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UNIVERSIDAD DE MAGALLANES FACULTAD DE CIENCIAS (ESC. CS. Y TEC. EN REC AGRIC Y ACUIC). “ALMACENAMIENTO Y ALGUNOS PROTOCOLOS DE RUTINA PARA LA MANTENCIÓN DE SEMILLAS” Trabajo presentado para optar al titulo de: Ingeniero Agropecuario, Licenciado en Ciencias Agropecuarias Profesor guía: JulioYagello Diaz Autor:: Ana Maria Caicheo Barrientos PUNTA ARENAS – CHILE 2008 INDICE DE MATERIA Página 1. RESUMEN 4 2. SUMMARY 5 3. INTRODUCCIÓN 6 4. ANTECEDENTES BIBLIOGRAFICOS 7 4.1 Almacenamiento 9 4.2 Tipo de almacenamiento 13 4.3 Evaluación de semillas 16 4.4 Ensayo de viabilidad de semillas 17 4.5 Determinación de humedad 19 5. CONCLUSIONES 21 6. BIBLIOGRAFIA 22 2 INDICE DE FIGURAS Página FIGURA 1. Instituciones chilenas que conservan los recursos filogenéticos ex situ. 8 FIGURA 2. Dibujo de grafica típica que muestra como varía la capacidad germinativa de un lote de semilla durante el almacenaje. 10 FIGURA 3. Cámara frigorífica del Centro de Semillas y Árboles Forestales, utilizada para el almacenamiento de semillas. 14 FIGURA 4. Almacenamiento de semillas de arbustos nativos encontradas de la región de Magallanes 15 FIGURA 5. Evaluación de viabilidad 18 1.-RESUMEN Existen Institutos de investigación y otros centros que han desarrollado bancos o colecciones de semillas de plantas silvestres y cultivadas. En nuestra región a pesar de tener numerosas especies de flora nativa con interés de producción ornamental, existe muy poca información sobre su recolección óptima, evaluaciones de semillas viables y técnicas de almacenamiento. La mayoría de las semillas pueden ser almacenadas en condiciones de baja temperatura y humedad relativa durante periodos prolongados, para luego poder germinarlas y producir nuevas plantas. Para un óptimo muestreo de recolección de semillas es recomendable más de cinco poblaciones para representatividad de las especies y tener determinando claramente la época de producción y dispersión de semillas. También para tener semillas viables hay que considerar y evaluar la calidad física y fisiológica de la semilla cuando se realza recolección para evitar semillas vana que causen problemas para su posterior germinación. 4 2.-SUMMARY There are research institutes and centers that have developed other banks or collections of seeds of wild and cultivated plants. In the region of Magallanes despite having numerous species of native flora with interest cut production, there is very little information about their optimal harvest, evaluations of viable seeds and storage techniques. Most of the seeds can be stored in conditions of low temperature and relative humidity for long periods, then sprout and produce new plants. For optimum sampling of seed collection is recommended for more than five representation populations of the species and have clearly identifying the time of production and seed dispersal. We also have to be considered viable seeds and evaluate the physical and physiological quality of the seed collection is enhanced when seeds vain to avoid causing problems for subsequent germination. 5 3.-INTRODUCCIÓN Existen varias razones para conservar los recursos filogenéticos de un país, básicamente se atribuyen a un valor económico, que también a su vez, tiene un valor social y cultural. En el caso de Chile existen alrededor de 6.200 especies de plantas (Marticorena, 1990), 80 por ciento son nativas y de ellas, el 50 por ciento son endémicas, es decir, su origen esta en territorio chileno y constituye el patrimonio filogenético más importante del país, en sentido estos recursos son la base para la obtención de nuevos cultivos, variedades y productos que le dan al país la posibilidad de contar con nuevas alternativas productivas y poder llegar a nuevos mercados. La región de Magallanes y Antártica Chilena alberga numerosas especies de flora autóctona y nativa de carácter ornamental que a la fecha han sido escasamente estudiadas en cuanto a sus características de obtención de material genético y técnicas de propagación. Por esta razón, se hace necesario considerar la metodología de los almacenamiento de los banco de semillas o de germoplasma para fines de investigación para su posterior propagación para fines productivos en el sector nacional y internacional. El objetivo de este seminario es mencionar algunos criterios de almacenamiento que se debe considerar y protocolos de rutinas a seguir para futuros estudios de producción de especies, a partir de banco de semillas a largo plazo. 6 4.-ANTECEDENTES BIBLIOGRAFICOS La importancia de los bancos de semillas o germoplasma de los jardines botánicos e institutos de investigación han desarrollado bancos de semillas, son colecciones de semillas de plantas silvestres y cultivadas. Los bancos de semillas se han enfocado generalmente sobre las 100 especies de plantas que constituyen más del 90% del alimento de consumo humano. Actualmente se esta incorporando un mayor rango de especies en las colecciones, incluyendo especies que pueden estar amenazadas de extinción o con pérdida de variabilidad genética (Primack et. al, 2001). Las semillas de la mayoría de las especies vegetales pueden ser almacenadas en condiciones de baja temperatura y humedad relativa en los bancos de semillas durante periodos prolongados, para luego germinarlas y producir nuevas plantas (Given, 1995). El metabolismo de las semillas disminuye con las bajas temperaturas y las reservas de alimento para el embrión se mantienen durante más tiempo. Esta propiedad es muy valiosa para la conservación ex situ de semillas nativas y un gran numero de especies pueden ser almacenadas en un espacio reducido, con supervisión mínima y a bajo costo (Hamilton, 1994). En Chile existe alrededor de veinte instituciones `publicas y privadas que hacen esfuerzos individuales para conservar los recursos que son de su interés (Salazar 2005). Se señalan instituciones publicas como el INIA, que cuenta desde el año1989, con una rede de germoplasma a lo largo del país ubicado en Vicuña, IV Región y tres bancos activos ubicado en Santiago, Chillán y Temuco, en centros regionales de investigación de Intihuasi La platina, Quilamapu y Carillanca (Figura 1). (Salazar, 2005) Hay que considerar que en durante periodos largos de almacenamiento, se justifica cuando la semilla tiene un valor particular en cantidades pequeñas, esto debido al costo. 7 Institución Nº Géneros Nº Especies Nº Entradas 13 79 38 Si Especies Conservadas ex situ Universidad Arturo Prat 11 Universidad de Antofagasta 36 Universidad Adventista de Chile 1 1 Cereales, Forrajeras, Frutales y vides, Especies silvestres Forrajeras, Frutales y vides, Frutales menores Ornamental, Especies silvestres Ornamentales 26 5 Cereales, frutales y vides, frutales menores, oleaginosas Universidad de Tarapacá 4 Universidad de Talca 6 Universidad Católica del Maule 1 1 20 Instituto Forestal 2 5 550 Forestales Universidad de Magallanes 21 26 43 Forestales, Ornamentales, especies silvestres Pontificia Universidad Católica de Valparaíso 3 10 282 Pontificia Universidad Católica de Chile 7 7 1.277 28 13 4.044 Instituto de Investigaciones Agropecuarias 185 132 41.105 Universidad De Concepción 32 33 147 Fundación Chile 2 3 198 Forestal Mininco 3 5 13 48 75 4834 Universidad de Chile 40 99 566 Universidad de La Serena 1 11 Si Corporación Nacional Forestal 36 57 183 Semillas Baer 1 1 85 Compañía Agrícola y Forestal El Álamo Ltda. 1 si 180 Universidad Austral de Chile Especies silvestres Especies silvestres Especies silvestres Ornamentales y especies silvestres Cereales, forrajeras, frutales y vides, frutales menores, hortalizas, leguminosas, medicinales, oleaginosas, especies silvestres Frutales y vides , frutales menores, medicinales, oleaginosas Aromáticas Especies Forestales Forestales, frutales y vides, frutales menores, hortalizas, medicinales, tubérculos y raíces, especies silvestres Aromáticas, Forestales, Forrajeras, frutales y vides frutales menores, leguminosas, medicinales, especies silvestres. Especies silvestres Forestales, ornamentales Pseudocereales Forestales FIGURA 1. Instituciones chilenas que conservan los recursos filogenéticos ex situ. Fuente:Salazar, 2005. Unidad de Recursos Genéticos INIA La Platina (com. Pers) 8 4.1- Almacenamiento de semillas Según Berry (1962), la semilla madura consta fundamentalmente de: embrión o germen, endospermo o reserva alimenticia, y un número de envolturas protectoras (salvado o testa) para el almacenamiento. Algunos autores consideran que la vida de la semilla almacenada depende de tres factores (Thomson, 1979 y Berry, 1962): • El tipo de semilla • Su historial previo al almacenaje (incluyendo recolección y secado) • Las condiciones reales del almacenajes Según Cerovich y Miranda (2004) los factores físicos más importantes a considerar durante el almacenamiento son: la humedad de equilibrio de la semilla, la humedad relativa y la temperatura de almacenamiento que la rodean, ya que estos dos son los que inciden principalmente sobre su contenido de humedad. Humedad de equilibrio y humedad relativa del aire: Conocer cuáles son los mecanismos de transferencia entre las semillas y el aire que las rodea es de vital importancia, pues ayuda a tomar decisiones sobre las operaciones de almacenamiento. Las semillas son higroscópicas y absorben o liberan humedad, dependiendo del ambiente donde se les coloque y su contenido de humedad final se estabiliza cuando estas se exponen a un ambiente específico por un período de tiempo determinado, lo cual se conoce como "humedad de equilibrio". Esta depende del tipo de semillas, de la temperatura y la humedad relativa (HR) del aire circundante. Si el contenido de humedad de la semilla es alto, mayor que el de la humedad de equilibrio para un ambiente dado, la semilla liberará humedad al ambiente; si por el contrario es menor, entonces absorberá humedad del aire. Está demostrado que cuando la HR del aire supera 75%, el contenido de humedad de las semillas se incrementa rápidamente; en cambio en climas secos donde la HR no sobrepasa ese limite, sus cambios afectan poco el contenido de humedad de las semillas (Cerovich y Miranda, 2004). Temperatura El contenido de humedad de la semilla también se incrementa cuando aumenta la temperatura siempre y cuando la HR permanezca estable. Pero cuando la temperatura del aire se calienta, las semillas disminuirán su humedad de equilibrio; por ejemplo, semillas de arroz en una HR de 70% y una temperatura de 15 ºC, tendrán una humedad de equilibrio de 13,8%, pero si se aumenta la temperatura a 25 ºC a la misma HR, la capacidad de retención de agua de ese ambiente también aumenta y la humedad de equilibrio de la semilla en ese ambiente disminuye a 13,3%. No obstante, hay que señalar que la temperatura y la HR actúan en forma independiente, por lo tanto si una aumenta hay que disminuir la otra. El fin del almacenamiento es mantener la capacidad germinativa de la semilla, y esto generalmente requiere una condición más estricta que la conservación nutricional e industrial. Después de la recolección la semilla mantiene su capacidad germinativa, o 9 muy próxima al menos, durante un período de semanas, meses o inclusos años; hasta que degenera suave o a veces rápidamente. (Thomson, 1979). También se puede definir el almacenamiento como la conservación de semillas viables desde el momento de la recolección hasta que se necesitan para la siembra (Colmes y Buszewicz 1958). Por ejemplo se almaceno un lote de semillas en malas condiciones; su capacidad germinativa persistió en un 93% durante 12 semanas, bajando a cero en 18 semanas siguientes. En la práctica, la vida del almacenaje termina cuando la capacidad germinativa empieza a descender (Robert, 1979) FIGURA 2. Dibujo de grafica típica que muestra como varía la capacidad de germinativa de un lote de semilla durante el almacenaje. El objetivo principal del almacenamiento de semillas es mantener una cantidad de semillas viables desde que son recolectadas hasta el momento en que serán requeridas para la siembra (Willan, 1991). Semillas viables quiere decir que están vivas y son capaces de germinar al sacarse del almacenamiento (Sandoval, 2004) Un lote de semillas que ha madurado en buenas condiciones, que ha sido buen cosechado, sea secado adecuadamente, tiene, cuando se almacena, un alto valor para sembrarlo en el campo, es decir la semilla son capaces de producir fuertes plántulas capaces de establecerse por ellas misma en condiciones de campo desfavorables. Durante el almacenaje se pierde parte de este valor, lenta o rápidamente dependiendo de las condiciones del almacenamiento. La capacidad germinativa se define como el porcentaje de semillas capaces de germinar y producir plántulas lo suficientemente robusta para establecerse en buenas condiciones de campo. 10 La duración del almacenamiento puede ser variable, dependerá de muchos factores, aunque principalmente se deberá a las características propias de la semilla y de las condiciones ambientales. De acuerdo a la duración de las semillas pueden ser clasificadas en semillas de vida corta, de vida media y de vida larga (Hartmann y Kester, 1988). Semillas de vida corta pierden su viabilidad si no germinan inmediatamente después de ser dispersadas, aunque puede aumentarse su longevidad si se almacena de manera apropiada. Semillas de vida media pueden permanecer viables entre 2 y 15 años si el almacenamiento es el adecuado. Semillas de vida larga poseen en general cubiertas duras e impermeables al agua, esto aísla la semilla del ambiente conservándolas vivas, si la cubierta no recibe daño, es posible que puedan durar 100 años o más. Como el almacenamiento considera la semilla desde la recolección hasta la siembra, la calidad final de la semilla se puede ver influenciada por la colecta y el procesamiento de éstas. Una semilla inmadura es pobre en germinación, sensible a daños producidos durante el procesamiento y a cambios de temperatura (Patiño et al., 1983). En las últimas etapas de maduración de las semillas es en donde se engruesan y endurecen las cubiertas de la semilla que proporcionarán protección mecánica al embrión (Hartmann y Kester, 1988). Semillas maduras poseen adecuadas cantidades de sustancias de reserva que alimentarán al embrión durante su germinación. Las condiciones de almacenamiento que mantienen la viabilidad de las semillas son aquellas que reducen la respiración y otros procesos metabólicos sin dañar el embrión (Hartmann y Kester, 1988). La viabilidad de las semillas se ve afectada principalmente por el contenido de humedad de la semilla, la temperatura y la atmósfera de almacenamiento El contenido de humedad de la semilla determinará la duración del almacenamiento, en general, las semillas de vida corta son sensibles a la desecación (Recalcitrantes). Son semillas que poseen una humedad elevada y pierden su viabilidad cuando ésta es reducida (Hartmann y Kester, 1988). Éstas pueden ser almacenadas en húmedo, por no más de un año. Otras semillas pueden ser incluso más sensibles a la pérdida de humedad, por lo que toleran ser almacenadas más allá de unos días, ejemplo de ello son aquellas especies de frutos carnosos pertenecientes a la familia Myrtaceae (arrayanes, lumas, myrceugenias, murtillas, etc.).(Sandoval, 2004). La mayoría de las semillas de vida media y larga son tolerantes a la desecación (ortodoxas), y deben secarse hasta un 4 a 6 % para almacenarse por períodos prolongados (Hartmann y Kester, 1988). Es posible admitir un aumento en el contenido de humedad, pero sólo si va acompañado de una reducción en la temperatura. 11 Según Roberts (1973) existen dos tipos de semillas que toleran parcialmente o no toleran la desecación, o sea son recalcitrantes y las semillas ortodoxas mantiene la viabilidad durante decenios tiene la cubierta seminal dura, menos perdida de humedad y pueden almacenarse perfectamente a temperaturas bajas o inferiores a 0ºC durante largos periodos. Las semillas de algunos arbustos nativos (A. desideratum, B. buxifolia, B. ilicifolia, B. patagonica, Ch. diffusum y J. tridens) son ortodoxas (Yagello et. al 2005) Las bajas temperaturas prolongan la vida de las semillas, debido a que se reduce su metabolismo y se inhibe el desarrollo de insectos, hongos, bacterias u otros agentes que las dañen. Las temperaturas de almacenamiento se encuentran, en general, entre 0 y 10ºC. Sólo si el contenido de humedad es muy reducido, la temperatura puede bajar de cero grado, sino no es posible ya que el agua libre contenida en la semilla se puede congelar rompiendo los tejidos. 12 4.2 Tipos de Almacenamientos De acuerdo a los factores controlados dentro del almacenamiento, se pueden distinguir distintos tipos (Hartmann y Kester, 1988): • almacenamiento abierto (sin control de humedad ni temperatura): es posible de aplicar en climas secos o en semillas de cubierta dura, siempre que las semillas hayan sido secadas, aunque este tipo de almacenamiento puede no ser el más adecuado. • almacenamiento cálido con control de humedad: supera a la técnica anterior ya que semillas que han sido secadas pueden almacenarse en bolsas selladas que aseguren minimizar las fluctuaciones de humedad. • almacenamiento en frío: este tipo es mucho más recomendable que el anterior ya sea controlando o no la humedad. Aunque el procedimiento más satisfactorio es bajar el contenido de humedad de las semillas y almacenarlas en recipientes sellados y a temperaturas bajas, de esta forma se puede mantener la longevidad al máximo. • almacenamiento frío-húmedo: consiste en colocar las semillas en recipientes que mantengan la humedad o mezclarlas con algún material que retenga la humedad (por ejemplo: arena húmeda). Semillas recalcitrantes podrán ser almacenadas de esta manera, pero sólo por poco tiempo y con presencia de oxígeno, ya que las semillas continúan respirando. Existen varios métodos de almacenamiento distintos. Los principales factores que hay que tener en cuenta a la hora de elegir uno de ellos son las características de la especie, el periodo durante el que se va almacenar y el costo (FAO, 1991). Los recipientes utilizados para almacenar semillas pueden ser de diversos tipos (Willan, 1991). Las semillas pueden almacenarse en montones, sacos o recipientes abiertos, cubierto de la lluvia, bien ventilados y protegidos de los roedores (Colmes y Buszewicz 1958, Magín 1962, Stein et. al 1974). Según William (1991) existen materiales completamente permeables, como son los sacos de arpillera, bolsas de algodón o de papel pueden ser utilizados sólo si se trata de cortos períodos, ya que las semillas son susceptibles a ataques de roedores o insectos y al intercambio de vapor de agua y otros gases. El almacenamiento de semillas recalcitrantes exige la utilización de este tipo de envases, debido a que es necesario mantener un adecuado intercambio gaseoso para evitar el calentamiento de las semillas, en este caso la respiración de las semillas no puede reducirse tanto como en las ortodoxas, por lo que se requiere de la existencia de oxígeno para mantener su 13 viabilidad. Sandoval (2004) recomiendan para el almacenamiento de semillas ortodoxas, entre estos se encuentran latas o tambores de estaño o aluminio, cubetas de plástico, frascos de vidrio y bolsas de polietileno; aunque estas últimas no son completamente impermeables, por lo que se sugiere combinarlas con otros, por ejemplo bolsas con tarros. Cuando es necesario abrir los recipientes periódicamente, se aconseja incluir alguna sustancia deshidratante, como el gel de sílice, que impida el aumento del contenido de humedad de las semillas debido a fluctuaciones de la humedad ambiental producida al abrir constantemente los envases. En investigaciones a arbustos nativos para la región de Magallanes se almacenaron semillas de cuatro temporadas en frascos de vidrios de 500 ml con una tapa de aluminio con orificios, sellado con plástico, en un ambiente refrigerado a 10 ± 2ºC de temperatura (Yagello, 2005). La elección del tipo de almacenamiento y del tipo de recipiente utilizado depende en gran parte de los recursos que se disponga. El Centro de Semillas y Árboles Forestales cuenta con una cámara frigorífica para el almacenamiento de sus semilla, a una temperatura de 5ºC. Se utilizan recipientes metálicos herméticos que contienen bolsas de polietileno selladas con las semillas (Figura Nº3).De esta manera se pretende conservar al máximo la calidad de las semillas hasta el momento de ser requeridas para su siembra. FIGURA 3. Vista parcial del interior de la cámara frigorífica del Centro de Semillas y Árboles Forestales, utilizada para el almacenamiento de semillas, dentro de recipientes metálicos, tapados, para aislarlas de la humedad ambiente. Según Thomson (1979) se debe evitar en lo posible el almacenaje tratado durante largos periodos. 14 Sistema Tradicional: Los métodos de almacenaje utilizado están adaptados al clima local. En las regiones templadas las semillas en grandes cantidades se almacenan en sacos de tela pero siempre bajo cubierto. Sistema de Edifico: Para grandes cantidades de semillas son necesarios grandes almacenes. Dentro del edifico la semilla se puede introducir en depósitos, cajas o bolsas, o depósitos cilíndricos tradicionales no necesitan estar en el interior. Si se manejan distintas especie o cultivares deben guardarse por separado. El edificio debe estar situado en lugar no propenso a la inundación y alejado, a menos 100 metros de otro almacén, que pueda contener material contaminado (fertilizante, productos químicos o semillas infectados). Básicamente el edificio tiene que estar bien construido, con protección adecuada contra roedores y pájaros. Los suelos deben estar por encima del nivel del suelo, y las paredes deben tener unas paredes internas lisas con ningún borde, en el que las semillas puedan descansar. Son necesario ventiladores para la aireación. Son de gran ayuda para la construcción los materiales aislantes, sin ventanas y las puertas de ventilación y de entrada tienen que ser aprueba de insectos, la puerta principal tiene que cerrarse muy bien y mantenerse cerrada. FIGURA 4. Almacenamiento de semillas de arbustos nativos encontradas de la región de Magallanes (Proyecto FIA-PI-C-2002-1-A-070) Fluctuaciones de la humedad de las semillas reducen su longevidad (Hartmann y Kester, 1988), ya que se aumenta la tasa respiratoria. Esto provoca que las reservas de las semillas destinadas a alimentar al embrión durante la germinación sean consumidas mediante respiración al aumentar el metabolismo, lo que va reduciendo la calidad de las semillas. 15 4.3 Evaluación de viabilidad de semillas Hay que escoger con cuidado el momento de recolectar semillas con el fin de asegurar que estas sean capaces de germinar, puedan tolerar el secado y alcanzar la máxima longevidad. (Gold et. al 2004). Es un factor muy importante la etapa de dispersión que hay que tener en cuenta, Recoger semillas en un año bueno ofrece una serie de ventajas, el costo de recolección es inferior debido a la concentración de la cosecha, y por lo general las semillas tendrán una capacidad germinativa superior y conservara su viabilidad durante más tiempo que las que fueron recogidas en un año de fructificación escasa (Turnbull 1975, Seal et.al 1965). Tener documentada la periodicidad de especies que se desea recolectar (Seal et al 1965). Cuando se trata de especies de las que se sabe que florecen y fructifican con periodicidad, es muy aconsejable visitar con bastante tiempo de anticipación de la época de fructificación o dispersión de semillas. Entre los factores químicos, el oxigeno y bióxido de carbono influyen fuertemente sobre los granos y semillas almacenados, lo que está relacionado con el volumen y la porosidad de las semillas almacenadas y los procesos de respiración. Como fue señalado, las semillas son organismos conformados por células vivas que respiran para producir la energía necesaria para los diversos procesos metabólicos. Hay que considerar los factores bióticos como insectos y microorganismos, pueden causar serios problemas cuando se encuentran asociados a la masa de semillas, llegando inclusive a ocasionar serios problemas al valor agrícola y comercial de estas. La presencia de hongos, bacterias e insectos y sus ciclos reproductivos están muy vinculados con la HR y la temperatura del almacén. En países tropicales, donde las condiciones ambientales de temperatura y HR son siempre altas y continuas, se favorece la presencia de plagas y microorganismos. Por lo tanto, para un buen almacenamiento es imprescindible mantener bajo el contenido de humedad de los granos y semillas. Además de los factores previamente señalados, también se debe considerar otros que de alguna manera inciden sobre el almacenamiento de semillas, como son: Características genéticas de la especie a ser almacenada: bajo iguales condiciones de almacenamiento, la longevidad de las semillas varía entre especies, entre cultivares de una misma especie, entre lotes y hasta entre individuos de un mismo lote. Entre los cereales, la avena y la cebada tienen alto potencial de almacenamiento; el maíz y el trigo tienen longevidad intermedia, mientras el centeno se considera de vida corta. Así mismo, el maíz dulce tiene mayores problemas de almacenamiento que el maíz blanco o amarillo. Historia precosecha del cultivo o la especie: antes de la cosecha, el cultivo está expuesto a una serie de factores que pueden mermar su calidad, y ningún almacenamiento por 16 muy bueno que sea, puede mejorarla. Por ello, para garantizar un buen almacenamiento es recomendable guardar siempre semillas maduras, con baja incidencia de daños mecánicos o por patógenos y que no hayan sido sometidas a excesivo estrés de temperatura y humedad durante su maduración y cosecha. Estructura y composición química de la semilla: ciertas estructuras como las glumas en los cereales, ayudan a prolongar la longevidad de las semillas; las cáscaras, aristas o ambas, parecen tener un efecto inhibitorio sobre el desarrollo de hongos en los cereales almacenados. El tamaño y arreglo de las estructuras esenciales de las semillas y la composición química de estas, también son factores que afectan el almacenamiento. Por ejemplo, semillas ricas en aceites y proteínas son más susceptibles al deterioro que las semillas ricas en carbohidratos. Grado de madurez: cuando las semillas están fisiológicamente maduras presentan la máxima calidad en todos sus atributos como tamaño, peso, germinación y vigor, por lo tanto semillas llenas, sanas y maduras se almacenan mejor que aquellas que no hayan alcanzado su total grado de madurez. Presencia de latencia: muchas semillas pueden desarrollar cierto grado de latencia cercano al momento de la cosecha. Esta latencia puede ser debida a diversas causas, como barreras físicas causadas por tegumentos, brácteas, glumas, pericarpio, testa u otra estructura; o bien por aspectos fisiológicos relacionados con el embrión, por presencia de inhibidores o como sucede en muchos casos, una combinación de factores. En cualquiera de estas expresiones, la latencia ayuda a prolongar la vida de las semillas y de acuerdo a las temperaturas de almacenamiento, este fenómeno puede aumentar o desaparecer. Vigor: el vigor de las semillas es un factor determinante en la longevidad de las semillas durante el almacenamiento. A mayor vigor, mayor potencialidad de permanecer almacenadas La evaluación de la calidad física de semillas llenas y bien desarrolladas, no infestadas por insectos o no afectadas por otro tipo de daño. Evitar las semillas vanas (INIA 2004 y FAO 1991).El recolector puede evaluar la calida física de una recolección potencial a través de la prueba de corte o cut test (Gold et. al 2004). Esta técnica consiste en seccionar una muestra representativa de las semillas (10 a 20 semillas) utilizando tijeras de podas o cuchillo de campo y observar semillas llenas y vacías, abortadas o infestada. En el caso nuestra región las recolección bayas de Barberis buxifolia y Berberis ilicifolia se realizan en los meses de febrero y marzo, sin presencia de e insectos o de otras plagas que se puedan alojar en frutos causando serios daños a las semillas (Yagello et. al 2004, Moore 1983) . 17 4.4 –Ensayos de Viabilidad Otra forma de identificar si las semillas si es viable con una muestra de la recolección se dejan en un vaso con agua, las semillas que flotan se encuentran vanas y las que llegan al fondo se encuentran llenas (Hattmann y Kester, 1998). Según las reglas internacionales para el ensayo de las semillas (1959) se puede utilizar un ensayo con tetrazolio para ciertas especies de semillas de árbol que germinan demasiado lentamente para ser ensayadas en los métodos ordinarios de germinación. Para este método se utiliza una solución acuosa al 1 por ciento de cloruro de tetrazolio o bromuro de tetrazolio. Cada ensayo deberá efectuarse cuando menos 4 veces sobre 100 semillas o de un numero representativo de la especie. Estas deben ponerse en la solución y sumergirse ligeramente. Durante el tratamiento las preparaciones deben mantenerse en la oscuridad por varios períodos (máximo 30ºC), si no se requieren otras temperaturas en las instrucciones especificas para las especies y géneros en particular. Después de terminado el ensayo con tetrazolio, la solución se decanta y las preparaciones se enjuagan con agua antes de hacer determinaciones. Según Hartmann y Kester (1998), también existe la metodología del TTC (trifenil tetrazolio), ocupando una muestra de semillas se realiza un corte longitudinal y se colocan en la solución, la tinción roja de los tejidos indica que la semilla es viable. Se obtuvieron viabilidad para especies de arbustos nativos con la metodología de TTC sobre 74%(Figura 4) (Yagello et al., 2006). FIGURA 5. Evaluación de viabilidad de semillas con el test de triferil tetrazolio (TTC) en semillas de Berberis buxifolia (Calafate) 18 4.5- Determinación del Contenido de Humedad La cantidad de semilla de una semilla varía continuamente según las condiciones ambiéntales. La relación de agua a otros componentes de la semilla es compleja, pero puede suponerse que existe en tres estados, solapados y que no se distinguen entre si. Parte del agua forma parte esencial del protoplasma vivo de los materiales orgánicos complejos que componen el endospermo. En este estado es químicamente estable e independiente de los alrededores de la semilla. Esta agua es firmemente unida a la semilla, pero menos en el primer estado, y su cantidad puede variar. En tercer lugar, el agua está en un estado similar al de la humedad en un papel secante húmedo, denominándose agua libre. Puede existir ligeras conexiones entre los tres estados dentro de la semilla, pero el agua libre es la que entra y sale de está según la humedad de la atmósfera y afecta su longevidad en el almacén. Teóricamente el contenido de humedad se refiere a la cantidad que hay de esta agua libre en la semilla y se expresa como porcentaje del peso total de la semilla en el momento de realizar la determinación. El principio de la determinación del contenido de humedad en el laboratorio es que el agua libre puede ser eliminada de una muestra pesada previamente, y la consecuente perdida de peso se supone que es el agua que contenía la muestra. Para las semillas agrícolas la humedad se elimina por calor en un horno de secado mantenido a temperatura constante. Cuanto más alta la temperatura menos tiempo se necesita para el secado, y por conveniencia este tiempo tiene que ser el menor posible. No importa si el embrión muere en el proceso, por lo que la temperatura puede superar el punto de evaporación. A estas temperaturas se evapora con bastante rapidez casi toda el agua libre. La perdida de peso de la muestra es rápida al principio, descendiendo posteriormente su velocidad al desaparecer toda el agua de este tipo. Si se mantiene el calor a partir de este punto, se sigue perdiendo el agua más lentamente, pero de diferente naturaleza. Existe semillas susceptibles (Oleaginosas), dependiendo de la constitución del aceite, la linaza por ejemplo al estar expuesto al aire. Lo cual se debe a una oxidación, que puede ocurrir en el horno de secado. Deben encontrarse experimentalmente la temperatura y tiempos de secados apropiados para cada especie y restringirse a ellas en los test de rutina (Thomson, 1979) Los métodos ideales llevan demasiado tiempo, y los métodos recomendados en los laboratorios de rutina no son bastante perfectos. Pueden no cumplir del todo alguno de estos requisitos, pero dan resultados consistentes y casi seguros. Por esta razón, el contenido de húmeda puede definirse como la perdida en peso cuando una muestra se seca bajo condiciones estándar. Como se ha explicado anteriormente las relaciones entre el contenido de humedad de las semillas sobre la base del peso en húmedo o en fresco y contenido de humedad sobre la base en peso seco y entre el contenido de humedad en equilibrio de la semilla y la 19 humedad relativa de la atmósfera circundante son factores importantes en el procesamiento y almacenamiento. En primer caso, la manipulación de contenido de humedad relativo puede modificar eficazmente el contenido de humedad en las semillas hasta que alcanzan el valor optimo para el almacenamiento y en el segundo caso el contenido de humedad puede mantenerse en ese valor optimo o cerca de el manteniendo el contenido de humedad relativa adecuada que están inmersas las semillas (Estudio de FAO, 1980) En la actualidad debido al su contenido de humedad y otras características las semillas se pueden clasificar en (Robert, 1973, León y Kate, 2004). Ortodoxas: semillas que pueden sercarse hasta un contenido de humedad bajo, alrededor del 5% (peso húmedo), y almacenarse perfectamente a temperaturas bajas o inferiores a 0 grados durante largos periodos (León y Kate, 2004. En este tipo de semillas, el contenido de humedad es probablemente el más importante de los factores que determinan la longevidad de las semillas (Holmes y Buszewicz, 1958) Recalcitrantes: semillas que no pueden sobrevivir más allá de un contenido de humedad relativamente alta (con frecuencia en intervalo de 20 a 50%, peso en húmedo) y que no tolera el almacenamiento durante largos periodos. 20 5.-CONCLUSIONES Es importante considerar para un óptimo almacenaje el tipo de semilla (clasificación Taxonómica), historial previo y las condiciones del almacenaje. Hay que considerar cuales son los mecanismos de transferencia entre la semilla y el aire. La Humedad relativa del aire y la Temperatura. De acuerdo a estos factores se podrá determinar la vida de la semilla. Existen diferentes tipos de almacenamiento, estos se pueden ajustar según la especie, sitio y características de la semilla. Es necesario realizar protocolos y ensayos en el momento de la colecta de semillas y periódicamente para determinar viabilidad, capacidad germinativa y contenido de Humedad para demostrar el potencial del almacenamiento y longevidad de la semilla. 21 6.-BIBLIOGRAFIA ∗ CEROVICH, M.; F. MIRANDA. 2004. Almacenamiento de semillas: estrategia básica para la seguridad alimentaría. CENIAP HOY no. 4, enero-abril 2004. Maracay, Aragua, Venezuela. URL: www.ceniap.gov.ve/ceniaphoy/articulos/n4/texto/mcerovich.htm ∗ DONOSO, C. 1981. Tipos forestales de los bosques nativos de Chile. Proyecto CONA/FAO de investigación y Desarrollo Forestal. Santiago, Chile. WWW. scielo.cl ∗ FAO. 1980. Informe sobre Curso FAO/DANIDA de Capacitación en Recogida y Manipulación de Semillas Forestales. Tailandia . MR/H 2855/E. FAO. Roma. ∗ GOLD, K. LEÓN-LOBOS, P Y WAY, M. Manual de recolección de semillas de plantas silvestres para conservación a largo plazo y restauración ecológica. 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