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BIOPOLÍMEROS OBTENCIÓN DE CELULOSA BACTERIANA La celulosa es el polímero más abundante de nuestro planeta. Además de ser uno de los principales constituyentes de la pared celular de las plantas, la celulosa tiene numerosas aplicaciones industriales (vestimenta, papel). Las bacterias Gram negativas de la familia Acetobacter se desarrollan en condiciones aerobias. La transformación de carbohidratos como el etanol en ácido acético (fermentación acética) es el fundamento de la producción de vinagres. Acetobacter xylinum es una bacteria del suelo que puede ser aislada de frutas caídas al suelo. Como parte del metabolismo de la glucosa, sintetiza subunidades de celulosa que son liberadas por extrusión al medio a través de los poros de la pared celular. La unión de esas microfibrillas forma una película que retiene a las bacterias formando un biofilm sobre el sustrato en descomposición. Desde el punto de vista metabólico, la celulosa es un metabolito secundario sintetizado cuando las condiciones del medio son satisfactorias desde el punto de vista nutritivo. Diversas investigaciones indican que en Acetobacter xylinum, la síntesis de la celulosa estaría controlada por un operón. Algunas de las principales aplicaciones de la celulosa de origen bacteriano: Membranas para “headphones”. Espesantes de alimentos, de pinturas, de tintas y de sustancias adhesivas. Protección de heridas (quemaduras) antes de un trasplante de piel. BIBLIOGRAFÍA CANNON, R et al. Acetobacter xylinum: an inquiry into cellulose biosynthesis. The American Biology Teacher 62:6, 2000. Guía 41 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br BIOPOLÍMEROS / OBTENCIÓN DE CELULOSA BACTERIANA ACTIVIDAD PRÁCTICA Las bacterias Gram negativas de la familia Acetobacter se desarrollan en condiciones aerobias. La transformación de carbohidratos como el etanol en ácido acético (fermentación acética) es el fundamento en la producción de vinagres. Acetobacter xylinum es una bacteria del suelo que puede aislarse de frutas caídas en el suelo. Como parte del metabolismo de la glucosa, sintetiza subunidades de celulosa que son liberadas al medio mediante extrusión a través de los poros de la pared celular. La unión de esas microfibrillas forma una película que retiene las bacterias formando un biofilm sobre el sustrato en descomposición. La celulosa de origen bacteriano tiene varias aplicaciones en la industria, como componentes de membranas para “headphones” y como espesante de alimentos y tintas. Una vez purificada es esterilizada, siendo también utilizada para proteger heridas (quemaduras) previo a un transplante de piel. OBJETIVO Obtener hojas de celulosa a partir de un cultivo de Acetobacter xylinum. MATERIALES Vinagre fuerte (6-8% de acidez) preparado como se indica en la Guía 31 (Fermentación acética: cómo obtener vinagre fuerte), 1 saquito de té (1 g), 2 cucharas de azúcar, recipientes adecuados, paño de algodón, elástico, film de PVA. PROCEDIMIENTO 1. Preparar una infusión con 1 g de té en 500 ml de agua hervida. 2. Disolver bien 2 cucharadas soperas de azúcar. 3. Dejar esfriar hasta alcanzar la temperatura ambiente (30ºC es la temperatura ideal). 4. Agregar 50 ml de vinagre fuerte. 5. Distribuir en recipientes de vidrio o de plástico, llenando hasta mitad. 6. Cerrar cada recipiente con 1 paño de algodón, ajustado con un elástico. Incubar en la oscuridad. 7. Esperar al menos de 7 a 10 días para observar el crecimiento de una capa viscosa en la superficie. 8. Retirar la capa viscosa de la superficie, lavar y dejar secar sobre una superficie cubierta con film de PVA, para que no se pegue. Guía 41 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br BIOPOLÍMEROS / OBTENCIÓN DE CELULOSA BACTERIANA NUESTRO COMENTARIO Esta actividad representa un desdoblamiento de las actividades relacionadas con la producción de vinagre. En el vinagre fuerte, coexisten diferentes especies de la familia Acetobacter. Los vinos suaves favorecen el crecimiento de A. Xylinum y por lo tanto de la capa gelatinosa. Los vinos secos favorecen el crecimiento de A. aceti, formándose una capa gelatinosa menor. En este caso, el vino es sustituido por una infusión de té azucarado, que aporta los nutrientes necesarios para el microorganismo. La capa gelatinosa puede requerir varios lavados para la eliminación del azúcar remanente. Con una manipulación cuidadosa se pueden obtener hojas de celulosa, tal como se observa en la figura. Figura: Hojas de celulosa de origen bacteriano. ¿CÓMO ARMAR UN PROYECTO? Probar con diferentes tés y con un medio de cultivo definido, como el que figura en la Guía 40 (Medios de cultivo: medio para el cultivo de Acetobacter xylinum). Probar con agua de coco. En las Filipinas existe un postre llamado nata de coco, que se prepara de forma análoga. Comparar los resultados obtenidos con diferentes tipos de azúcar (azúcar moreno y azúcar cristal). Comparar los resultados obtenidos con diferentes cantidades de azúcar (0 g, 40 g y 60 g). Guía 41 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br