernavaca, Morelos, México.
2
Instituto de Investigación Biomédica, AIST, Tsukuba, Ibaraki, Japón.
La expresión génica es dinámica e inestable. A consecuencia, puede existir variación
fenotípica entre células que forman parte de una población isogénica, y entre genes
idénticos en una misma célula. Los factores responsables de este comportamiento se
pueden acomodar en dos grupos: los que influyen en la estocasticidad inherente de la
expresión génica (ruido) y los sistemas oscilatorios que forman parte de la red de
regulación.
Para medir esta variación se debe medir la expresión génica de células individualmente. En
este campo, los ensayos de bioluminiscencia con luciferasa de insecto están ganando
terreno debido a su sensibilidad, robustez y respuesta lineal. No todas las luciferasas de
insecto se han caracterizado totalmente, ni optimizado su expresión para estos ensayos.
El proyecto consiste en armar un ensayo de bioluminiscencia dual de dos espectros de
emisión para células individuales usando reporteros con vida media variable, empezando
con las luciferasas de elatérido CBG99 (luz verde) y CBR (luz roja). Para revisar su
respuesta dinámica, las luciferasas se expresaron bajo los promotores de fos y ciclina A2
humanos, genes del ciclo celular. Se comparó la intensidad y la vida media de las
luciferasas CBG99, CBR, ELuc y Luc2. Para la titulación de la vida media se utilizó un
sistema de ubiquitinas constitutivamente activas concatenadas fusionadas a las luciferasas
en su extremo amino.
Agradecemos la ayuda provista por DGAPA (IN223810) y CONACYT-SEP (132478).