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INFORMACIÓN DEL MUESTREO, TRANSPORTE Y PRESERVACIÓN DE LA MUESTRA Laboratorio del Consejo Regulador del Tequila, A.C. Documento Nivel D Código: ASC-F07.1 Anexo 5 ASC-P04 1. Introducción El correcto diagnóstico de los problemas fitosanitarios permite establecer el origen de los mismos, los métodos y estrategias a seguir para su control, lo cual reduce considerablemente las pérdidas económicas garantizando mayores rendimientos y productos de mejor calidad que puedan ser aptos para el consumo y comercialización. Las principales enfermedades que afectan al Agave azul tequilero son: marchitez del agave, pudrición seca del cogollo, mancha gris o tizón foliar y pudrición de cogollo. 2. Alcance Estas indicaciones aplican para la toma de muestra, manejo y transporte del tejido vegetal y de suelo para los análisis fitopatológicos. Importante: La toma de muestra y transporte así como cualquier desviación a lo establecido en este documento es responsabilidad de la empresa o persona que lo realiza. 3. Materiales para el muestreo Material de trabajo Libreta o bitácora de campo. Bolsas de plástico. Papel estraza. Etiquetas (proporcionadas por el laboratorio). Hielera con tapa. Pluma o marcador. Hilaza. Herramientas de trabajo Guantes de cuero. Machete corto. Cámara fotográfica. Coa. Tijeras de poda. Papel absorbente para limpiar las herramientas de trabajo. Cubeta de aproximadamente 20 L. Pala de jardinería. Navajas. Atomizador. Reactivos Alcohol etílico al 70 % v/v. Hipoclorito de sodio al 1 % v/v. Página 1 de 5 INFORMACIÓN DEL MUESTREO, TRANSPORTE Y PRESERVACIÓN DE LA MUESTRA Laboratorio del Consejo Regulador del Tequila, A.C. Documento Nivel D Código: ASC-F07.1 Anexo 5 ASC-P04 4. Preparación del material para la toma y preservación de muestras. Muestra de Tejido vegetal Es importante que la bolsa en el que se va a transportar la muestra sea de papel estraza, que esté limpia preferiblemente nueva. El tejido vegetal colectado no debe ser lavado ni se le debe adicionar ninguna sustancia para su conservación. Evite manipular excesivamente las muestras o exponerlas al sol. Envíe la muestra al laboratorio lo más pronto posible y mientras tanto, consérvela en refrigeración, evitando su congelación. Muestra de Suelo Depositar la muestra de 1 kg aproximadamente en una bolsa doble de plástico colocar en la sombra o en un lugar fresco y seco, evitando exposición a la luz solar directa. Las muestras de suelo se utilizan para evaluar la calidad y contenido de microorganismos que pueden estar relacionados con la enfermedad. 5. Selección de puntos de muestreo. Considerar los siguientes criterios al seleccionar las partes de la planta que muestren los síntomas característicos de la enfermedad. Pencas (hojas) Centro del cogollo Centro del cogollo Base de las hojas cercanas al cogollo Base de las hojas cercanas al cogollo Raíces afectadas (se requiere extraer/quitar la planta completa) Marchitez del Agave Mancha gris (Syn: Tizón Foliar) Ápice (extremo superior o punta), bordes y centro de las hojas. Hojas hasta una tercera parte del área foliar. Cogollo Piña Pudrición seca del cogollo Pudrición blanda del cogollo En el caso del cultivo de Agave tequilana Weber var. azul, seleccionar las partes de la planta que muestren los síntomas característicos de diferentes estados o grados de desarrollo de la enfermedad: en las pencas (hojas), raíces y partes de la piña afectadas; si el problema está en hijuelos seleccione 2 o 3. En el caso de otras especies de plantas de cultivos de importancia económica, seleccionar hojas, flores, partes de tallo, frutos. Es importante llevar junto con las muestras, plantas o partes sanas que sirvan para comparar con las que presentan síntomas. Página 2 de 5 INFORMACIÓN DEL MUESTREO, TRANSPORTE Y PRESERVACIÓN DE LA MUESTRA Laboratorio del Consejo Regulador del Tequila, A.C. Documento Nivel D Código: ASC-F07.1 Anexo 5 ASC-P04 6. Procedimiento para toma de muestra. 6.1Tejido vegetal Desinfectar las herramientas de trabajo con un atomizador que contenga la solución de hipoclorito de sodio al 1% v/v durante 1 min antes y después del corte o manejo de la muestra. Secar con papel absorbente. Recoja la muestra cuando las plantas se encuentren sin humedad para evitar el desarrollo de hongos y bacterias. Se requiere un mínimo de 250 g de tejido vegetal con síntomas y 100 g de tejido sano (muestra control); cuando la selección consista en raíces se requiere recolectar aproximadamente 50 g, introducirlas dentro de una bolsa de plástico junto con una buena cantidad de suelo. Colocar el material vegetal dentro de una bolsa de papel estraza. Separar en diferente bolsa de papel estraza el tejido sano del que muestra los síntomas de enfermedad. Llenar la etiqueta únicamente de la muestra con síntomas. Transportar en hielera. Se recomienda utilizar una libreta o bítacora de campo para registrar datos de importancia, tales como los síntomas y distribución de la enfermedad, los productos agroquímicos aplicados, historial de cultivos previos, entre otros. En caso de ser posible, se recomienda documentar las anotaciones tomando algunas fotografías que refuercen la descripción de los datos. Al finalizar la toma de muestra, desinfectarse las manos con alcohol al 70 % v/v o lavarse las manos con agua y jabón. Nota: Se recomienda realizar monitoreos fitosanitarios preventivos de control que limiten la diseminación de enfermedad en las plantas sanas. 6.2 Suelo Se recomienda desechar los primeros 5 cm de suelo superficial. En el caso del cultivo de Agave la profundidad de muestreo recomendada es de 0 a 15 cm. Para la mayoría de los cultivos se toma la muestra a una profundidad de 5 a 20 cm del suelo. La muestra se toma de 4 puntos alrededor de la planta que muestre síntomas, se mezclan las submuestras y se dividen cuantas veces sea necesario hasta obtener un kilogramo de suelo que será la muestra que se remita al laboratorio, colocar en una bolsa doble de plástico debidamente cerrada e identificada. Página 3 de 5 INFORMACIÓN DEL MUESTREO, TRANSPORTE Y PRESERVACIÓN DE LA MUESTRA Laboratorio del Consejo Regulador del Tequila, A.C. Documento Nivel D Código: ASC-F07.1 Anexo 5 ASC-P04 7. Transporte y manejo de muestras. 7.1 Tejido vegetal Una vez seleccionada y recolectada la muestra para el análisis fitopatológico, se debe colocar en la sombra o en un lugar fresco. Para su transporte al laboratorio utilizar una hielera, si por alguna razón no le es posible llevarla de inmediato, mantenerla en refrigeración a una temperatura de 2 °C a 8°C hasta por tres días antes de su envío. Enviar las muestras en las mejores condiciones posibles, el diagnóstico es casi imposible cuando las muestras llegan al laboratorio en estado avanzado de descomposición. Colocar el material vegetal dentro de una bolsa de papel, EVITAR utilizar papel periódico y bolsas de plástico. Separar en diferente bolsa de papel estraza el tejido sano del que muestra los síntomas de enfermedad. Llenar la etiqueta únicamente de la muestra con síntomas, en la bolsa de papel donde se guarde la muestra control (tejido sano) especificar solo el número de muestra y la leyenda de “Muestra control y/o Material de referencia”. 7.2 Suelo Después de tomar la muestra de suelo, colocar en la sombra o en un lugar fresco, evitando exposición a la luz solar directa. Depositar la muestra de suelo en una bolsa doble de plástico. 8. Identificación de muestras Para identificar las muestras, llenar la etiqueta que aparece al final del documento y pegarla al frente de la bolsa de papel estraza cuando la muestra sea tejido vegetal, y para las de suelo pegar la etiqueta en la bolsa de plástico que no tiene contacto con la muestra. 9. Trámites administrativos. Para No socios llenar la “Solicitud de servicios de laboratorio” y para los socios únicamente seleccionar las pruebas requeridas. Para el caso de no socios que solicitan el servicio por primera ocasión es necesario proporcionar copia del Registro Federal de Contribuyentes (RFC) e identificación oficial del representante legal o del interesado. Es importante que envíe su comprobante de pago por correo electrónico a: laboratorio@crt.org.mx y earciniega@crt.org.mx , ya que de lo contrario no se podrá registrar y realizar el análisis de la muestra. Depósito bancario a nombre del Consejo Regulador del Tequila, A.C. en BANCOMER Sucursal 0814 Plaza México con número de cuenta No. 0480322555 o clave interbancaria 012320004803225552. Para cualquier duda comunicarse al laboratorio: (33) 1002-1953 y 1002-1991. 10. Entrega de muestra e informe La muestra se recibe en el laboratorio de lunes a viernes de 8:30 a 18:00 horas. Página 4 de 5 INFORMACIÓN DEL MUESTREO, TRANSPORTE Y PRESERVACIÓN DE LA MUESTRA Laboratorio del Consejo Regulador del Tequila, A.C. Documento Nivel D Código: ASC-F07.1 Anexo 5 ASC-P04 La entrega del informe es de máximo 15 días hábiles. El informe original lo podrá recoger en las instalaciones, para los socios se envía con el personal de la unidad de verificación, para los clientes se puede enviar por mensajería con un costo adicional. 11. Referencia bibliográfica Conocimiento y prácticas agronómicas para la producción de Agave tequilana Weber en la zona de denominación de origen del tequila. Guía para tomar, conservar y enviar muestras vegetales para diagnóstico fitosanitario. Etiqueta para la identificación de muestras Página 5 de 5