Download FLEX Monoclonal Mouse Anti-Epstein-Barr Virus, LMP

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Epstein-Barr Virus, LMP
Clones CS. 1-4
Ready-to-Use
(Link)
Nº de catálogo IR753
Uso previsto
Para uso en diagnóstico in vitro.
FLEX Monoclonal Mouse Anti Epstein-Barr Virus, LMP, Clones CS 1-4, Ready-to-Use (Link), está indicado para su
uso en inmunohistoquímica junto con los instrumentos Autostainer Link. El anticuerpo marca células infectadas por
el virus de Epstein-Barr que expresen la proteína de membrana de la fase latente (LMP-1) y resulta útil en la
identificación de células tumorales en la enfermedad de Hodgkin (1-3) y en carcinomas nasofaríngeos (4) asociados
al virus de Epstein-Barr. La interpretación de los resultados de cualquier tinción o su ausencia debe
complementarse con estudios morfológicos con controles adecuados y debe evaluarla un anatomopatólogo
cualificado en el contexto de la historia clínica del paciente y de otras pruebas diagnósticas.
Resumen
y explicación
El virus de Epstein-Barr (EBV) es un virus de herpes humano que se encuentra normalmente como infección
asintomática ampliamente distribuida, dado que >95% de la población adulta mundial es portador durante toda su
vida. El genoma del virus es una molécula de ADN bicatenario de aproximadamente 172 kb que codifica como
mínimo 80 proteínas. Existen dos cepas de EBV, aunque la mayor parte del genoma parece ser idéntico (5, 6). Las
células y neoplasias infectadas por el EBV muestran por lo general uno de los tres patrones de expresión diferentes
propios de los genes víricos asociados con la latencia. En la latencia de tipo I, sólo se expresa el antígeno nuclear 1
del virus EBV (EBNA-1), junto con dos pequeños ARN nucleares poliadenilados (EBER 1 y 2) observados en el
linfoma de Burkitt. En la latencia de tipo II, se observa una expresión adicional de tres proteínas de membrana de la
fase latente, LMP-1, LMP-2A, y LMP-2B, relacionadas con la enfermedad de Hodgkin y el carcinoma nasofaríngeo.
La latencia de tipo III se observa en las enfermedades linfoproliferativas que aparecen en pacientes
inmunodeprimidos y en líneas celulares linfoblastoides transformadas con el virus EBV. En este grupo, se expresan
los seis EBNA (EBNA-1/2/3A/3B/3C/LP), las tres LMP y los dos EBER (6).
La proteína de membrana integral, LMP-1, está codificada por el gen BNRF1 y contiene 386 aminoácidos con una
masa molecular de 63 kDa. Se considera que esta proteína es oncógena, dado que está implicada en al menos
cuatro rutas de señalización de los factores de transcripción, e induce la expresión de varios marcadores de
superficie celular y moléculas de adhesión celular (4, 5). El EBV está asociado con ciertos tumores de origen linfoide
y epitelial, como el linfoma de Burkitt, el linfoma inmunoblástico, el linfoma de células T, la enfermedad de Hodgkin,
el carcinoma nasofaríngeo y el carcinoma gástrico (5, 6).
Consulte las Instrucciones generales para la tinción inmunohistoquímica de Dako o las instrucciones del sistema de
detección de los procedimientos de IHQ para: 1) Principio del procedimiento, 2) Material necesario pero no
suministrado, 3) Almacenamiento, 4) Preparación de la muestra, 5) Procedimiento de tinción, 6) Control de calidad,
7) Solución de problemas, 8) Interpretación de la tinción, 9) Limitaciones generales.
Reactivo
suministrado
Mezcla lista para usar de cuatro anticuerpos monoclonales de ratón suministrada en forma líquida como
sobrenadante de cultivo tisular, dializada contra 0,05 mol/L de Tris/HCl, pH 7,2, y con 0,015 mol/L de NaN3.
Clones: CS 1, CS 2, CS 3 y CS 4 Isotipo: IgG1, kappa.
Inmunógeno
Proteína de fusión recombinante que contiene secuencias de beta-galactosidasa bacteriana y de la mitad
carboxílica de la LMP codificada por el EBV (7).
Especificidad
En transferencias de Western de lisados de líneas celulares linfoblastoides transformadas con el EBV, el anticuerpo
marca una banda principal de 57–66 kDa dependiendo de la cepa vírica, acompañada en ocasiones por una banda
secundaria de 50–55 kDa que corresponden a las formas de longitud total y truncadas de la LMP. El anticuerpo
reconoce 20 cepas víricas de EBV geográficamente distintas (7). El anticuerpo muestra reacción cruzada con un
doblete de 43–44 kDa de proteínas de células normales no caracterizadas en extractos celulares, incluyendo las
procedentes de líneas celulares de control negativas para EBV (7).
El anticuerpo marca una línea celular linfoblastoide normal positiva para EBV creada mediante infección de células
de B en fase de reposo con el virus B95.8, mientras que la línea celular BL2, creada a partir de un paciente con
linfoma de Burkitt esporádico negativo para EBV, así como otras cepas clínicas no relacionadas, entre las que se
incluyen linfocitos amigdalinos B y T, hígado y timo fetal, fibroblastos fetales cultivados, líneas celulares leucémicas
humanas HSB2 y K562, y 7 líneas de células B negativas para EBV, no muestran marcado, excepto las proteínas
del doblete celular (7).
Precauciones
1. Para usuarios profesionales.
2. Este producto contiene azida sódica (NaN3), un compuesto químico altamente tóxico en su forma pura. Aunque a
las concentraciones presentes en el producto no está clasificado como peligroso, la azida de sodio puede
reaccionar con cañerías de plomo y cobre formando acumulaciones de azidas metálicas altamente explosivas.
Una vez desechado el producto, deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas
metálicas en las cañerías.
3. Al igual que con cualquier producto derivado de fuentes biológicas, deberán aplicarse procedimientos
adecuados de manejo.
(118001-002)
Dako Denmark A/S
IR753/ES/MNI/2009.12.04 p. 1/3
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4. Utilice el equipo de protección personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel.
5. La solución no utilizada debe desecharse con arreglo a las normativas locales, provinciales y nacionales.
Almacenamiento
Almacenar a 2–8 °C. No utilizar después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan
en condiciones diferentes a las especificadas, el usuario debe comprobarlas. No existen signos evidentes que
indiquen inestabilidad de este producto. Por lo tanto, los controles positivo y negativo deberán realizarse de manera
simultánea con las muestras del paciente. En caso de observarse una coloración inesperada que no pueda ser
explicada por las variaciones en los procedimientos del laboratorio y se sospeche un problema con el anticuerpo,
comuníquese con la Asistencia Técnica de Dako.
Preparación de las
muestras incluido
material necesario
pero no suministrado
El anticuerpo puede utilizarse para marcar cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina. Las muestras
de tejido deben cortarse en secciones de aproximadamente 4 µm.
Se requiere el tratamiento previo con recuperación del epítopo inducida por calor (HIER) usando Dako PT Link (nº
de catálogo PT100/PT101). Para más detalles, consulte la Guía del usuario de PT Link. Se obtienen resultados
óptimos al pretratar los tejidos con EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nº de catálogo
K8000/K8004).
Cortes incluidos en parafina: se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido fijados en formol e incluidos
en parafina siguiendo el procedimiento de preparación de la muestra 3 en 1 para Dako PT Link. Siga el
procedimiento previo al tratamiento explicado en el prospecto de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High
pH (50x) (nº de catálogo K8000/K8004). Nota: Después de la tinción, se deben deshidratar, enjuagar y montar los
cortes usando un medio de montaje permanente.
Cortes desparafinados: se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido desparafinados, fijados en formol
e incluidos en parafina usando Dako PT Link y siguiendo el mismo procedimiento descrito para los cortes incluidos
en parafina. Tras la tinción, los portaobjetos deben montarse utilizando un medio de montaje acuoso o permanente.
Los cortes de tejido no se deben secar durante el tratamiento ni durante el siguiente procedimiento de tinción
inmunohistoquímica. Para una mejor adherencia de los cortes de tejidos a los portaobjetos, se recomienda el uso de
FLEX IHC Microscope Slides (nº de catálogo K8020).
Procedimiento de
tinción incluido
material necesario
pero no suministrado
El sistema de visualización recomendado es EnVision FLEX, High pH (Link) (nº de catálogo K8000). Los pasos de
tinción y los tiempos de incubación han sido preprogramados en el software del Autostainer Link. El volumen de
reactivo recomendado es de 1 x 200 µL o 2 x 150 µL por portaobjetos. Consulte la Guía del usuario del Autostainer
Link para ver instrucciones detalladas sobre la carga de portaobjetos y reactivos. Si todavía no están disponibles los
protocolos en la plataforma del Autostainer utilizada, comuníquese con el servicio técnico de Dako. Todos los pasos
de incubación deben realizarse a temperatura ambiente.
Las condiciones óptimas pueden variar según la muestra y el método de preparación, y deberán determinarse
individualmente en cada laboratorio. Si el patólogo encargado de la evaluación desea otra intensidad de tinción, se
pueden ajustar los tiempos de incubación y la elección del sistema de visualización EnVision FLEX/EnVision
FLEX+. Se puede solicitar información a un especialista en aplicaciones de Dako o a un especialista del servicio
técnico para reprogramar el protocolo. Verifique que el rendimiento del protocolo ajustado siga siendo válido
confirmando que el patrón de tinción sea idéntico al descrito en “Características de resultados”.
Se recomienda la contratinción en hematoxilina usando EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nº de catálogo K8008).
Se recomienda un medio de montaje no acuoso permanente.
Los controles positivo y negativo deberán realizarse de manera simultánea empleando el mismo protocolo que para
las muestras del paciente. El tejido de control positivo debe incluir linfoma de Burkitt y Hodgkin positivo para EBV, y
las células/estructuras deben exhibir patrones de reacción como se describe para este tejido en “Características de
resultados” en todas las muestras positivas. El reactivo de control negativo recomendado es FLEX Negative Control,
Mouse (Link) (nº de catálogo IR750).
Interpretación de
la tinción
Las células marcadas por el anticuerpo muestran un patrón de tinción citoplasmática y de la membrana.
Características de
resultados
Tejidos normales: el anticuerpo no marca la mucosa nasofaríngea normal, ni tampoco se marcan los linfocitos
infiltrantes pequeños, el estroma desmoplásico ni el epitelio normal suprayacente en las muestras nasofaríngeas
primarias (4). El anticuerpo no muestra marcado en intestino grueso, apéndice y páncreas (8). Es posible observar
un marcado fuerte de los precursores mieloides y eritroides precoces normales, a pesar de la total ausencia de
evidencias de EBV por PCR (9).
Tejidos anormales: el anticuerpo marcó 22/46 casos de cortes incluidos en parafina de la enfermedad de Hodgkin,
siendo 1/12 de predominancia linfocitaria, 12/24 de esclerosis nodular, 6/7 de celularidad mixta y 3/3 del subtipo de
pérdida linfocitaria (2). En otro estudio en el que se incluyeron 47 linfomas de Hodgkin, el anticuerpo marcó un total
de 32/47, siendo 28/42 del tipo de esclerosis nodular y 4/5 del tipo de celularidad mixta (3). Entre 51 carcinomas
nasofaríngeos, el anticuerpo marcó 40/51, entre los que 8/10 fueron carcinomas de células escamosas
queratinizantes, 7/12 carcinomas de células escamosas no queratinizantes y 25/29 carcinomas no diferenciados (4).
Referencias
bibliográficas
1.
2.
3.
4.
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(118001-002)
Dako Denmark A/S
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Epstein-Barr virus-encoded latent membrane protein (LMP-1) in paraffin sections of EBV-associated
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IR753/ES/MNI/2009.12.04 p. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
6.
7.
8.
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Leong ASY, Cooper K, Leong FJWM, Manual of diagnostic antibodies for immunhistology. Oxford University
Press; 199 p. 162.
Ex plica ción de los s ímbolos
Refe ren cia
Li mitaci ón de te mpe ratur a
Fe ch a de c ad uci da d
Disp osi tivo mé di co p ara
d ia gn óstic o in vi tro
Co ntie ne sufici en te pa ra
<n > e nsa yos
Fa bri ca nte
Con sul te la s i ns tru cci on es
d e u so
Có di go d el l ote
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