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PROPAGACIÓN IN VIVO CLONACIÓN DE SEGMENTOS NODALES DEL TALLO DE REPOLLO El género Brassica incluye una enorme variedad de plantas utilizadas en la alimentación, ya sea por sus hojas (repollos, coles, repollito de Bruselas), sus flores (coliflor, brócoli), sus raíces (nabo, rábano), sus semillas (mostaza) y su aceite (canola). El repollo común (Brassicaoleracea var. capitata) se caracteriza por sus numerosas hojas gruesas y superpuestas. Dentro de la cabeza, se encuentra el tallo, con una gema terminal y numerosas gemas axilares bien desarrolladas (Figuras 1 y 2). Figura 1. Cabeza de repollo, tallo y gemas. Figura 2. Tallo de repollo con las yemas Yema Tallo Yema El método de clonación a partir de segmentos nodales consiste en el aislamiento de un fragmento del tallo con gemas axilares y su transferencia a un medio de cultivo apropiado, donde se desarrollarán las plantas hijas. El método ha sido usado para la propagación vegetativa, tanto in vivo como in vitro. BIBLIOGRAFÍA AGEE S. Attack of the killer cabbage clones. Disponible en http://sciencebuddies.com/mentoring/project_ideas/PlantBio_p016.shtml RAVEN P.H, EVERT R.F. e EICHHORN S.E. Biologia Vegetal, 6a Edição. Rio de Janeiro, Editora Guanabara Koogan S.A., 2001. Guía 49 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br PROPAGACIÓN IN VIVO / CLONACIÓN DE SEGMENTOS NODALES DEL TALLO ACTIVIDAD PRÁCTICA La clonación de individuos de una determinada especie vegetal a partir de segmentos nodales permite una propagación vegetativa rápida de los ejemplares considerados más interesantes. OBJETIVO Obtener clones de repollo a partir de segmentos nodales con gemas axilares. MATERIALES Una cabeza de repollo, 1 cuchillo, 1 azulejo o tabla para cortar, bolsas pequeñas del tipo ziploc, papel toalla, un frasco spray con agua. PROCEDIMIENTO 1. Colocar varias capas de papel toalla dentro de las bolsitas. Humedecer levemente el papel, mediante 3 o 4 rociados con el frasco spray. CUIDADO! No colocar agua en exceso. 2. Deshojar la cabeza de repollo, con las manos. Identificar las gemas axilares y la gema terminal. 3. Cortar el tallo en rodajas y colocar cada una de ellas en una bolsita, cuidando de no invertir el sentido de polaridad natural de la planta (Figura 3). 4. Incubar en presencia de luz y observar periódicamente. Figura 3: Las etapas del procedimiento RESULTADOS ¿Cuántas gemas se desarrollaron? ¿Cuánto tiempo tardaron las gemas en desarrollarse? DISCUSIÓN Preparar y realizar un mini-proyecto de transferencia de los clones a la tierra. Guía 49 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br PROPAGACIÓN IN VIVO / CLONACIÓN DE SEGMENTOS NODALES DEL TALLO NUESTRO COMENTARIO Obtuvimos buenos resultados siguiendo este procedimiento (Figura 4). También testeamos otros materiales como tierra, arena, y una mezcla de tierra y vermiculita (Figura 5). En todos los casos, las gemas axilares se desarrollaron bien. Intentamos la transferencia en tierra, pero a pesar de que los clones sobrevivieron un tiempo no alcanzamos a observar ningún enraizamiento (Figura 6). También transferimos algunos clones a medio semisólido (0,2% de Nutrikelp y 0,8% de agar), donde observamos la formación de un callo espectacular (Figura 7). Figura 4. Desarrollo de gemas axilares en segmentos nodales del tallo de repollo. Figura 5. Desarrollo de gemas axilares del tallo de repollo, en diferentes substratos. Guía 49 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br PROPAGACIÓN IN VIVO / CLONACIÓN DE SEGMENTOS NODALES DEL TALLO Figura 6. Los clones, una vez transferidos a tierra. Figura 7. Formación de un callo en el medio con Nutrikelp, un producto comercial que contiene sales minerales y citocininas. ¿CÓMO ARMAR UN PROYECTO? Experimentar con diferentes sustratos para observar el desarrollo de clones a partir de las gemas axilares. Guía 49 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br