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VIII.-Capítulo 6
Producción de plantas de ajo libres de
virus
Conci, Vilma C.; Cafrune, Eva E.;
Lunello, Pablo; Nome; Sergio; Perotto, Cecilia
1 Introducción
De los cultivos de Alliaceae, el ajo (Allium
sativum L.) es considerado como una especie valiosa por muchas culturas diferentes.
Además de su conocida utilización en el arte
culinario, hoy es un producto apreciado por
sus beneficios medicinales, especialmente en
Europa y Asia. Algunos de sus productos derivados, poseen actividades biológicas tales
como antibióticas, antiparasitario, reductores
de riesgo de enfermedades cardiovasculares
y como potenciales agentes anticancerígenos.
El ajo es la principal hortaliza exportable
de Argentina desde el punto de vista de la
entrada de divisas, siendo este país el segundo exportador mundial después de China.
Las exigencias cada vez mayores del mercado y la aparición permanente de nuevos competidores obligan a replantear las estrategias
de producción nacional.
Entre las enfermedades que afectan a
este cultivo, los virus son los responsables de
las mayores pérdidas (entre un 20 y 80% de
disminución en el peso de los bulbos). Las
infecciones son causadas por un complejo
viral que incluye Potyvirus (Onion yellow
dwarf virus, OYDV, y Leek yellow stripe virus, LYSV); Carlavirus (Garlic common latent
virus, GCLV y Shallot lantent virus, SLV), y
Allexivirus (Garlic virus-A, -B, -C, -D, -E, -X,
GarV-A –B –C- D- E -X; Garlic mite-borne
filamentous virus, GarMbFV). Este conjunto causa un mosaico que si bien no mata la
planta produce una infección crónica. Debido a la exclusiva propagación agámica de
esta especie, la totalidad de las plantas están infectadas por virus, por lo tanto es evidente la importancia que tiene la obtención
de propágulo libre de virus como salida de
control. En Argentina se ha detectado la presencia de OYDV y LYSV, GCLV, GarMbFV,
GarV-C y otros Allexivirus todavía no caracterizados completamente.
A modo de ejemplo se detalla a continuación un protocolo de producción de ajo
libre de virus.
2 Procedimiento para la obtención de ajo
libre de virus
A) Termoterapia: en trabajos realizados
en la Argentina se ensayaron tratamientos
de termoterapia con agua y con aire caliente, antes de la extracción del meristema. Los
mejores resultados se obtuvieron con aire caliente. Para ello dientes de ajo fueron sembrados en terrinas con una mezcla de tierra/
mantillo/arena (1/1/1) y mantenidos en una
cámara a 36ºC. Cuando plantas de ajo Blanco fueron sometidas 60 días a 36°C y luego
se hizo el cultivo de meristema, se regeneraron pocas plantas, pero las que se obtuvieron resultaron «libres de virus». Cuando se
probaron 5 cultivares de ajo durante 40 días
a 36°C se pudo observar valores de supervivencia del cultivo de meristema que variaron
entre 40 y 82%, resultando «libres de virus»
entre 30 y 100% de las plantas obtenidas,
dependiendo del cultivar. Los controles en
los cuales se obtuvieron plantas sólo por cultivo de meristema, sin termoterapia, el porcentaje de plantas desarrolladas varió entre
70 y 100%, y de ellas, en algunos cultivares,
no se obtuvieron plantas «libres de virus» y
en otros llegó hasta el 21%.
Trabajos realizados posteriormente pusieron en evidencia que la posibilidad de liberar
de virus por termoterapia es muy variable.
En algunos monoclones de ajo Blanco y Colorado se observó que a pesar de ser sometidos a períodos prolongados (más de 60 días)
a 36°C, no fue posible eliminar todos los virus integrantes del complejo; paralelamente,
otros genotipos fueron «liberados de virus»
sólo con el empleo del cultivo de meristema.
B) Cultivo de meristema, primer análisis
y micropropagación: para la extracción del
meristema se corta un trozo de tejido en
forma cúbica, incluyendo el disco basal donde está el meristema. Este se desinfecta mediante una inmersión en alcohol 70% y luego
con hipoclorito de Na al 5 % durante 10-15
min. Posteriormente, el trozo de tejido es colocado sobre papel estéril bajo una lupa
estereoscópica dentro de una cámara de flu-
Biotecnología y Mejoramiento Vegetal
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jo laminar y con la
ayuda de instrumental estéril se procede
a la extracción del
explanto constituido por el domo más
1 primordio foliar
(0,3 mm aproximadamente). Luego de
la escisión es rápidamente sembrado
en medio de iniciación donde se desarrollará una planta
completa (Fig. 1, A).
Las plantas obtenidas son analizadas mediante ISEMD con un antisuero
producido a partir
de plantas de ajo
enfermas con la
mezcla de virus que
naturalmente infectan al cultivo. Aquellas plantas que resultan negativas a
esta prueba son
evaluadas
con
antisueros específicos para OYDV,
LYSV, GCLV, SLV,
GarMbFV y con un
antisuero que detecta fundamentalmente una mezcla
de
diferentes
Allexivirus.
Las
plantas negativas a
todos ellos son
transferidas a un
medio de micropropagación. En este Figura 1: Producción de ajo libres de virus. A: planta en medio de iniciación. B:
medio es posible micropropagación. C: bulbillos obtenidos in vitro (microbulbillos). D: planta transferida
a tierra y mantenida en cámara húmeda. E: planta adaptada a las condiciones ex vitro.
una tasa de multipli- F: plantas en suelo bajo jaula antiáfidos. G: multiplicación a gran escala bajo jaula
cación de 1:2-1:8 de- antiáfidos. H: bulbos de ajo libre de virus (arriba) e infectados (abajo).
pendiendo del cultivar (Fig. 1, B).. Esta
tasa varía con el número de repiques en el
C) Rusticación y transplante a tierra bajo
medio de cultivo, siendo baja en los prime- condiciones controladas: después de varios
ros y aumenta a partir del segundo o tercer ciclos in vitro, muchas plantas bulbifican esrepique, además se detectaron diferencias pontáneamente y otras deben ser inducidas
entre los distintos meristemas.
(Fig. 1, C). Repicando los plantines a un me-
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Líneas selectas
Termoterapia
Cultivo de meristema (medio de iniciación)
ANALISIS por ISEM-D
Plantas in vitro
(OYDV, LYSV, GCLV, SLV,
GarV A, y otros
- Allexivirus
Multiplicación in vitro (en medio de multiplicación)
Bulbificación in vitro
(medio de bulbificación)
Planta in vitro
1º generación en suelo
(bajo jaula)
2º ó mas generaciones en suelo
(bajo jaula)
Multiplicación en áreas aisladas
(productores, semilleros)
ANALISIS por DAS-ELISA
(Potyvirus, Carlavirus y Allexivirus)
ANALISIS por DAS-ELISA
(Potyvirus, Carlavirus y Allexivirus)
ANALISIS por DAS-ELISA
(Potyvirus, Carlavirus y Allexivirus)
Transferencia a productores
(producción comercial)
zando las plantas,
una por una, mediante pruebas de DASELISA (Fig. 1, F y G).
Los bulbos producidos son entregados
a semilleros que realizan la multiplicación
en áreas aisladas de
otros cultivos de
Alliaceae, hasta obtener el número de
bulbo-semilla suficiente como para iniciar
una producción comercial. Cuando se
comparan los bulbos
producidos por las
plantas libres de virus
con respecto a los producidos por plantas
infectadas las diferencias en peso y tamaño son notables
Fig.1, M. Esquema de
producción Fig.2.
3 Certificación
La implementación de programas
tendientes a la producción de plantas de ajo libre de virus y el
control de la enfermedad adquiere fundamental importancia ya que han comenzado
a regir en Argentina normativas para la fiscalización de semilla de ajo. Estas normas establecen las categorías de Básica (subcategoría
Preinicial, Inicial y Fundación) Registrada
(subcategoría A y B) y Certificada. Cada una
de estas categorías contempla diferentes porcentajes de OYDV. Por ahora sólo se controla este virus; sin embargo, con el avance de
los conocimientos respecto del daño que producen el resto de los integrantes del complejo, seguramente algunos otros serán considerados en el futuro.
Figura 2: Esquema de producción de plantas de ajo libres de virus, IFFIVE-INTA,
Argentina.
dio sin hormonas, con alto contenido de sacarosa y luz continua se consigue mejorar el
porcentaje de bulbificación en algunos clones,
o bien, se obtienen plantas más robustas que
soportan mejor el transplante a suelo.
Los minibulbillos obtenidos in vitro son
cosechados y sembrados en suelo estéril compuesto por una mezcla de tierra/mantillo/
arena (1/1/1). Las plantas que no forman
bulbos son transferidas a suelo y mantenidas en cámara húmeda por un tiempo variable entre 15 y 20 días luego son paulatinamente adaptadas a las condiciones naturales de humedad y temperatura (Fig. 1, D y E).
Las plantas ex vitro son probadas mediante DAS-ELISA para constatar su estado
sanitario y mantenidas bajo jaulas
antivectores. Los bulbos cosechados son conservados en lugar fresco y seco hasta la época de siembra. Las sucesivas multiplicaciones
se realizan en jaulas donde se continúa anali-
4 Lecturas recomendadas
CANAVELLI, A; NOME, S. F. y CONCI, V. C. 1998. Incidencia
de las virosis en ajo Rosado Paraguayo. Fitopatología
Brasilera 23 (3): 354-358.
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Loss of Virus-Free Garlic in the Field During Successive
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