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TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS PARA EL
DIAGNÓSTICO DE VIRUS
FITOPATÓGENOS
OFICINA DE CENTROS DE DIAGNÓSTICO Y PRODUCCIÓN
Unidad del Centro de Diagnóstico de Sanidad Vegetal
Laboratorio de Virología
INTRODUCCION
• Los virus son agentes
infecciosos
submicroscópicos .
• Se caracterizan por
ser biótrofos.
• Constituidos por ácido
nucleico (ARN o ADN)
de una sola hebra o
doble hebra + una
capa proteica.
TAMAÑOS
COMPARATIVOS
DE PATÓGENOS
DE VEGETALES
CLASIFICACIÓN
•La mayoría de virus de
plantas son ARN de cadena
simple
•La taxonomía viral al inicio
se basó en formas, hospederos
y vectores.
•Hoy : FILOGENÉTICA=
Según la secuencia
del ácido nucleico
•Hospedero+
síntoma característico+
virus (en inglés)
-Tobacco mosaic viruses
-Barley Yellow Dwarf Virus
-Wheat Streak Mosaic Virus
-Peanut Clump Virus
ENFERMEDAD Y SINTOMAS
• Un virus puede infectar a una especie de planta o a diferentes
Familias de plantas. También una especie de planta puede
estar atacada por uno o muchos virus distintos.
• Después de entrar en las células del huésped, los virus se
replican, se trasladan a otras células y finalmente se
acumulan en diversos tejidos de la planta. Durante este
proceso, los virus usan el proceso metabolico normal y
causan alteraciones, dando lugar a reacciones del huésped,
que se denominan “síntomas”.
MOSAICO SEVERO
I. SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS
A. Mosaico
Alternancia de distintos colores en forma irregular. El patrón se
ve como áreas claras y oscuras, o amarillo y verde sobre las
hojas y las áreas pueden ser angulares o internervales. Cala y
lilium con mosaico.
DIFERENTES GRADOS DE MOSAICO
I. SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS
• B. Amarillamiento
• Se caracteriza por clorosis distribuida uniformemente en
toda la hoja o parcialmente, o sólo en los márgenes
secundarias o en áreas situadas entre las nervaduras.
I. SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS
• C. Manchas anulares
• Constituidas de un centro clorótico o necrótico rodeado por
anillos simples o concéntricos cloróticos o necróticos.
Blueberry necrotic ring blotch
AMARILLAMIENTO
Sólo en los márgenes secundarios y otras empiezan en
las nervaduras.
Síntoma : “ Cálico”
Causado Virus del mosaico de la alfalfa (AMV)
SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS
• D. Necrosis
• Manchas foliares regulares o irregulares, estrías en
peciolos y tallos. A veces generalizada y otras veces
puede quedar restringida a las nervaduras.
INSV en Cineraria
SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS
E. Anormalidades del crecimiento
Crecimiento desigual de hojas, tallos, hojas, flores y frutos.
Comprenden las ampollas o levantamiento de áreas del limbo de
color verde normal en hojas con mosaico, encrespamiento u
ondulaciones del limbo.
SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS
• F. Estrías o bandas
• Producidas principalmente por virus.
• Las manchas de los tejidos de hojas infectadas se alargan a lo
largo de las venas para formar rayas o bandas cloróticas o
amarillas o rojas que se tornan marrones o negras.
II. SINTOMAS PRODUCIDOS por Agentes
Cuarentenarios
• EJ: ARANDANO
• 4.1. Hojas de arándano infectado con Blueberry Leaf Mottle
Virus (BLMoV) mostrando moteado y necrosis
4.2. Manchas circulares rojas sobre el tallo de arándano de un
año infectado con Blueberry Red Ringspot virus (BRRV)
4.3. Hoja de arándano con líneas necróticas típicas
(quemados) de infección con Blueberry Scorch Virus (BlScV).
4.4. Hojas de arándano con clorosis y manchas
Causado por infección con Blueberry Shock Virus (BlShV).
4.5. Arándano con síntomas de tiras rojas sobre el tallo
Causado por Blueberry Shoe String Virus (BSSV).
4.8 Otro cultivo
Hojas de Camberries con síntomas de la enfermedad de manchas anulares
(atribuído al agente causal Blueberry red ringspot virus).
4.6. Arándano con distorción de hojas
Causado por Peach Rosette Mosaic Virus - PRMV
4.7. OTROS VIRUS (Ar.)
Los brotes de un arándano infectados con ToRSV, mostrando lesiones
cloróticos y necróticos de hojas y tallos
3. Coloración verde oscura y púrpura de hojas de arándano
debido a la deficiencia de fósforo (P).
V. OBSERVACIONES DE ASPECTOS FISIOLOGICOS
• 1. Clorosis y enrojecimiento de hojas de arándano con
deficiencia de nitrógeno
2. Crecimiento Reducido
Enrojecimiento anormal del tallo, hojas y márgenes de hojas causada por
deficiencia de nitrógeno (N).
Deficiencia de potasio (K) y fósforo (P) causa síntomas similares.
II. MUESTREO DE MATERIAL VEGETAL
PARA LA DETECCIÓN DE VIRUS
• Métodos de muestreo
• Son esenciales para la detección e
identificación
de
agentes
patógenos
(distribución en las plantas hospederas pueden ser
irregulares o heterogéneas)
ELECCION DE LA MUESTRA
• Arboles Asintomáticos
• Se colectan 4 ramas con hojas (de 10 a 15 cm de largo).
• Las ramas no deben ser viejas, pero tampoco deben ser de los
brotes recién formados o nuevos.
Si no hay ramas disponibles (ejem: plantines pequeños de
viveros)
Se colectan 15 a 20 hojas completamente expandidas y
endurecidas de cada una
ENVÍOENVIO
DE MUESTRAS
VEGETALES
DE SEMILLAS
ENVÍO DE MUESTRAS VEGETALES
• IMPORTANTE
• Envío de las muestras se realice en corto tiempo y
sobre todo, es necesario proteger las muestras de la
temperatura (4°C)
• Si no es así: Las hojas comenzarán a oxidarse (NO es
recomendable procesar ese tejido para hacer el
diagnóstico)
• RECOMENDACIÓN: Envíen ramas
(sintomáticas o asintomáticas).
con
hojas
ENVÍO DE MUESTRAS VEGETALES
• 1. Colocar las muestras de ramas con hojas (u hojas
solamente) en papel toalla o bien en bolsa de papel
ENVÍO DE MUESTRAS
• 2. Introducir cada muestra en una bolsa de
plástico.
• 3. Colocar sobre la bolsa el número de
identificación de la muestra (se sugiere asignar
un número consecutivo y garantizar que la etiqueta
no se borre).
• 4. Sacar el aire de la bolsa y cerrarla.
ENVÍO DE MUESTRAS
• 5. Colocar las muestras en hielera con refrigerantes para
protegerlas de la temperatura oscilante y evitar la oxidación de
las hojas.
• 6. Las muestras deberán enviarse preferentemente el mismo
día de su colecta, si esto no es posible, es necesario
mantenerlas en refrigeración (4°C) para enviarlas el día
siguiente.
• 7. El envío de las muestras deberá
acompañarse de una solicitud
de diagnóstico llenada correctamente.
• 8. Notificar el envío de muestras al
laboratorio y considerar los días laborales.
Toma y envío de muestras para
descarte de ASBVd
•
Se recomienda tomar muestras de tres partes de la planta, las hojas deben ser jóvenes de
aproximadamente 1 a 2 meses de desarrollo, de color verdoso brillante.
•
Se tomaran de3 a 5 hojas por cada sector, formándose una muestra por árbol la cual contara
con 15 hojas de plato, 5 apicales, 5 media y 5 basales.
•
Las muestras deberán ser colocadas en papel toalla y envueltas en una bolsa plástica, si la
toma de muestras demora mas de un día es recomendable que las muestras sean
refrigeradas a 4 grados centígrados, teniendo siempre en cuenta que la bolsa debe estar
cerrada sino se desecara la muestra y no se podrá hacer el análisis.
•
No congelar el material ya que provoca daño en el tejido.
•
Lo ideal es enviar la muestra el mismo día de la toma de muestra en el campo, caso contrario
acompañar las muestras con geles refrigerantes dentro de una caja tecnopor .
II. MUESTRAS RECHAZADAS
• A) Muestras deshidratadas enviadas solo en
bolsas de plástico
MUESTRAS RECHAZADAS
• B) Muestras deshidratadas, enviadas solo en
bolsas de papel toalla y papel kraft.
MUESTRAS RECHAZADAS
• C) Muestras oxidadas o deterioradas, a pesar
de estar en papel toalla y bolsas de plástico
debido a que la muestra tenía exceso de
humedad.
Otros causales de rechazo
• Los datos de la solicitud no corresponden a la
muestra.
• Cantidad insuficiente de muestra
• Parte vegetal no adecuada para el ensayo…etc
Gracias
hasencios@senasa.gob.pe
milepoe@yahoo.com