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UTILIDAD
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Método UV para la determinación de Ácido DMálico en alimentos, bebidas y otros materiales.
100 determinaciones.
FUNDAMENTO DEL TEST
La cuantificación del Ácido D-Málico requiere de la
siguiente reacción enzimática:
El Ácido D-Málico (D-Malato) se oxida
cuantitativamente a Oxalacetato por la acción de
la
D-Malato
Deshidrogenasa
(D-MDH).
Alternativamente, la D-MDH convierte el
Oxalacetato en Piruvato y Dióxido de Carbono.
D-MDH
D-Malato + NAD+
Piruvato + CO2 + NADH + H+
La cantidad de NADH formada es estequiométrica
a la cantidad de Ácido D-Málico. Este NADH se
mide mediante incremento de la absorbancia a
340nm.
Se determinan los valores de Absorbancia (A1
y A2) tras la adición de la enzima, tanto para
los blancos como para las muestras, para
obtener la ∆AÁcido D-Málico
La concentración de Ácido D-Málico puede
calcularse como se indica en la siguiente
fórmula:
c = (V x MW x ∆AÁc.D-Málico) / (ε x d x v) [g/L]
V = volumen final (mL)
v = volumen de muestra (mL)
d = paso óptico (cm)
MW = Peso Molecular del Ácido D-Málico
(g/mol)
ε = coeficiente de extinción molar del NADPH
a 340nm = 6300 (l x mol-1x cm-1)
Determinación del Ácido D-Málico
FT: 30.K-DMAL
Concentración = (2,42 x 134,9 x ∆AÁc D-Málico)
/ (6300 x 1 x 1) = 0,5151 x ∆AÁc D-Málico [g/l]
Inmunología y Genética Aplicada, SA
C/ Hermanos García Noblejas 39
28037. MADRID
Tel.: 91-3680501
Fax: 91-4087598
www.ingenasa.es
Última revisión: 27/07/15
ESPECIFICIDAD, LINEALIDAD
LÍMITE DE DETECCIÓN
Y
La enzima D-MDH oxida rápidamente el Ácido DMálico, aunque se observa una cierta actividad
lateral también sobre el Ácido L-Tartárico, la cual
puede afectar a la reacción si la concentración de
Ácido L-Tartárico es muy alta.
El ensayo es lineal en el rango de 0,5 a 40 µg de
Ácido D-Málico por ensayo.
El Límite de Detección es de 0,26 mg/L, que
deriva de una diferencia de absorbancia de 0,010
con un volumen máximo de muestra de 2 mL.
Componentes del Kit
Nombre
Contenido
Vial 1
Tampón a pH 8, más azida de
sodio como conservante
Vial 2 (x2)
NAD+
Vial 3
D-Malato Deshidrogenasa
Vial 4
Solución estándar de Ácido DMálico (0,20 mg/mL)
25 mL
2,2 mL
EJEMPLOS DE APLICACIÓN
Vino, cerveza, zumos de fruta, refrescos,
alimentos dietéticos, caramelos, frutas y
vegetales, cosméticos, productos farmacéuticos, y
otros materiales (ej. cultivos biológicos, muestras,
etc.)
VALIDACIONES
El método basado en este principio ha sido
aceptado por EEC, EN, DIN, OIV, IFU, y AIJN.
FT: 30.K-DMAL
Conservación
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IT-73780
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