Download Técnicas reproductivas en las Enfermedades Hereditarias

3r curso de actualización en habilidades médicas y de enfermería
Dra. Noemí Galindo
IVI-Alicante
Noemi.Galindo@ivi.es
www.ivi.es
PÁG.1
TÉCNICAS REPRODUCTIVAS
EN LAS ENFERMEDADES
HEREDITARIAS
Alcoi, 8 de Marzo 2012
Introducción
Óvulo
Espermatozoide
23 cromX
46 XX
PÁG.2
23 cromX
46 XY
Incidencia
Anomalías cromosómicas:
0,4-0,6 %
Alteraciones génicas :
1-2 %
Herencia recesiva 25 %
Herencia dominante
PÁG.3
50 %
Opciones
Diagnóstico prenatal – aborto terapéutico
Donación de gametos
Donación de embriones
Adopción
DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTACIONAL
PÁG.4
DIAGNÓSTICO PREIMPLANTACIONAL
Procedimientos
1. Selección
Selección de pacientes
2. Estimulación-ICSI-cultivo
Estimulación-ICSI-cultivo
3. Biopsia y fijación
fijación
4. Análisis
Análisis Genético
Genético
5. Transferencia
PÁG.5
DGP: Selección de pacientes
Ley 14/2006, 26 de mayo,
sobre Técnicas de Reproducción Humana Asistida.
Artículo 12. Diagnóstico preimplantacional.
Los centros debidamente autorizados podrán practicar DPI para:
a) Detección de enfermedades hereditarias graves, de aparición precoz,
y no susceptibles de tratamiento curativo posnatal con arreglo a los
conocimientos científicos actuales
b) La detección de otras alteraciones que puedan comprometer la
viabilidad del preembrión.
Otra finalidad no comprendida o determinación de los Antígenos de
histocompatibilidad con fines terapéuticos para terceros requerirán
autorización expresa.
PÁG.6
DGP: Selección de pacientes
DIAGNÓSTICO GENÉTICO
PREIMPLANTACIONAL
Cariotipos anormales (PGD)
• Alteraciones estructurales:
- Traslocaciones robertsonianas
- Traslocaciones recíprocas
- Inversiones
• Alteraciones numéricas:
- varón: 47, XYY;
47, XXY
- mosaicismos:45,X/46,XX/47,XXX
Enfermedades monogénicas
PÁG.7
DGP: Selección de pacientes
ENFERMEDADES MONOGÉNICAS
Enfermedades Autosómicas Recesivas
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Atrofia Muscular Espinal
Fibrosis Quística
β-Talasemia
Defecto de la Glicosilación (CDG1A)
Sordera congénita neurosensorial no sindrómica
Poliquistosis renal (ARPKD)
Leucodistrofia metacromática
Deficit 21-Hidroxilasa
Enfermedad Gaucher
Tirosinemia tipo 1
Linfohistiocitosis familiar
Acidemia propiónica A
Acidemia propiónica B
Mucopolisacaridosis IIIA (SanFilippo A)
Displasia hidrótica ectodérmica, Síndrome de Clouston
Déficit L-CHAD
Osteopetrosis,
Inmunodeficiencia combinada severa, alinfocítica
Enfermedades Autosómicas Dominantes
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Distrofia Miotónica, Steinert
Huntington
Poliquistosis Renal, AD. Ligada a PKD1
Neurofibromatosis tipo 1
Charcot-Marie-Tooth 1A
Ataxia Espinocerebelar, SCA1, SCA3
Esclerosis tuberosa tipo 1
Exostosis múltiple hereditaria
Neoplasia Múltiple Endocrina 2A
Cáncer colon hereditario, no polipósico (S. Lynch)
Poliposis adenomatosa familiar
Esclerosis tuberosa tipo 2
Síndrome Von Hippel Lindau
Paraparesia espástica familiar
Poliquistosis Renal, AD. Ligada a PKD2
Retinosis Pigmentaria
Enfermedades con herencia ligada al cromosoma X
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•Síndrome de X frágil
•Hemofilia A
•Distrofia Muscular Duchenne/Becker
•S. Alport
•Incontinencia Pigmenti
•Déficit Ornitin Transcarbamilasa
•Enfermedad de Norrie
•Mucopolisacaridosis II
•Mucopolisacaridosis IIIA
DGP: Selección de pacientes
Selección de embriones
euploides:
-Mejorar la implantación
-Disminuir la tasa de aborto
-Reducir el riesgo de
cromosomopatías
SCREENING GENÉTICO
PREIMPLANTACIONAL
de Aneuploidías (PGS)
Parejas mal pronóstico
reproductivo
• Edad materna avanzada (≥
≥ 41 a)
• Fallo de implantación
• Abortos recurrentes
• FISH espermatozoides anormal
PÁG.9
DGP: Selección de pacientes
¿QUÉ CROMOSOMAS analizamos?????
Monosomía X
Trisomía autosómicas
Trisomía 13
Trisomía 15
Trisomía 16
Trisomía 18
Trisomía 21
Trisomía 22
Trisomías sexuales
Poliploidía
Anomalías estructurales
8,6
26,1
1,1
1,7
7,5
1,1
2,3
2,7
0,3
9,8
2,0
13,15,16,17,18, 21,22,X,Y
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Datos de Hassold et al, 1996 (n=4088)
SGP: Selección de pacientes
Estudio randomizado IVI: EDAD MATERNA AVANZADA
Criterios de inclusió
inclusión: aná
análisis retrospectivo para seleccionar rango edad
DGP: Selección de pacientes
O
N
G
O
I
N
G
41- 44 años
Edad
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SGP: Selección de pacientes
Fallo repetido de implantación
≥ 3 fallos FIV/ICSI, <40 años, ≥6 MII
Estudio previo de infertilidad:
• Ecografia vaginal (histeroscopia si es
necesario)
• Cariotipos de la pareja
• Estudio de trombofilias: anticuerpos
anticardiolipina y lupus anticoagulante;
Antitrombina III; APCR (si positiva, mutación
del factor V de Leiden); niveles de proteina C y
S; Homocisteina sérica y screening de
mutaciones MTHFR y factor II.
PÁG.12
SGP: Selección de pacientes
ABORTO DE REPETICIÓN
Aborto de repetición: estudio retrospectivo
Improved results in RM patients:
- < 5 abortos previos
- Gestación previa anormal
- Aumento de anomalías
cromosómicas masculinas
Gestación/transfer
Tasa de implantación
Tasa de aborto
Resultados en AR < 38 años:
- 57% embriones anormales
- 53,1% gestación evolutiva/transfer
- 13,0% aborto
2 abortos
3 abortos
n=105
n=76
PÁG.13
4 abortos
n=56
> 5 abortos
n=16
- 44,1 gestación evolutiva/ciclo
SGP: Selección de pacientes
PARÁMETROS
PAR METROS SEMINALES ALTERADOS
Oligozoospermia severa
< 5 mill espermatozoides/ml
Teratozoospermia severa
disomía
disomía para
para cromosomas
cromosomas sexuales
sexuales
disomía
disomía 21
21
diploidía
diploidía yy poliploidía
poliploidía
(Moosani, 1995; In’t Veld, 1997; Rubio, 2001; Bernardini, 1998; Pang, 1999; Pfeffer, 1999; Bernardini, 2000;
Vegetti, 2000; Ushijima, 2000; Nishikawa, 2000; Calogero, 2001; Devillard, 2002 ; Martin, 2003; Mateu, 2006)
PÁG.14
SGP: Selección de pacientes
FACTOR MASCULINO
•Azoospermia no obstructiva
•Teratozoospermia severa
•Oligozoospermia severa (<5 mill/ML)
% FISH anormal
60
50
40
30
20
10
0
≤4
PÁG.15
>4-<10
≤10-<20
≥20
Rodrigo et al., 2009
Diagnóstico preimplantatorio
Conlleva un tratamiento de
Fecundación “in vitro”,
en el que se obtienen varios
embriones para su análisis.
Ventaja:
se trata de parejas infértiles
PÁG.16
Cronología
Consejo genético
2.- Estimulación ovárica-ICSI-cultivo
3.- Micromanipulación embrionaria
4.- Análisis genético
5.- Transferencia embrionaria
PÁG.17
Estimulación ovárica
Protocolos con análogos de la GnRH
PÁG.18
Punción folicular transvaginal
Obtención de ovocitos: punción
Quirófano
Laboratorio de FIV
PÁG.19
+/- vitrificación de ovocitos
D5: Transferencia embriones sanos
D3: Diagnóstico genético
Tasa fecundación
ICSI
Ovocitos MII
Ovocitos punción
Estimulación ovárica
PÁG.20
Inyección intracitoplasmática de espermatozoides
PÁG.21
Es la fecundación del ovocito mediante la
introducción de un espermatozoide con la
ayuda de una micropipeta”
DGP: implicación clínica
NO
Desarrollo embrionario
selecciona anomalías cromosómicas
Magli MC et al (2000), Sandalinas M et al (2001), Ziebe S et al (2003),
Munné S (2004), Rubio C (2007)
PÁG.22
FISH de espermatozoides
Información genética
Información genética de la célula embrionaria
Polar Body
biopsy
DayDay-0
PÁG.23
DayDay-1
Cleavage stage
biopsy
DayDay-3
Blastocyst
biopsy
DayDay-5
DGP: biopsia de blastómera y fijación
Rotura de la zona pelúcida
Aspiración de las blastómeras
PÁG.24
Fijación de las blastómeras
jcmr2
DGP: análisis genético
PCR: reacción en cadena de la polimerasa
FISH: hibridación “in situ” fluorescente:
9 cromosomas.
PÁG.25
Diapositiva 25
jcmr2
Independientemente de las muestras con las que estemos trabajando, ¿qué nivel de análisis abarcamos?
Julio Martín ; 05/05/2002
DGP: análisis genético: PCR
PCR: Mutaciones génicas
Fibrosis quística
DistrofiaTest
muscular
de Duchenne
informatividad
previo:
mutaciones
Síndrome •de
Marfan
•marcadores
Distrofia miot
ónica genéticos
Retinitis pigmentosa
Síndrome del X-frágil
Corea de Huntington
ß - Talasemia
...
PÁG.26
DGP: análisis genético: PCR
Lisis celular de membrana plasmática y nuclear liberación ADN
amplificación por PCR y detección por fluorescencia
Primers
secuencia de ADN
a amplificar
PCR FLUORESCENTE
+
TERMOCICLADOR
94ºC- 1’
40-60º C
(72ºC-1’)
ELECTROFORESIS
Síntesis de ADN
Elongación de cadenas
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Descondensación y adhesión de primers
DGP: análisis genético: FISH
FISH: hibridación “in situ” por fluorescencia
Alteraciones cromosómicas
-Estructurales: translocaciones
- Sondas específicas
-Numéricas.
- 9 cromosomas
PÁG.28
Síndrome de Down, Klinefelter XXY
síndrome XYY, síndrome de
Turner (XO), edad avanzada,
aborto de repetición
DGP: análisis genético: FISH
Sondas marcadas con fluorescencia
con afinidad por los cromosomas que queramos estudiar
¿Qué CROMOSOMAS?
13,15,16,17,18,
21,22,X,Y
Jobanputra et al, 2002: el FISH para los cromosomas 13, 15, 16,
18, 21, 22, X, Y permitiría detectar el 83% de anomalías
citogenéticas en abortos
PÁG.29
DGP: análisis genético: FISH
FISH. Hibridación “in situ” con
fluorescencia
sonda ADN
secuencia cromosómica
Renaturalización
Descondensación
Desnaturalización
PÁG.30
DGP: análisis genético: FISH
XY
PÁG.31
XXY
XXXX
DGP: análisis genético: Arrays
Normal (XY)
Arrays de CGH
(Hibridación Genómica Comparada)
Anomalías numéricas de todos los cromosomas
24 cromosomas
¡¡Aumento nivel de detección!!
15 % en >40 años
>20-25% en AR y FI
En ≤40 años, si existe factor masculino severo adicional a FI o AR:
44,4% embriones NO detectables con FISH
Aumento tasa de embarazo e implantación
PÁG.32
DGP: análisis genético: Arrays
CGH arrays
Amplificación genómica
Muestra
ADN control
completa
Marcaje
Cy3
Cy5
Purificación y combinación
Hibridación sobre el array
Lectura e interpretación
Cy3 + Cy5
Hibridación sobre
plataformas con
secuencias de ADN
específicas de
regiones concretas de
cr. humanos
24 cromosomas
de resultados: software
PÁG.33
BlueGnome Ltd., Cambridge, UK
DGP: análisis genético: Arrays
Normal (XY)
Aneuploide: -19, -21 (XY)
PÁG.34
DGP: análisis genético: Arrays
Embrión caótico
PÁG.35
FIV/ICSI: Transferencia embrionaria
• Selección embriones:
¿1 ó 2? SET
– Genética
– Viabilidad
• Vitrificación sobrantes
PÁG.36
ASPECTOS MÉDICOS DE LA ESTERILIDAD FEMENINA
Gracias por su atención
Centro IVI
Dirección – Código Postal población
Tel. 000 11 22 33 – Fax. 000 11 22 33
ivicentro@ivi.es
PÁG.37