Download Dr. Manuel Martinez Fernández.

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Biopsia líquida
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Presente
y
futuro
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Terapias dirigidas contra el cáncer
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 En las terapias dirigidas contra el cáncer se utilizan fármacos
que bloquean el crecimiento del cáncer al interferir en
moléculas específicas que participan en la progresión de la
enfermedad.
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 Las terapias dirigidas actúan en dianas moleculares
específicas de las células cancerosas, a diferencia de las
quimioterapias regulares, que actúan inespecíficamente en
todas las células que crecen.
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 Un paciente será candidato a terapia dirigida si se encuentra
una diana apropiada. Si se trata de un tumor sólido, esta
búsqueda implica una biopsia.
Los tumores adquieren
resistencia al tratamiento
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Los tumores adquieren
resistencia al tratamiento
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Mecanismos de resistencia al tratamiento
 Heterogeneidad inter e intratumoral:
 Evolución clonal
 Selección
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Burrel et al., Nature 2013
Limitaciones de la biopsia tradicional
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 El tejido tumoral obtenido en la biopsia solamente ofrece una
instantánea del momento de obtención de la muestra.
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 Los tumores tienden a ser muy heterogéneos, por lo que la
biopsia puede no ser representativa del conjunto del tumor.
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 En ocasiones, es difícil la obtención del tejido.
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 La aplicación de biopsias seriadas según avanza el tratamiento
a menudo resulta impráctica.
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Alternativa: biopsia líquida
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 La obtención de la muestra consiste en una sencilla extracción
sanguínea.
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 La biopsia líquida es representativa de todo el tejido tumoral.
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 Permite monitorizar la progresión de la enfermedad y
detectar la aparición de subclones resistentes al tratamiento.
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¿Cuándo se debe considerar una biopsia líquida?
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 No se obtuvo suficiente tejido de la biopsia inicial.
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 El tumor se originó en un lugar de difícil acceso.
 El tumor origina metástasis en cerebro, hueso, pulmón u otros
lugares difícil de obtener una biopsia.
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 El paciente no está respondiendo al tratamiento.
 El paciente se niega a una biopsia adicional (ha sufrido mucho
y no quiere seguir). La biopsia líquida es mucho más sencilla
de obtener.
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Monitorización del
progreso de la enfermedad
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Heitzer, Ulz and Geigl, 2015 Journal of Clinical Chemistry 61:112
Monitorización del
progreso de la enfermedad
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Heitzer, Ulz and Geigl, 2015 Journal of Clinical Chemistry 61:112
Origen del ADN en biopsia líquida
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 Exosomas
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 Células tumorales circulantes (CTCs)
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 ADN tumoral circulante (ctDNA)
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Muestras en biopsia líquida
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Exosomas
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 Los exosomas son vesículas (30 a 150 nm) liberadas
activamente por las células.
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 Contienen ARN, ADN y proteínas.
 Tienen una función de mensajeros intercelulares.
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 Su aplicación al campo de la biopsia líquida está en sus
primeros pasos.
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Exosomas
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“Extracellular vesicles: Exosomes, microvesicles, and friends” Raposo G and Stoorvogel W, J Cell Biol 2013
Células tumorales circulantes
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 Son células de un tumor, que han sido derramadas en la
circulación sanguínea o en el sistema linfático.
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 Pueden fijarse en un tejido y ser la semilla de un tumor
adicional en órganos distantes del de origen (metástasis).
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 Mientras viajan y en la metástasis, llevan información sobre
las mutaciones del tumor de origen.
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Origen de las células tumorales circulantes (CTCs)
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Paterlini-Brechot et al. Cancer Letters 2007. 253:180
Biopsia líquida en células
tumorales circulantes
para metástasis.
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Las metástasis se pueden
desarrollar muchos años después
de la resección del tumor
primario.
La biopsia de las metástasis es un
procedimiento invasivo y a veces
peligroso.
La caracterización molecular de las
CTCs revela información
representativa de las células de las
metástasis.
Alix-Panabières & Pantel, Clin. Chem. 2013
Instrumentación para Biopsia Líquida en células
tumorales circulantes (CTCs)
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Sistema CellSearch - Menarini
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Origen del ADN tumoral circulante (ctDNA)
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• ctDNA es ADN del tumor
que ha sido derramado en
la corriente sanguínea.
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Diaz and Bardelli, 2014 Journal of Clinical Oncology 32
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• ctDNA puede estar presente
en un 0.01% - >90% del
total del ADN libre
circulante (cfDNA).
• La cantidad de ctDNA está
relacionada con el tamaño
del tumor y varía entre
pacientes que presentan
diferentes síntomas clínicos.
Tipos de muestra en biopsia líquida
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Diferentes orígenes celulares del cfDNA
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Tumor primario:
Procesos:
Corriente sanguinea:
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Células malignas
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Células no malignas
Apoptosis, necrosis, liberación activa,
fagocitosis, separación celular.
ADN libre derivado del tumor (ctDNA)
Diferentes orígenes celulares del cfDNA
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Tumor primario:
Procesos:
Corriente sanguinea:
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Células malignas
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Células sanas
Células no malignas
Apoptosis, necrosis, liberación activa,
fagocitosis, separación celular.
ADN libre derivado del tumor (ctDNA)
ADN libre no tumoral
Diferentes orígenes celulares del cfDNA
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Tumor primario:
Procesos:
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Células malignas
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Células sanas
Células no malignas
Apoptosis, necrosis, liberación activa,
fagocitosis, separación celular.
Corriente sanguinea:
ADN libre derivado del tumor (ctDNA)
Orígenes del cfDNA:
ctDNA maligno
ctDNA no maligno
ADN libre no tumoral
cfDNA germinal
Instrumentación para Biopsia Líquida en
ADN tumoral circulante
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Uso clínico de la Biopsia Líquida
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 Como biomarcador diagnóstico: detección temprana y
monitorización enfermedad mínima residual.
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 Como biomarcador de pronóstico: identificación de riesgo alto
de recurrencia y correlación con carga tumoral.
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 Como biomarcador predictivo: monitorización de la dinámica
tumoral, identificación de determinantes genéticos para terapia
dirigida, evaluación de la respuesta al tratamiento y de la evolución de
resistencia en tiempo real.
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Flujo de pruebas sugerido
Tumor sólido
Biopsia accesible
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Definir terapia inicial
Biopsia no accesible
Monitorizar respuesta
al tratamiento
La dolencia progresa.
Nuevas opciones
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96001 Tejido NGS Onco 50
96013 Tejido NGS BRCAness
96009 Tejido NGS Her2
96004 Tejido NGS Fusiones
Varios Tejido rtPCR BRAF, EGFR, K/N-Ras, etc.
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96002 Sangre NGS Onco 50
96014 Sangre NGS BRCAness
96010 Sangre NGS Her2
96005 Sangre NGS Fusiones
Varios Sangre rtPCR BRAF, EGFR, K/N-Ras, etc.
Varios Sangre rtPCR BRAFV600E, EGFR29, KRAS, K/N-Ras, EGFR, etc.
96008, 96012 Sangre NGS ESR1, TP53
96002 Sangre NGS Onco 50
96005 Sangre NGS Fusiones
96014 Sangre NGS BRCAness
Limitaciones de la Biopsia Líquida
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 Al igual que en la biopsia tradicional, se necesitan más
biomarcadores para cubrir mejor los diferentes tumores.
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 Falta de consenso en la aproximación técnica.
 Falta de estandarización en cada uno de los pasos del
procedimiento.
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Reflexiones finales
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 La biopsia líquida es una nueva herramienta de gran valor.
 El diagnóstico morfológico y molecular a través de la
biopsia clásica presenta limitaciones.
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 Hoy en día, con la tecnología actual, la biopsia líquida
complementa a la biopsia clásica en el diagnóstico y
seguimiento de los tumores sólidos.
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