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1. EFECTO DE DIFERENTES FACTORES (TEMPERATURA, CONCENTRACIÓN DE ENZIMA Y SUSTRATO) EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA. LA CANTIDAD Y FORMA DE LA PAPA, ¿PUEDE AFECTAR LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATALASA? 2. AUTORES EQUIPO 3. MARÍN RAMÍREZ CLAUDIA YOSELINE. PALMA ORTÍZ CARLOS ADÁN. VERA OLGUÍN ANDREA SOFÍA. VICTORINO CHÁVEZ LENIN IVÁN. 3. RESUMEN. Primero realizamos una prueba para ver qué pasaba con el hígado al agregarle peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) y observamos que cambió de color el hígado y que empezó a burbujear, lo cual se debió a que se liberó oxígeno y agua. Después cada equipo seleccionó una hipótesis para llevar a cabo nuestra práctica y nosotros teníamos que hacer nuestra propia metodología para poder comprobar la hipótesis. La hipótesis que nosotros elegimos fue: ¿Qué se les ocurre que pasará con la velocidad de la reacción de la catalasa si en lugar de utilizar las muestras en trozo, las cortan o machacan? Nuestra hipótesis antes de realizar el experimento fue incorrecta ya que resultó que la velocidad de la reacción si cambiaba, en este caso aumentó. 4. INTRODUCCIÓN Las enzimas son proteínas que catalizan todas las reacciones bioquímicas. Además de su importancia como catalizadores biológicos, tienen muchos usos médicos y comerciales. Un catalizador es una sustancia que disminuye la energía de activación de una reacción química. Al disminuir la energía de activación, se incrementa la velocidad de la reacción. La mayoría de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles, es decir, que en ellas se establece el equilibrio químico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la formación de equilibrio químico, pero no afectan las concentraciones finales del equilibrio. La sustancia sobre la cual actúa una enzima se llama sustrato. Los factores que van a afectar a la actividad enzimática van a ser: Concentración del sustrato.- A mayor concentración del sustrato, a una concentración fija de la enzima se obtiene la velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentración del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción. Concentración de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentración de la enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto límite. Temperatura.- Un incremento de 10°C duplica la velocidad de reacción, hasta ciertos límites. El calor es un factor que desnaturaliza las proteínas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad. pH.- El pH óptimo de la actividad enzimática es 7, excepto las enzimas del estómago cuyo pH óptimo es ácido. Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofactores, la concentración del cofactor debe ser igual o mayor que la concentración de la enzima para obtener una actividad catalítica máxima. Catalasa La catalasa se obtiene fundamentalmente a partir de microorganismos y su función es convertir el agua oxigenada (H2O2) en agua (H20) y oxígeno (O2): 2 H2O2 → 2 H2O + O2 Esta enzima se caracteriza por su alta capacidad de reacción pero relativamente poca afinidad por el sustrato. La catalasa ( es una enzima que se encuentra en organismos vivos y cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno (H202) en oxígeno y agua. El peróxido de hidrógeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos pero por su toxicidad debe tranformarse rápidamente en compuestos menos peligrosos. Para ello se usa con frecuencia esta enzima que cataliza su descomposición en agua y oxígeno. Peróxido de Hidrógeno: El peróxido de hidrógeno (H2O2), también conocido como agua oxigenada, es un compuesto químico con características de un líquido altamente polar, fuertemente enlazado con el hidrógeno tal como el agua, que por lo general se presenta como un líquido ligeramente más viscoso que éste. Es conocido por ser un poderoso oxidante. A temperatura ambiente es un líquido incoloro con sabor amargo. En áreas como en la investigación, se utiliza para medir la actividad de algunas enzimas, como la catalasa. El punto de fusión es de –0,4 °C, y su punto de ebullición normal es de 150 °C. La papa contiene una enzima (Catalasa) la cual es un poderoso antioxidante, es decir, que impide la oxidación de las sustancias químicas. 5. HIPÓTESIS Y OBJETIVO 5.1 OBJETIVO. Comprobar experimentalmente si la velocidad de reacción de la enzima catalasa es la misma, aumenta o disminuye, cuando se trata de una papa entera o cuando ésta es machacada. 5.2 HIPÓTESIS. Antes de realizar nuestro experimento nosotros suponíamos esto: Para el primer experimento que hicimos con la maestra, que fue con una pequeña muestra de hígado, empezaron a salir burbujas, el hígado cambió de color y empezó a elevarse junto con las burbujas, por lo cual nosotros suponíamos que se debió a que el hígado presenta la enzima catalasa y reaccionó con el agua oxigenada, liberando oxígeno y agua. ¿Qué ocurrirá con la velocidad de la reacción si exponemos las muestras (y por tanto a las enzimas) a diferentes temperaturas? ¿Cuál imaginan que será el efecto de incrementar o disminuir el tamaño de la muestra (la concentración de enzimas) en el ritmo con que la catalasa descompone el peróxido de hidrógeno? ¿Cuál se les ocurre que será el efecto de aumentar la cantidad de peróxido en el ritmo con que la catalasa descompone el peróxido de hidrógeno? ¿Qué se les ocurre que pasará con la velocidad de la reacción de la catalasa si en lugar de utilizar las muestras en trozo, las cortan o machacan? A una temperatura baja la reacción tendrá una gran actividad enzimática, y a una mayor temperatura tendrá mayor velocidad pero disminuirá su actividad enzimática. Entre más muestra (catalasa), se producirá una mayor cantidad de oxígeno y por lo tanto si es menor la cantidad no se liberara tanto oxígeno. A mayor concentración del sustrato y a una concentración fija de una enzima se obtiene la velocidad máxima. Después de que se alcance esta velocidad, un aumento en la concentración del sustrato no tendrá efecto en la velocidad de la reacción. No se acelera la reacción ya que la cantidad de sustrato es la misma, por lo tanto la aceleración es la misma que la del trozo entero. Pero la hipótesis que nos interesa es esta. Nosotros suponemos que la velocidad de reacción es la misma cuando hablamos de la misma cantidad de sustrato, aunque éste se encuentre en condiciones distintas. 6. DESARROLLO 6.1 MATERIAL. Bata 1 Tubo de ensayo 1 Probeta Un mortero con pistilo Un cronometro Una espátula Una pipeta Una báscula Pinzas para tubo de ensayo Bisturí Una papa (ó menos) Un hígado Peróxido 6.1 METODOLOGÍA. Primero tomamos un trocito de hígado, y lo colocamos en el fondo de un tubo de ensayo, posteriormente lo sujetamos con unas pinzas. Luego añadimos 5 ml ó menos de agua oxigenada (que es lo mismo que peróxido de hidrógeno). Y apuntamos las observaciones e interpretación de lo sucedido. Terminando esto iniciamos con nuestro segundo experimento para el cual nosotros elegimos la papa para dar una solución a esta hipótesis: ¿Qué se les ocurre que pasará con la velocidad de la reacción de la catalasa si en lugar de utilizar las muestras en trozo, las cortan o machacan? Primero tomamos de la papa dos pequeños trozos, y los pesamos en la báscula para que sean iguales, cada trozo de papa pesaba 1 gr. ; después tomamos el trozo entero, posteriormente lo pusimos en la probeta y antes de añadirle el peróxido de hidrógeno debíamos de tener listo nuestro cronómetro, enseguida le agregamos el agua oxigenada y fuimos anotando cada 10 segundos, el cambio en la velocidad de reacción (o sea, cuando las burbujas iban subiendo) hasta que se hiciera constante. En seguida tomamos nuestra segunda muestra de papa, la cual la machacamos con el mortero. Una vez machacada, con la espátula recogimos la y la agregamos a la probeta y posteriormente seguimos los mismo pasos que con la papa entera. Preparamos el cronometro y empezamos a anotar los resultados por cada 10 segundos que pasaban. Figura 1. Aquí cortamos los trozos de papa y los pesamos para que los dos pesaran 1 gr. Figura 2. En esa imagen se ve cuando estábamos machacando la papa. 6.2 RESULTADOS Con la papa entera (1 gr.) Tiempo (s) Volumen (ml) 0 0 10 2.5 20 3 30 3.1 40 3.1 50 2.4 60 2.4 70 2.4 80 2.4 90 2.4 100 2.4 110 2.4 120 2.4 Con la papa machacada ( 1 gr.) Tiempo (s) Volumen (ml) 0 0 10 5 20 6 30 6.1 40 7 50 7.1 60 7.3 70 7.4 80 8 90 8.1 100 8.1 110 8.1 120 8.1 130 8.1 140 8.1 150 8.1 160 8.1 Figura 3. Aquí se muestra la velocidad de reacción de la papa machacada. 6.3 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS Primero que nada observamos que cuando hicimos el experimento con los trozos de hígado y con la papa, el hígado reacciono más rápido que la papa esto se debe a que en el hígado hay más peroxisomas que en la papa, estos peroxisomas al someterlos a la presencia del peróxido de hidrogeno (agua oxigenada), el cual es altamente reactivo y tóxico para las células del hígado, por lo que la función de los peroxisomas es proteger a las células del hígado del agua oxigenada. Las moléculas de agua oxigenada son rápidamente rotas por la enzima catalasa, enzimas las cuales están contenidas en los peroxisomas. Convirtiendo al agua oxigenada en compuestos no tóxicos como lo son el oxigeno que es desprendido durante la efervescencia. Cuando nos dedicamos a observar el experimento con los dos trozos de papa observamos que se produjo un burbujeo en los dos casos, (en uno más que en otro) esto se debió a que la papa contiene una enzima (catalasa) la cual es un poderoso antioxidante, es decir, que impide la oxidación de las sustancias químicas. Al agregar agua oxigenada o peróxido de oxígeno (H2O2) a una papa, la catalasa separara el oxigeno del peróxido de oxigeno, liberando una gran cantidad de gas (O2), esto es lo que produce el burbujeo que observamos en nuestro experimento. Y también pudimos ver que con el trozo de papa machacada se hizo la velocidad de reacción más rápida o sea que hubo más burbujeo, debido a que al machacarla se liberó más enzima que en el tubo con la papa entera. Por que se aumento la concentración del sustrato. Ejemplo de cómo aumenta. La velocidad de la reacción va aumentando a medida que aumenta la concentración de sustrato hasta que la enzima se satura. La velocidad de reacción va aumentando a medida que aumenta la concentración de sustrato, hasta que la enzima se satura. En lo que se refiere a la papa como ya antes mencionamos tiene catalasa y al agregarle el peróxido esta comenzó a liberar oxigeno y a formar agua pero en este caso manejamos un factor que puede afectar a la actividad enzimática la cual fue la concentración enzimática debido a que al machacarla cambio la reacción que cuando esta estaba entera ya que aumento mucho su velocidad (machacada) porque aumento la cantidad enzimática y al agregarle el sustrato (peróxido) reaccionaron y esto provoco un aumento en la velocidad. Nuestra técnica para calcular la velocidad de reacción con una papa entera y una papa machacada, fue medir el tiempo de reacción de las dos y ver el volumen que iban adquiriendo los dos casos. Así pudimos comprobar que la velocidad de reacción con mayor concentración de sustrato va aumentando y con menor concentración disminuye. 7. CONCLUSIONES Si cumplimos con nuestro objetivo, ya que pudimos comprobar experimentalmente que la velocidad de reacción de la enzima catalasa aumentó cuando se trata de una papa machacada, pero al tratarse de una papa entera, la velocidad de reacción disminuyó; pero comprobamos que nuestra hipótesis fue incorrecta ya que no dio como esperábamos porque habíamos dicho que no se aceleraba la reacción ya que la cantidad de sustrato es la misma, aunque en diferente concentración por lo tanto la aceleración es la misma que la del trozo entero. Y al hacer nuestro experimento vimos que si se acelero la velocidad de reacción con el trozo de papa machacada. Entonces se logró comprobar que la velocidad de la reacción de la catalasa en lugar de utilizar las muestras en trozo, cortadas o machacada es mayor lo cual indica que nuestra hipótesis fue errónea ya que nosotros postulamos que no aumentaría la velocidad de reacción y se mantendría de la misma manera pero al realizar el experimento nos fue lo que creíamos que saldría por lo tanto se logro el ver cómo reacciona la catalasa y para qué sirve mas no tuvimos una hipótesis correcta. 8. BIBLIOGRAFÍA (S): ENZIMAS (2011- Febrero) disponible en : http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm Enzimas que participan como barreras fisiológicas para eliminar los radicales libres: II. Catalasa (2011-Ferbrero) disponible en: http://bvs.sld.cu/revistas/ibi/vol15_2_96/ibi01296.htm Catalasa (2011- Febrero) disponible en: http://enciclopedia.us.es/index.php/Catalasa La Guía de Química (2011- Febrero) disponible en: http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/enzima-catalasa La papa y la catalasa (2011-Febrero) disponible en: http://www.buenastareas.com/ensayos/Acci%C3%B3n-De-La-Enzima-CatalasaDe/793351.html