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RETORNO
XII Congreso Nacional
de Biotecnología y Bioingeniería
CARACTERIZACIÓN ANTIGÉNICA Y MOLECULAR DE UNA SEMILLA VACUNAL DEL
VIRUS DE LA RABIA
Yazmin Irasema Moreno-Salcedo1, Alejandra Meléndez-Félix1,2, Héctor Castell-Blanch Bueno3, Luis BojórquezNarváez3, Mercedes Alvarado-Villegas3, Rosa María Ribas-Aparicio1. 1Lab. de Producción y Control de
Biológicos, Departamento de Microbiología, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas-IPN. Prol. Carpio y Plan
de Ayala S/N Del. Miguel Hidalgo, CP 11340 México, DF. Tel. 5729 6300 ext 62384. 2InDRE-SSA,
3
PRONABIVE-SAGARPA, rribas233@yahoo.com
Palabras clave: rabia, nucleoproteína, glicoproteína.
Introducción. Desde los registros más antiguos del
contagio de la rabia que datan del año 2300 a.C. en
Mesopotamia (1), se ha buscado la manera de proteger
tanto a personas como animales de esta enfermedad con
vacunas pre-exposición o con tratamientos postexposición. Estudios sobre la antigenicidad de las
vacunas, indican que las proteínas del virus involucradas
en la inducción de la respuesta inmune protectora, son la
nucleoproteína (N) que se localiza en la nucleocápside
del virus, y la glicoproteína (G) que es la única proteína
que se proyecta en la superficie de la partícula vírica
(2,3). A nivel veterinario, los brotes de rabia siguen
vigentes ya que en la naturaleza hay reservorios del virus,
lo cual llega a provocar pérdidas económicas importantes
en el sector pecuario. En México, uno de los reservorios
principales
es
el
murciélago
hematófago
Desmodus rotundus, que se localiza en toda la República
Mexicana y que es el principal transmisor del virus al
ganado, trayendo consigo brotes de la enfermedad.
PRONABIVE (Productora Nacional de Biológicos
Veterinarios-SAGARPA), produce vacunas contra rabia
o derriengue en ganado bovino, ovino, caprino, equino y
porcino; esta vacuna se ha usado con éxito, produciendo
títulos altos de anticuerpos en los animales contra el
virus, lo cual ofrece una buena protección al ganado.
El objetivo de este trabajo fue caracterizar antigénica y
molecularmente una semilla vacunal del virus de la rabia
usada por el PRONABIVE en la elaboración de
productos biológicos.
Metodología. Se realizó la caracterización antigénica de
la semilla vacunal del virus de la rabia utilizando un
panel
de
anticuerpos
monoclonales
(AcMo)
proporcionados por el CDC (Center for Diseases Control,
EUA). La obtención del RNA viral se hizo por el método
de TRIzol®. La obtención de los genes completos de la
glicoproteína (G) y nucleoproteína (N) se llevó a cabo
mediante transcripción reversa acoplada a la reacción en
cadena de la polimerasa (RT-PCR). Posteriormente se
clonaron los genes G y N en Escherichia coli utilizando
el vector de clonación pGEM-T Easy de Promega®. Se
determinó la secuencia nucleotídica parcial tanto del
cDNA como de las clonas recombinantes por medio de
un método automatizado. Por último se analizaron los
resultados por medio de estrategias y herramientas de
bioinformática.
Resultados y discusión. Se llevó a cabo la
caracterización antigénica de la cepa vacunal teniendo
como resultado una reacción positiva para los ocho
AcMo que se tienen en nuestro país. Este patrón es
atípico y muy poco frecuente en México, sin embargo es
semejante al de cepas de laboratorio como ERA y SAD.
Actualmente en México dicho panel está siendo
insuficiente para discernir con claridad a los reservorios
responsables de mantener los ciclos enzoóticos del virus
por un sobrelapamiento de ellos, de aquí la importancia
de complementar estos estudios con análisis moleculares
que permitan la tipificación de las cepas del virus de la
rabia. El análisis de las secuencias nucleotídicas parciales
de ambos genes mostraron una relación muy estrecha de
la cepa viral en estudio con cepas atenuadas como SAD,
ERA, Flury, así como con virus de la rabia aislados de
zorras en China, perros y lobos de África, entre otros;
indicando que esta cepa posiblemente tenga epítopos
importantes que confieren mayor protección contra varias
cepas circulantes.
Conclusiones. La cepa vacunal del virus de la rabia
analizada mostró un patrón de reacción positiva para los
ocho AcMo que se tienen en México. El análisis
bioinformático muestra que esta cepa vacunal tiene alta
homología con cepas de laboratorio principalmente con
SAD, así como con cepas circulantes en el ciclo urbano y
en ganado, lo que probablemente le de a esta cepa del
virus de la rabia la capacidad de inducir una protección
amplia ante las variantes circulantes en nuestra país.
Agradecimientos. Este proyecto fue financiado por la
Secretaria de Investigación y Posgrado del IPN a través
de los proyectos: 20051063, 20060659 y 20070693. YI
Moreno Salcedo es becaria CONACyT y R.M. RibasAparicio agradece el apoyo a COFAA y EDD-IPN
Bibliografía.
1. Wilkinson, L. (2002). History. En: Rabies. Jackson, AC &
Wunner, WH. Ed. Academic Press, USA. 1-22
2. Benmansour, A, Leblois H, Coulon P, Tuffereau C, Gaudin
Y, Flamand A, Lafay F. (1991). Antigenicity of rabies virus
glycoprotein. J Virol., 65:4198-203
3. Koser ML, McGettigan JP, Tan GS, Smith ME, Koprowski
H, Dietzschold B, Schanell MJ. (2004). Rabies virus
nucleoprotein as a carrier for foreign antigen. Proc. Natl. Acad.
Sci., 101:9404-9410