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Carlos Shiva Ramayoni
PhD, MSc, MVZ
ANTECEDENTES
 La paloma (Columba livia)
ciudades del mundo.
coloniza la mayoría de
Curo, et al., 2002 aislaron 26 cepas del género Cryptococcus de las
cuales nueve cepas correspondieron a C. neoformans var.
neoformans y 17 a Cryptococcus spp
Rev. perú. med. exp. salud publica v.22 n.4 Lima oct./dic 2005
Gonzales Acuña, et al., 2007. registraron palomas positivas frente a:
clamidiosis (11%), estafilococcosis (8%), salmonelosis (4%) y
aspergilosis (1%). No se detectaron palomas con evidencias de
criptococcosis y listeriosis.
Rev Chil Infect 2007; 24 (3): 194-198
La paloma doméstica puede transmitir varias
enfermedades al ser humano.
De las enfermedades zoonóticas documentadas
destacan la salmonelosis, aspergilosis, estafilococosis,
listeriosis, colibacilosis, campylobacteriosis e
histoplasmosis (D. Gonzales-Acuña et al., 2007, A.
Lillehaug et al., 2005, O. Ramirez et al., 2008).
Estudios en Brasil demostraron que la E. coli enteropatógena y
enterotoxigénica en heces de palomas presentaron una tasa
global del 12.1% (Silva et al; 2009).
Asimismo, la prevalencia de E. coli portadora del gen Stx2 fue
de en un 12.5% en las heces de paloma en la ciudad de Roma,
Italia (Schmidt, 2000).
Estudios en Brasil demostraron que la E. coli enteropatógena y
enterotoxigénica en heces de palomas presentaron una tasa
global del 12.1% (Silva et al; 2009).
Asimismo, la prevalencia de E. coli portadora del gen Stx2 fue
de en un 12.5% en las heces de paloma en la ciudad de Roma,
Italia (Schmidt, 2000).
Campylobacter spp.
• En Madrid, se encontró una alta prevalencia de
Campylobacter jejuni (69,1%), en contraste con
Campylobacter coli (1.1%) en las aves capturadas (Columba
livia) (Vásquez et al. 2010).
• Noruega, de 200 muestras de heces frescas de palomas
doméstica, en 6 se detectó Campylobacter jejuni (Lillehaug et
al. 2005).
• Bolivia, obtuvo una frecuencia de 29 % (12 muestras) a
Campylobacter spp., y de estas muestras 57% resultó ser C.
jejuni (Bautista et al. 2009).
Universidad Peruana Cayetano Heredia
Facultad de Veterinaria y Zootecnia
“Aislamiento de Cryptococcus neoformans y Salmonella
spp. en excretas de palomas domésticas (Columba livia)
de la Basílica Catedral de Lima y Convento de San
Francisco Lima”
Tesis para optar el Título Profesional de Médico Veterinario
Zootecnista
Ornela Chávez Inagaki
Bachiller en Medicina Veterinaria y Zootecnia
LUGAR DE ESTUDIO
El estudio se realizó en la Basílica Catedral
de Lima y el Convento de San Francisco de
Asís ubicados en el centro histórico de la
ciudad de Lima, lugares en donde existe
una alta concentración de aves (más de 100
palomas en el área).
Cuadro 1.- Resultados de crecimiento de colonias sospechosas a Cryptococcus
neoformans a partir de muestras secas de heces de paloma (Columba livia)
cultivadas en medios Sabouraud y Niger Seed. Lima- 2011.
Sabouraud (+)
Lugar de muestreo
Total de
muestras
Nro.
Convento San Francisco de Asís
20
20
Basílica Catedral de Lima
27
47
TOTAL
a,b
Niger Seed (+)
%
Nro.
%
100.0a
20
100.0a
23
85.2a
20
74.1a
43
91.5
40
85.1
Letras diferentes indican que las proporciones en cada columna son estadísticamente
diferentes para cada lugar de muestreo
Cuadro 3. Resultados positivos a las pruebas de confirmación para
Cryptococcus neoformans a partir de muestras purificadas de
aislados de colonias cultivadas en Niger Seed para cada punto de
muestreo. Lima – 2011
Lugar de muestreo
Urea (+)
Nro. de
CGB
API
muestras
Nro.
%
Nro.
%
Nro.
%
4
3
75.0
3
75.0
3
75.0
Basílica Catedral de Lima
7
6
85.7
6
85.7
6
85.7
TOTAL
11
9
81.8
9
81.8
9
81.8
Convento San Francisco de
Asís
Universidad Peruana Cayetano Heredia
Facultad de Veterinaria y Zootecnia
“Detección de Escherichia coli productora de Shiga
toxina (STEC) y Enteropatogénica (EPEC) en
palomas domésticas (Columba livia) del distrito de
Pueblo Libre, Lima”
Tesis para optar el Título Profesional de Médico Veterinario
Zootecnista
Moisés David Caballero Vásquez
Bachiller en Medicina Veterinaria y Zootecnia
Antecedentes
Aves silvestres y Columbia livia.
Palomas
reservorio de agentes patógenos.
Zoonosis de importancia transmitidas por las palomas.
Enfermedad diarreica serio problema de salud pública.
Fuente: Ochoa et al, 2010
Objetivo
Determinar presencia y tipo de E. coli diarrogénica en palomas
del distrito de Pueblo libre, mediante la amplificacion de genes de
virulencia aplicando la tecnica de PCR.
Toma de Muestras
• Plástico Estéril
• Pool de Muestras
Cada parque fue
divido en 2
cuadrantes
Procesamiento Microbiológico
• Transportado
•
•
4°C
• Incubación
•
Agar Mac Conkey
a 37 °C x 24 hrs.
• Replicación
•
• Criopreservación
Caldo Cerebro Corazón
(BHI) a 37ºC x 24 hrs.
Glicerol al
20% a -20°C
Identificación por bioquímica
•
KIA (Kligler Iron Agar)
•
LIA (Lysine Iron Agar)
•
Citrato de Simmons
•
SIM (Sulfuro-IndolMotilidad)
•
Caldo Úrea
(Koneman et al; 2006.)
Extracción de ADN
•
WIZARD GENOMIC DNA PURIFICATION para bacterias Gram negativas
(PROMEGA, USA).
Secuencias de primers utilizados para la detección
de genes virulentos de E. coli.
Gen blanco
Tamaño a
generar (bp)
ATAAATCGCCATTCGTTGACTAC
AGAACGCCCACTGAGATCATC
Shiga toxina 1 (stx1)
180
GGCACTGTCTGAAACTGCTCC
TCGCCAGTTATCTGACATTCTG
Shiga toxina 2 (stx2)
255
GACCCGGCACAAGCATAAGC
CCACCTGCAGCAACAAGAGG
Intimina (eae)
384
Hemolisina (hylA)
534
Secuencia (5’-3’)
GCATCATCAAGCGTACGTTCC
AATGAGCCAAGCTGGTTAAGCT
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
•
Protocolo descrito por Paton et al; 1998
Termociclador Veriti
Cabina de Flujo Laminar
Resultados
Criterio de identificación de cepas de E. coli por prueba
bioquímica
Prueba Bioquímica
Numero de
Colonias
KLIGLER
102
+
+
5
+
+
3
Total 110
LIA CITRATO
SIM
UREA
Resultado
-
+
-
E.coli
+
+
+
-
Enterobacter spp
+
+
+
+
Otra enterobacteria
Electroforesis
gen eae
gen stx2
gen stx1
(1) Ladder; (2) Control positivo O157H7;(3) Control Negativo E.
coli ETEC; (4) Blanco; (5 y 7 – 11) Muestras positivas al gen
eae; (6) Muestra positiva a los genes stx1 y stx2.
Grupos diarrogénicos de E. coli encontrados en las
muestras positivas a los genes eae y stx
Código de
muestra
Resultado
Grupo/gen
N1
+
EPEC/eae
N66
+
EPEC/eae
N67
+
EPEC/eae
N68
+
EPEC/eae
N69
+
EPEC/eae
N70
+
N14
+
EPEC/eae
STEC/Stx1 y Stx2
Porcentaje
5.88%
0.98%
En un estudio de Lima: 113 cepas de EPEC aisladas de niños y
diagnosticadas por serología, 15 cepas (13,3%) con gen eae; tres
cepas ETEC, tres cepas STEC, una cepa EAEC y una cepa EIEC
(Ochoa et al., 2010).
Contaminación del medio ambiente, aguas servidas
absorción de
E. coli por animales
ciclo
epidemiológico
de
cepas
potencialmente diarrogénicas
problema de salud pública.
Universidad Peruana Cayetano Heredia
Facultad de Veterinaria y Zootecnia
Tesis para optar el Título Profesional de Médico Veterinario
Zootecnista
Mirtha Isabel Rivera Acha
Bachiller en Medicina Veterinaria y Zootecnia
Campylobacter ha
sido aislado en Lima
en infantes con
diarrea aguda
Presencia de
C. jejuni en
palomas de
nuestro medi0
OBJETIVO
 Detectar la presencia de cepas de Campylobacter jejuni en
heces de palomas Columba livia del distrito de Pueblo Libre, a
través del aislamiento microbiológico y confirmación
mediante la técnica de PCR.
MATERIALES Y MÉTODOS
 Unidad de muestreo: heces frescas de paloma (Columba livia).
LUGAR DE ESTUDIO
Parques del distrito de Pueblo Libre en base a 8 zonas.
Secuencias de primers utilizados para la detección de genes de
Campylobacter jejuni.
Secuencia (5’- 3’)
TGACGCTAGTGTTGTAGGAG
CCATCATCGCTAAGTGCAAC
Tamaño a generar (bp)
402
RESULTADOS
Cuadro 1.- Cantidad de colonias aisladas en cada pool
positivo a Campyobacter spp. según muestreo en los
parques de Pueblo Libre
Pool de heces frescas
ZONAS
Zona 6
Muestreados
Positivos
N° Colonias
encontradas
3 de Octubre
4
1
3
De la Puente Cortez
4
2
4
Paseo Libertad
4
2
9
88
5
16
PARQUES
Zona 8
TOTAL
Electroforesis de los genes patogénicos encontrados en las cepas aisladas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
12
13
14
15
16
17
18
19
20
11
Figura 1. Resultados de la electroforesis en gel de agarosa. (1) Ladder 100 bp;
(2) Blanco; (3) Control Negativo E. coli ATCC 25922; (4) Control Positivo
Campylobacter jejuni; (5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20) Muestras
Positivas a Campylobacter jejuni