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UNIVERSIDAD DEL SALVADOR PROGRAMA UNIDAD ACADEMICA CARRERA VETERINARIA DIVISION/COMISION SEGUNDO AÑO OBLIGACION ACADEMICA ANUAL X TURNO MAÑANA MICROBIOLOGÍA CUATRIMESTRAL ASIGNACION HORARIA Por /Semana: Total: 160 Horas. Total: 120 Horas 5 Horas PROFESOR TITULAR/ A CARGO PROF. LUIS SAMARTINO (MV MSc. Ph D ) 1.- OBJETIVOS DE LA ASIGNATURA Adquirir los conocimientos de microbiología y de los organismos patógenos que provocan enfermedades en animales domésticos, como así también introducir conceptos en microbiología clínica y diagnóstica . Comprender a través de las prácticas de laboratorio la importancia de las características del desarrollo, la morfología colonial , el aspecto microscópico , los métodos de identificación y la sensibilidad antimicrobiana de bacterias que se encuentran como flora normal ó patógena en animales . Interpretación y empleo de técnicas inmunológicas para el diagnóstico de infecciones bacterianas y virales. Comprender la importancia de los aspectos relativos a la correcta elección, toma y conservación de las muestras serán firmemente puntualizados para la obtención de resultados significativos. Integración de conocimientos y habilidades, y el desarrollo de la capacidad analítica, conducirá a una correcta aplicación de las técnicas microbiológicas por el Médico Veterinario , proveyendo así invalorable información sobre la etiología y el tratamiento lógico de la enfermedad infecciosa. 1 2.- CONTENIDOS UNIDAD TEMÁTICA N°I: INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA Historia. Precursores. Naturaleza del mundo microbiano. Microbiología en Medicina Veterinaria. Nociones sobre microbiología general y aplicada. El laboratorio microbiológico. Microbiología diagnóstica. Microbiología industrial. (Alimentos, vacunas, antibióticos). Desarrollo de la genética molecular y microbiana. Evolución. UNIDAD TEMÁTICA N°II : ORGANIZACION DE LOS MICROORGANISMOS Propiedades de los sistemas biológicos. Tipos de células: Procariota y Eucariota. Caracteres comunes y diferenciales: estructurales, fisiológicos y funcionales. Generalidades sobre: Bacterias. Hongos. Virus. Esquemas de clasificación e identificación de los microorganismos. Principales características de los microorganismos: cultivo, morfología, metabólicas, composición química, antigénica, genética. Nomenclatura, taxonomía. Claves artificiales. Taxonomía numérica. UNIDAD TEMÁTICA N°III : MORFOLOGIA Y COMPOSICION QUIMICA Bacterias típicas. Forma. Agrupación. Pleomorfismo. Pared bacteriana. Cápsula. Membrana citoplasmática. Mesosomas, Ribosomas. Protoplastos y Esferoplastos. ADN. Plásmidos. Citoplasma. Vacuolas, Inclusiones. Esporas. Flagelos. Pili. Composición química. Espiroquetas. Rickettsias. Mycoplasmas. Chlamydia. Forma y estructura celular. Composición química. UNIDAD TEMÁTICA N°IV : AGENTES ANTIMICROBIANOS Conceptos. Utilización de distintos agentes. Aplicaciones prácticas. Agentes Físicos Temperatura: Calor seco y húmedo; frío. Radiaciones ultravioletas. Radiaciones ionizantes. Ondas ultrasónicas. Desecación Filtración. Ultrafiltración. Esterilización. Tyndalización. Agentes químicos Antisépticos. Desinfectantes. Medición del poder desinfectante. Antibióticos. Agentes quimioterápicos: Antibióticos, Beta lactámicos, inhibidores de membrana celular, inhibidores de la función del ADN, inhibidores de la síntesis proteica, análogos metabólicos. Resistencia: mecanismos. Producción de antibióticos. Sinergismo. UNIDAD TEMÁTICA N°V : ESTUDIO POR OBSERVACION DE MICROORGANISMOS Técnicas más utilizadas. Coloración de microorganismos. Concepto. Nociones generales. Tinciones simples, especiales, diferenciales. Gram. Coloración de bacterias ácido alcohol resistentes, esporas, cápsulas, cilias, pared celular y membrana citoplasmática. Coloración de mycoplasmas. Coloración de rickettsias. Coloración de hongos. Microscopía de fluorescencia. Microscopía de campo obscuro. 2 Microscopía electrónica: Obtención de virus y bacterias para su observación al microscopio electrónico. Cortes, sombreados, tinciones negativas. Microscopía de barrido. UNIDAD TEMÁTICA N°VI : METABOLISMO Y NUTRICION Las enzimas en microbiología. Composición. Estructura. Endo y exoenzimas. Enzimas de constitución y de inducción. Incorporación de nutrientes. Transporte de membrana. Especificidad. Modo de acción. Obtención, transporte y almacenamiento de energía en el metabolismo heterótrofo; fermentación, respiración aerobia y anaerobia, fotosíntesis, transporte de electrones, fosforilación oxidativa. Presencia de catalasa, peroxidasa, superoxido dismutasa. Relación con metabolismo en aerobios, anaerobios, microaerófilos. Nutrición: autotrófica, heterotrófica. Determinación de los requerimientos nutritivos. Factores de crecimiento. Medios nutritivos para bacterias Preparación de medios de cultivo: líquidos, sólidos y semisólidos. Simples y enriquecidos. Medios sintéticos. Medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento. UNIDAD TEMÁTICA N°VII : REPRODUCCION DE BACTERIAS Y HONGOS Multiplicación bacteriana. Ciclo de la célula bacteriana, división. Formación de endosporas. Crecimiento de poblaciones bacterianas. Cuantificación. Curva de crecimiento. Aplicación. Reproducción de hongos y levaduras. Reproducción sexual y asexual. Artrosporos. Blastosporos. Conidiosporos. Clamidosporas. UNIDAD TEMÁTICA N°VIII : GENETICA BACTERIANA Variación: morfológica, metabólica, antigénica, de virulencia. En importancia diagnóstica y en la industria. Mutación: espontánea e inducida. Agentes mutagénicos. Transducción. Transformación. Conjugación. Recombinación. Bacteriocinas. Manipulación genética. UNIDAD TEMÁTICA N° XIX : PATOGENICIDAD MICROBIANA Relación huésped-parásito. Sistemas de defensa. Barreras naturales. Resistencia natural. Flora normal. Sistemas inespecíficos. Infección, enfermedad. Virulencia de los microorganismos: Factores de superficie: Cápsulas, fimbrias, exoenzimas, (hialuronidasa, colagenasa, estreptoquinasa, y coagulasa). Exotoxinas y endotoxinas. UNIDAD TEMÁTICA N°X : GENERALIDADES EN INMUNOLOGIA Concepto. Antígeno. Anticuerpo (inmunoglobulinas). Haptenos. Reacción antígeno anticuerpo. Inmunidad celular. Complemento. Reacciones serológicas para detectar y cuantificar reacciones antígeno-anticuerpo: Inmunofluorescencia: Directa e Indirecta, Aglutinación. Precipitación. Hemaglutinación. Inhibición de la Hemoglutinación. Fijación del complemento. Seroneutralización. Inmunodifusión. Enzimoinmunoensayo. Inmunohistoquímica. Inmuno peroxidasa directa e indirecta. PAP. Avidina-Biotina. Técnicas de referencia para el diagnóstico serológico de diferentes agentes microbianos. 3 UNIDAD TEMÁTICA N°XI : BIOLOGIA MOLECULAR EN MICROBIOLOGIA VETERINARIA Código genético. Información y exploración genética: Análisis, construcción y clonado de ADN en procariotes. Recombinación y Transposición. Plásmidos. Técnicas más comunes empleadas en biología molecular. Hibridización de ácidos nucleicos. Sondas Moleculares. PCR. Electroforesis de ARN genómico en geles de poliacrilamida. PAGE. Inmunobloting. UNIDAD TEMÁTICA N°XII : ANIMALES DE LABORATORIO Y TOMA DE MUESTRAS Importancia. Elección de animales. Métodos de sujeción. Inoculación experimental. Vías. Bioseguridad en el manejo de animales inoculados. Eutanasia. Necropsia. Obtención de muestras para analizar en el laboratorio. Asepsia. Toma de muestras de animales vivos y muertos para su análisis bacteriológico. Condiciones de envío. Procesamiento de distintos materiales. UNIDAD TEMÁTICA N°XIII : BACTERIAS GRAM NEGATIVAS Bacterias causantes de enfermedades digestivas y respiratorias de importancia veterinaria. Familia Enterobacteriaceae: Géneros Escherichia. Klebsiella, Serratia, Proteus, Salmonella, Shigella, Yersinia, Enterobacter. Familia Pasteurellaceae: Género Pasteurella, Haemophilus, Actinobacillus. Familia Pseudomoneaceae. Género Pseudomona. Otros géneros: Bordetella, Francisella. UNIDAD TEMÁTICA N°XIV: BACTERIAS GRAM POSITIVAS Bacilos anaerobios causantes de enfermedades de importancia veterinaria: Género Clostridium: No invasivos: C. tetani, C. botulinum; Invasivos: C. chauvoei, C septicum, C. hemolyticum, C. novyi, C. perfringens, C. sordelli, Bacllos aerobios y/o microaerófilos causantes de enfermedades de importancia veterianaria: Género Bacillus. B. anthracis. B.cereus, Género Listeria y Erysipelothrix. Género Corynebacterium. Género Actinomyces. Cocos causantes de enfermedades de importancia veterinaria. Géneros Streptococcus. Enterococcus, Staphylococcus. Género Dermatophilus. UNIDAD TEMÁTICA N°XV : RICKETTSIAS, CHLAMYDIAS Y MYCOPLASMAS Géneros Rickettsia y Coxiella. Familia Bartonellaceae. Género Bartonella. Género Borrelia y Treponema. Género Mycoplasma y Ureoplasma. Género Chlamydia. UNIDAD TEMÁTICA N°XVI : MYCOBACTERIUM, BRUCELLA, CAMPYLOBACTER, LEPTOSPIRA Género Mycobacterium. Bacterias causantes de enfermedades que afectan la reproducción animal: Género Campylobacter. Género Brucella. Género Leptospira. UNIDAD TEMÁTICA N°XVII : MICOLOGIA Introducción a la micología y enfermedades causadas por los hongos de importancia veterinaria. Clasificación. Morfología y estructura. Hongos filamentosos y levaduras hifas. Micelios. Exigencias nutritivas y de cultivo. Reproducción. Composición química. Agentes causantes de micosis superficiales: Género Microsporum, Trichophyton. Agentes causantes de micosis profundas: Género Aspergillus, Candida, Rhizopus, Mucor, Coccidioides, Histoplasma, Blastomyces, Cryptococcus. 4 UNIDAD TEMÁTICA N°XVIII : VIROLOGIA Historia. Conceptos. Generalidades. Definición. Métodos de estudio. Microscopía electrónica. Medición de partícula viral. Obtención y purificación de virus. Morfología. Simetría. Virus bacterianos y animales. Composición Química. Clasificación. Cultivo de tejidos: Primarios y de línea. Monocapa o suspensión. Cultivos más utilizados para diagnóstico o industria. Medios de crecimiento y mantenimiento. Bases y soluciones salinas. Animales susceptibles. Animales de laboratorio. Huevos embrionados. Replicación: Entrada del virus en la célula huésped. Bases. Eclipse. Síntesis intracelular. Formación de virus infectante. Liberación. Condiciones de la célula infectada. Efecto citopático. Ciclo lítico. Lisogénico. Infecciones simultáneas. Fenómeno de interferencia. Interferón. Infección inaparente. Infectados persistentes. Latencia. Portadores. Sustancias antivirales y mecanismos de acción. Diagnóstico virológico. Métodos diagnósticos. Inmunización contra enfermedades virales. Nociones de epidemiología de infecciones virales. UNIDAD TEMÁTICA N°XIX : CALIFICACION VIRAL VIRUS ADN Familia Poxviridae :Virus de la viruela bovina, ovina, porcina, aviar y del ratón (ectromelia). Lumpy skin disease. Fibroma de Shope y mixoma del conejo. Familia Iridoviridae : Peste Porcina Africana. Familia Adenoviridae: Virus de la hepatitis infecciosa canina. Adenovirus bovino. Familia Herpesviridae :Herpes virus bovino -1. IBR.IPV. Virus de Aujezsky. Virus del aborto viral equino. Virus de laringo traqueitis aviar. Enfermedad de Marek. Citomegalovirus. Fiebre Catarral Maligna. Familia Papovaviridae: Virus del papiloma y del polioma. SV40. Familia Parvoviridae: Parvovirus porcino (SMEDI), equino y canino. Virus de la panleucopenia felina. UNIDAD TEMÁTICA N°XX : VIRUS ARN Familia Flaviviridae: Virus de la diarrea bovina. Peste porcina clásica, Border disease. Familia Togaviridae: Virus de la encefalitis equina. Virus de la arteritis equina. Familia Picornaviridae: Virus de la Fiebre Aftosa. Virus del exantema vesicular del cerdo. Enterovirus porcino. Familia Retroviridae: Virus de la leucosis bovina. Virus de la anemia infecciosa equina. Leucemia felina. Familia Reoviridae: Rotavirus bovino. Rotavirus porcino. Rotavirus equino. Virus de la Lengua Azul. (BTV). Familia Ortomyxoviridae: Virus de la Influenza equina, humana y porcina. Familia Paramyxoviridae: Virus Parainfluenza-3 bovino. (PI -3). Virus del Distemper canino. Virus respiratorio sincitial. Virus de la Peste Bovina. Familia Coronaviridae: Virus de la gastroenteritis transmisible del cerdo. Coronavirus bovino. Familia Rhabdoviridae: Virus de la Rabia. Virus de la Estomatitis Vesicular. 5 NOTA: En las unidades XIII, XIV, XV, XVI, XIX y XX los objetivos para el alumno consisten en reconocer y distinguir las familias, géneros y mecanismos de patogenicidad de los microorganismos patógenos de mayor importancia veterinaria. TRABAJOS PRÁCTICOS MICROSCOPIA. Clases de microscopio, óptico, campo oscuro, inmunoflourescencia, partes del mismo, etc. 1) ESTERILIZACIÓN I- Lavado y acondicionamiento para esterilización de material de laboratorio. Decontaminación del material utilizado. Manejo de materiales descartables. 2) ESTERILIZACIÓN II- Métodos de esterilización: esterilización en hornos y autoclave. Validación de procesos. Controles de esterilización. Desinfección: agentes químicos empleados. 3) TOMA DE MUESTRA- Tipos de muestras según la patología y las técnicas de diagnóstico. Condiciones de recolección y transporte. 4) SIEMBRA Y AISLAMIENTO- Aislamiento de bacterias. Obtención de cultivos puros. Medios de aislamiento: selectivos, diferenciales, enriquecidos. Morfología de colonias. Uso de medios de enriquecimiento. Cultivos en medios líquidos, sólidos, semisólidos. 5) TINCIONES I- Observación microscópica de microorganismos. Empleo de distintos tipos de microscopio. Técnicas en fresco y con fijación. Forma y agrupación de bacterias. Coloración de Gram. 6) TINCIONES II- Coloración de esporas, coloración de cápsulas, coloración de Ziehl Neelsen para bacilos ácido-alcohol resistentes. 7) PRUEBAS BIOQUÍMICAS- Identificación de bacterias mediante pruebas bioquímicas. Pruebas primarias, ej. catalasa, oxidasa, oxidación- fermentación. 8) Enterobacteriaceae I- Características de la Familia. Aislamiento, medios selectivos y diferenciales. Empleo de caldos de enriquecimiento. 9) Enterobacteriaceae II- Observación microscópica. Pruebas bioquímicas para Género y Especie. Identificación serológica de serotipo (antígenos O y H) y tipo de fimbria (antígeno F). 10) ANAEROBIOS- Manejo de microorganismos anaerobios. Aislamiento e identificación. Condiciones de siembra y cultivo. Género Clostridium. Especies de importancia en veterinaria. 11) Género Staphylococcus- Aislamiento e identificación. Especies importantes en humanos y animales. Patologías asociadas. 12) ANTIBIOGRAMAS I. Técnicas para determinar la susceptibilidad a antimicrobianos de bacterias. Concentración Inhibitoria Mínima (CIM). Técnica de difusión con discos (Método de Kirby Bauer). 13) - ANTIBIOGRAMAS II- Lectura e interpretación de resultados. 14)- HONGOS Siembra y aislamiento. Medios de cultivo. Identificación: técnicas. Características macroscópicas y microscópicas 6 15) TECNICAS INMUNOLÓGICAS I, Aglutinación, precipitación, seroneutralización gel difusión, Conceptos teórico prácticos, su aplicación en medicina veterinaria 16) TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS II, Enzimoinmunoensayos 1 , inmunoflourescencia,, polarización fluorescente 17) TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS III, Reacción en cadena polimerasa (PCR) 1 18) GENERO BRUCELLA. Técnicas de diagnóstico serológico, técnicas de aglutinación, BPA, Wright, 2mercaptoetanol, Polarización fluorescente. Diagnóstico bacteiriologico 19) GENERO MICOBACTERIAS, Medios de cultivo, técnicas para observación microscópica, visualización de diferentes Mycobacterium. 20) GENERO ESPIROQUETAS, Leptospiras, diagnóstico serológico, microaglutinación de Martín y Petit, inmunoflourescencia, observación de tejidos infectados. Diagnóstico bacteriológico, clases de medio de cultivo. 21)Virología. AISLAMIENTO VIRAL. Manejo de muestras, Inoculación de huevo embrionado, inoculación de animales de laboratorio. 22) Virología. CULTIVO DE TEJIDOS . Lineas celulares primarias, estables, manejo de cultivo celular, condiciones de esterilidad, producción de lineas para cultivo viral. 23) Virología. MICROSCOPIA ELECTONICA. Descripción del microscopio, preparación de materiales, visualización de muestras de importancia veterinaria. 24) Virología, Técnicas de diagnóstico virológicas, hemoaglutinación, inhibición de la hemoaglutinación, hemoadsorción 25) Virología. ELISA Y PCR para la detección viral. Extracción de ARN viral. Importancia de dicha metodología para el diagnóstico virológico precoz. 26) Priones. Importancia de las enfermedades ocasionadas por priones, scrapie, BSE, 3- BIBLIOGRAFÍA BÁSICA BROCK , T.D. Microbiología . Edit. Hispanoamericana , 4° Edición , 1987 CARTER , G.R. Bacteriología y Micología Veterinarias , Edit. Manual Moderno 1989 CARTER , G.R. Fundamentos de Bacteriología y Micología Veterinaria , De. Acribia 1989 DAVIS , B DULBECCO Tratado de Microbiología , Edit. Salvat 1984 SOTO Y de TORRES ; Naturaleza y estructura de los virus animales . Serie Virología Edigem S.A. 1983 FENNER , F . Virología Veterinaria , Edit. Academic Press , 1987 , Edición castellana , Edit. Acribia 1992 CUNGERMAN , P.F. ; SCHWARTZMAN , R. Micología Médica Veterinaria , Edit. Continental S.A. 1977 MOHANTY-DUTTA , Virología Veterinaria , Edit Interamericana , 1990 NICOLET , J. ; Compendio de Bacteriología Médica Veterinaria , Edit. Acribia , 1992 ZINSSER , H ; Microbiología , Edit. Hispanoamericana , 1990 SCALAN ; Introducción a la Bacteriología Veterinaria , Edit . Acribia , 1992 7 CARABALLAL Y DUBIÑA ; Virología Médica , Edit. El Ateneo , 1991 CAWETZ ; Manual de Microbiología Médica , Edit. Manual Moderno , 1993 TORTORA , FUNKE , CASE ; Introducción a la Microbiología , Edit . Acribia , 1993 4.-BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA Revista de microbiología ( Asoc. Arg. Microb.) Revista Sociedad Medicina y Veterinaria Argentina (ambas no específicas) Journals : Veterinary Microbiology, Infection and Inmunity Comparative Inmunology , Microbiology and Infectious Diseases Journal of Microbiology Serie B American Journal of Veterinary Research (no específica ). 5.- SISTEMA DE EVALUACION PARCIAL Se tomarán dos exámenes parciales integradores con sus respectivos recuperatorios de las unidades temáticas correspondientes a Bacteriología y Virología. Para aprobarlos se deberá manejar adecuadamente el 60% de los contenidos previstos para cada una de esas pruebas. Se requerirá una monografía que será de carácter individual . La misma deberá ser presentada al final del año académico con el tema propuesto por la cátedra . 6.- SISTEMA DE EVALUACION FINAL El procedimiento de evaluación final será mediante un exámen integrador oral o escrito 7.- FIRMA DEL PROFESOR TITULAR O A CARGO DE CATEDRA Y FECHA. 8.- FIRMA Y ACLARACION CON LA APROBACION DEL DIRECTOR DE CARRERA Y FECHA Sello de la Unidad Académica 8