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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BAJA CALIFORNIA
UNIDAD CIENCIAS DE LA SALUD
LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR
PRÁCTICA 4:
MEDIOS DE CULTIVO Y SIEMBRA DE BACTERIAS Y HONGOS
Introducción
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Generalmente las células
en crecimiento pueden fabricar sus proteínas a partir de fuentes adecuadas de nitrógeno y
carbohidratos suministrados por el medio de cultivo; sin embargo, existe además una
cantidad de sustancias orgánicas adicionales que se requieren en cantidades mínimas y
que son muy activas en el crecimiento.
La presentación del medio de cultivo puede ser líquida o sólida. El agar es un
elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa
completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados.
Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es
atacado por aquellas que crecen en él. Actualmente los medios sólidos son de uso
universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay también gran cantidad de medios
líquidos cuyo uso está ampliamente extendido en el laboratorio.
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos medios. El
sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es la autoclave.
Los medios artificiales o sintéticos se pueden preparar a partir de sus
componentes individuales, se pueden adquirir comercialmente como medios
deshidratados a los que solamente hay que añadir la cantidad de agua necesaria. El
fabricante indica la composición, la caducidad, y la cantidad que debe pesarse por cada
litro a preparar e incluso como debe esterilizarse.
Una vez preparado el medio, es necesaria la siembra de los microorganismos que
se requieren aislar. Par los medios solidos al momento de inocular se requieren seguir la
técnica adecuada para poder obtener crecimiento de colonias aisladas (Fig.1)
Objetivos:
-
Que el alumno aprenda a preparar medios de cultivo para bacterias y hongos
Conozca y aplique la técnica correcta de siembra
Maneje la autoclave con los debidos cuidados
Materiales:
-Autoclave
-Picetas
-Agua destilada
-Mecheros bunsen
-Asa bacteriológica
-Caja de Petri
-Matraz Erlenmeyer de 250ml
-Agar SABOURAUD
-Bacto agar
-Balanza analítica
-Espátulas
Muestras Biológicas
-Bacterias
-Hongos
Metodología
Para preparar los medios de cultivo:
Agar Sabouraud:
-Suspender 65gr de medio deshidratado en un litro de agua destilada. (NOTA: el volumen
final que utilizarán será de 200ml)
-Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver
completamente los ingredientes. EVITAR EL SOBRE CALENTAMIENTO
-Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.
-Dejar enfriar a temperatura ambiente antes de su utilización
Método casero:
PDA
Papa sin pelar 200 gr
Azúcar 10 gr
Agar 18 gr
Agua destilada 1 litro
Lavar las papas, cortarlas y hacerlas hervir en un litro de agua destilada por 20 minutos,
colar y disolver en el líquido el azúcar y el agar. Esterilizar en autoclave durante 15
minutos a 15 libras de presión.
Bacto-Agar
-Similar a al procedimiento para hongos. Leer las indicaciones del producto.
Medio casero:
Proteína hidrolizada 7gr
Extracto de levadura 3gr
Azúcar 1gr
Agar 15 gr
Agua destilada 1Lt
Mezclar todo el un matraz hasta que se incorporen los ingredientes. Esterilizar en
autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presión.
Para la realización de la siembra:
-Desinfectar el área
-Prender el mechero
-Vaciar en las cajas de Petri el medio de cultivo
-Dejar solidificar
-Inocular las bacterias y/o hongos con el asa bacteriológica
-Tapar la caja
-Incubar a temperatura ambiente
-Rotular las cajas con:
Microorganismo
Grupo y subgrupo
Fecha
Fig. 1. Técnica para siembra de Microorganismos en una placa de medio sólido.
Recomendaciones generales:
Es imprescindible trabajar con material y soluciones estériles con objeto de que los
resultados que se obtengan correspondan al microorganismo o microorganismos que
están presentes en la muestra en estudio y no a contaminantes que procedentes del
medio o los materiales, puedan desarrollarse y falsear las pruebas.
Previo a la siembra:
-Se debe desinfectar siempre el area donde se va a trabajar con cloro al 10% y alcohol.
Incluso se puede utilizar Lysol®
-Durante la siembra:
-Utilizar guantes
-Trabajar siempre con el mechero encendido y cerca del mismo. Evitar hablar en todo
momento y/o hacer corrientes de aire.
Cuestionario:
1.- ¿Cuál es la clasificación de los medios de cultivo?
2.-Enlista 3 tipos de agar y para que se utilizan
3.-Si requieres sembrar Streptococcus sp ¿En qué tipo de agar los sembrarías y que es lo
que pudieras observar?
4.- ¿Cuál es el funcionamiento de la autoclave y porque debe manejarse con mucho
cuidado?
5.- Explica (con tus propias palabras) que es: inocular, esterilizar, asepsia, cepa y colonia.
6.- Realiza una tabla en la cual proporciones 3 ejemplos de hongos y 3 ejemplos de
bacterias patógenas, indicando sus principales características, la enfermedad que causan
y si crecen en algún medio de cultivo especial y cual sería ese medio.