Download polimorfismos del gen p53 en cáncer de mama familiar en una

POLIMORFISMOS DEL GEN P53
EN CÁNCER DE MAMA FAMILIAR
EN UNA POBLACIÓN
COLOMBIANA
Yadira Yleana Pinto Quintero
Universidad de los Andes- Universidad del
Rosario-Hospital Militar Central
Agosto de 2006
POLIMORFISMOS DEL GEN P53 EN CÁNCER DE
MAMA FAMILIAR EN UNA POBLACIÓN
COLOMBIANA
• Estudio Colaborativo Interinstitucional:
HMC
Dr. William Sánchez
Dr. Diego Vanegas.
Dr. Alfredo Ballén
Unidad Oncológica del Country
Dr. José Fdo Robledo
Dr. José Joaquín Caicedo
Universidad Javeriana
Dr. Ignacio Briceño
Dra. Diana Torres
Dr. Jaime Bernal
Fundacion Santafe de Bogota
Dr. Fabio Torres
Fundación ONES
CÁNCER
Enfermedad multifactorial caracterizada por
una proliferación celular descontrolada,
causada por alteraciones en la información
genética que inducen cambios en eventos
moleculares de la células.
Mutaciones:
• Espontáneas.
• Producidas por cancerígenos (químicos,
físicos y virales).
Mecanismos celulares alterados:
• Reparación del ADN (BRCA 1, BRCA 2,
ATM, P53)
• Proliferación (PRb, control ciclo celular
Ciclina y CDKs y P53)
• Adhesión celular (cadherinas)
• Apoptosis o muerte celular programada
P53
Cáncer de mama
• Prevalencia
- En el Reino Unido 1:12 mujeres
- En USA 1:8 mujeres
• 10-15% son de origen familiar (BRCA)
• Factores genéticos de baja penetrancia
“Polimorfismos”
P53 y el cáncer de mama
Localizado en el
cromosoma 17 posición
17p13.1
Factor de transcripción.
 Monitorea la integridad
y la estabilidad del
genoma.
Se transcribe y traduce
continuamente.
Polimorfismos del gen p53
 En humanos el gen p53 es polimórfico en el
exón 4, el intrón 3 y el intrón 6.
 Polimorfismo del exón 4: Codón 72;
Arginina o Prolina.
a.a.
 Intrón 3: duplicación de 16 pb.
 Intrón 6 presenta un cambio de A/G : donde G
contiene el sitio de restricción para la enzima
MspI.
Relación del polimorfismo del codón
72 con la función de P53
P53 codón 72
Prolina
Arginina
Movilidad electroforética
más rápida
más rápido
Crecimiento tumor
más lento
Tamaño tumor
más pequeño
Característica enfermedad
más oncogénico
Inducción de la transcripción más fuerte
Inducción apoptósis
más eficiente
Interacción con mdm2
mayor afinidad
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Describir la frecuencia de los polimorfismos del codón 72, del intrón 3 y del
intrón 6 del gen p53, en una población colombiana con cáncer de mama familiar
con respecto a un grupo control de individuos sin antecedentes de cáncer.
OBJETIVOS ESPECíFICOS
•
Determinar las frecuencias alélicas del polimorfismo del codón 72 del gen p53
•
Determinar las frecuencias alélicas del polimorfismo de la inserción de 16 pb en
el intrón 3 del gen p53.
•
Determinar las frecuencias alélicas del polimorfismo del intrón 6 (A/G) Msp I del
gen p53
•
Determinar si existe asociación entre los polimorfismos del gen p53 en el codón
72, intrón 6 (A/G) MspI o Inserción en el intrón 3 de16pb y la presencia de
cáncer de mama familiar.
METODOLOGIA
 Tipo de estudio: Prospectivo y analítico
de casos y controles (1:1).
 Población : mujeres con edad entre 18
y 80 años.
 Caso: Paciente con Dx de Ca de mama
con patología confirmada que cumpla
con los criterios de inclusión de Bethesda.
Análisis Estadístico
• Se utilizo el programa estadístico SPSS 11.5
• Pruebas efectuadas:
• Análisis Bivariado:
– Prueba exacta de Fisher
– Prueba Ji-cuadrado sin corregir de Pearson
• Análisis Multivariado:
– Regresión Logística incondicional
– Razón de disparidad (OR)
• Todas las purebas estadisticas se evaluaron con una
Significancia (p<0,005)
MUESTRA
Marco Muestral: HMC
UOC
FSFB
UJ
Particulares
Tamaño de Muestra: 186 Casos
186 Controles
RESULTADOS
GENOTIPOS DE LOS POLIMORFISMOS DEL
GEN p53
404pb
336pb
199pb
196pb
180pb
113pb
86pb
Gel de agarosa 2% con los productos de PCR-RFLP’s. Línea 1 y 8 marcador de peso 50 pb, Intrón 6:
Línea 2 homocigoto (M/M), línea 3 heterocigoto (W/M), línea 4 homocigoto (W/W); Exón 4: Línea 5
homocigoto (Pro/Pro), línea 6 heterocigoto (Arg/Pro), línea 7 homocigoto (Arg/Arg); Intrón 3: línea 9
homocigoto (M/M), línea 10 heterocigoto (W/M), línea 11 homocigoto (W/W)
Características Sociodemográficas en
Casos y Controles
Edad P=0,020
Estrato Social
Educación
P=0,000
Características Clínicas en casos y controles
90
76.9
80
72
70
Porcentaje(%)
Controles (%)
Casos (%)
63.2
60
83.3
73.6
55.9
50
44.1
40
28.6
30
23.1
19.9
20
10
26.4
16.7
8.2 8.1
0
< 20
20-23
IMC
P=0,144
> 23
Si
No
Medicamentos
P=0,000
Si
No
Alergias
P=0,125
Antecedentes Gineco-Obstetricos
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Casos (%)
76,9
Controles (%)
65,8
42
33,3
29,3
23,7
16
≤12
13
16,1
15,6
9,9
14
Edad Menarquia
P=0,006
15
20,2
11,3
2,8
≥16
8,8
≤25
26-29
14 14,3
≥30
Edad del Primer
Embarazo P=0,015
Antecedentes Gineco-Obstétricos
100
Casos (%)
90
80
70
56,2
60
50
81,2
57,7
58,1
51,6
42,3
40
30
20
10
90,9
Controles (%)
20,7
22
13,5 14
41,9
18,8
7,9
10,8
9,1
1,7
1,6
0
u
N
ri
a
lip
d
da
3
1-
5
4-
8
6-
12
9
Si
o
N
Si
o
N
No. Embarazos
Anticonceptivos
Terapia Hormonal
P=0,868
P=0,946
P=0,008
Hábitos Alimenticios en Casos y Controles
100
90
82,3
87,9
84,9
80,9
75,1
80
86,1
Casos (%)
Controles (%)
83,9
71
69,4
69
70
58,1
60
50
41,9
40
30
20
65,6
29
24,9
17,7
30,6
19,1
12,1 15,1
34,4
31
13,9 16,1
10
0
Si
No
Fuma
P = 0,099
Si
No
Carnes
Asadas
P = 0,421
Si
No
Si
No
Enlatados
Café
P = 0,036 P = 0,550
Si
No
Si
No
Embutidos Alcohol
P = 0,029 P = 0,496
Características Clínico Patológicas de los
casos de cáncer de mama
Casos %
44,2
43,8
26,1
24,4
Edad n = 180
s
6,6
ec
Iz h o
qu
ie
rd
o
Am
bo
s
G
ra
do
I
G
ra
do
II
G
ra
do
III
N
eg
9,4
18,6
D
er
9
60
-6
9
50
-5
40
-4
9
6,5
14,4
>7
0
13,9
56,2
54
Po
49,2
<3
9
60
50
40
30
20
10
0
Lateralidad
n = 181
Grado
Histológico
n = 172
Nódulos
Linfáticos
n = 169
Características Clínico Patológicas de los
casos de cáncer de mama
90
80
77.2
71.5
70
63.9
60
Casos %
50
36.1
40
30
20.3
20
13.3
10
10
4.4
3.8
0.6
1.1
0.6
1.1
0.6
Pr
eM
en
o
Po
st
-M
en
o
lo
de
s
Fi
tu
In
si
oi
de
Co
l
CL
M
uc
in
si
In
CD
y
CL
CD
os
o
tu
CL
I
sit
u
In
CD
PR
+
ER
-y
ER
+
y
PR
-
I
Ne
g
Po
s
0
Receptores
Hormonales
n = 158
Tipo
Histológico
n = 180
Estado
Menopáusico
n = 182
Asociación entre los genotipos de los polimorfismos y las
características clinicopatológicas de los casos
120
≤39
40-49
50-59
60-59
≥ 70
Pre-Meno
Post-meno
100
100
100
100
80
70,5
65,5
63,7
65,5
61,6
58,3
60
56,2
50 50
41,7
41,7
40,4
36
40
36,3
34,9
28,1
16,7
20
8,3
23,4
18
13,5
9
7
38,4
38,3
34,6
8,8
34,5
37,5
29,5
27,9
15,8
43,8
41,9
25
24,7
18,8
18,6
16,2 13,2
11
7
14,8 13,6
8,6
4,7
6,3
0
Pro/Pro (%)
Arg/Arg (%)
P≥0,15
Pro/Arg (%)
I 6W/W (%)
I6 W/M(%)
I6 M/M (%)
I3 W/W (%)
I3 W/M(%)
I3 M/M (%)
Asociación entre los genotipos de los polimorfismos y las
características clinicopatológicas de los casos
120
Gan. Linf Neg
Gan Linf Pos
ER-PR Pos
ER-PR Neg
ER (+) – PR(-)
100
ER(-) PR(+)
100
100
100
80
74
70
73
71,7
71,3
67,9
66,7
63
64,3
62,5
60
55,8
53,9
51,4
48,6
46,1
44,2
37,5
37
40
71,4
35,7
30
22,6
22,2
18,8
20
20
21
18,9
14,3
14,3
11,1
4,23,1
3,85,7
8,1
3,83,3
0
4,9
2,8
0
Pro/Pro (%) Arg/Arg (%) Pro/Arg (%) I 6W/W (%)
P>0,15
I6 W/M(%)
I6 M/M (%) I3 W/W (%)
I3 W/M(%)
I3 M/M (%)
Distribución de frecuencias genotípicas y alélicas
del codón 72 en casos y controles
Genotipos
Codón 72
Arg/Arg
Pro/Arg
Pro/Pro
Alelos
Arg
Pro
λ2 EHW
Cáncer de
mama
n (%)
Controles Valor –P
n (%)
0,004
114(61,3)
60(32,3)
12(6,5)
82(44,1)
85(45,7)
19(10,2)
0,001
0,008
0,260
0,004
288 (77,4)
84 (22,6)
1,113
249 (67,0)
123 (33,0)
0,195
Asociación entre el genotipo del codón 72 de p53 y el
riesgo a desarrollar Cáncer de mama
Genotipos
Codón 72
Cáncer de Controles
mama
n=186
n= 186
OR (IC95%)
OR Ajustado*
(IC95%)
Arg/Arg
114
82
1,97 (1,27 -3,05)
2,19 (1,33-3,63)
Arg/Pro
60
85
1 referencia
1 referencia
Pro/Pro
12
19
0,89 (0,40-1,98)
1,18 (0,48-2,88)
*Regresión Logística Incondicional OR ajustado por edad menarquia, nuliparidad,
edad del primer embarazo, IMC
Asociación entre el genotipo del codón 72 y factores
de riesgo hallados en el presente estudio
Genotipos
Codón 72
Arg/Arg
Arg/Pro
Pro/Pro
Cáncer Controles
de
n=186
mama
n= 186
114
60
12
82
85
19
OR (IC95%)
OR Ajustado*
(IC95%)
1,97 (1,27 -3,05) 1,75(1,04-2,92)
1 referencia
1 referencia
0,89 (0,40-1,98) 0,98(0,38-2,48)
*Regresión Logística Incondicional OR ajustado por Estrato social, Nivel educativo, Terapia
hormonal, Enlatados y Embutidos
Frecuencias genotípicas y alélicas del Intron 3 y 6
en Casos y Controles
Cáncer de
mama
n= 186 (%)
Genotipos
Intron 6
W/W
W/M
M/M
Alelos
W
M
X2 EHW
Genotipos
Intron 3
W/W
W/M
M/M
Alelos
W
M
2
λ EHW
Controles
n=186 (%)
Valor-P
0,055*
140 (75,3)
45 (24,2)
1 (0,5)
153 (82,3)
29 (15,6)
4 (2,2)
325 (87,4)
47 (12,6)
1,71
335 (90,1)
37 (9,9)
3,13
0,099
0,038
0,216*
0,246
0,001*
168 (90,3)
16(8,6)
2(1,1)
184(98,9)
1(0,5)
1(0,5)
352(94,6)
20(5,4)
4,44
369(99,2)
3(0,08)
81,99
0,000
0,000
1,000*
0,003
Asociación entre el genotipo de los intrones 3 y
6 y el riesgo a desarrollar Cáncer de mama
Genotipos
Intrón 6
W/W
W/M
M/M
Genotipos Intrón
3
W/W
W/M
M/M
Cáncer de
mama
n= 186
140
45
1
Controles
n=186
OR (IC95%)
OR Ajustado*
(IC95%)
153
29
4
1 referencia
1,7 (1,08-2,85)
0,27 (0,03-2,47)
1 referencia
1,53 (0,89-2,82)
0,36 (0,03-3,81)
168
16
2
184
1
1
1 referencia
17,53 (2,29-133,57)
2,19 (0,19-24,38)
1 referencia
17,86(2,25-141,84)
No aplica
*Regresión Logística Incondicional OR ajustado por edad menarquia, nuliparidad, edad del
primer embarazo, IMC
Asociación entre el genotipo de los intrones 3 y 6
y los factores de riesgo hallados en el presente estudio
Genotipos Intrón 6
W/W
W/M
M/M
Genotipos Intrón 3
W/W
W/M
M/M
Cáncer de mama
n= 186
109
33
1
Controles
n=186
92
12
2
OR (IC95%)
1 referencia
1,7 (1,08-2,85)
0,27 (0,03-2,47)
OR Ajustado*
(IC95%)
1 referencia
1,26(0,68-2,32)
0,16(0,01-2,09)
168
16
2
184
1
1
1 referencia
18,53 (2,29-133,57)
2,19 (0,19-24,38)
1 referencia
18,24 (2,30-144,4
2,66(0,14-50,87)
*Regresión Logística Incondicional OR ajustado por estrato social, nivel educativo, terapia hormonal,
enlatados y embutidos
CONCLUSIONES
Para la población colombiana estudiada de individuos
con cáncer de mama heredofamiliar se puede concluir
que:
El genotipo Arg/Arg del codón 72 del gen p53 es un
factor de riesgo (2 veces más) para el desarrollo del
cáncer de mama heredofamiliar.
El genotipo W/M del intrón 3 del gen p53 es un factor
de riesgo (18 veces más) para el desarrollo del cáncer
de mama heredofamiliar.
 El genotipo W/M del intrón 6 del gen p53 tiene asociación aunque
no muy fuerte con el riesgo en el desarrollo del cáncer de mama
heredofamiliar.
 Hay asociación entre los siguientes factores y el desarrollo de
cáncer de mama heredofamiliar:
Edad de la menarquia inferior a 12 años
La edad del primer hijo (26-29 años)
El consumo de embutidos y de enlatados
El uso de terapia hormonal
 No hay asociación entre los genotipos de los diferentes
polimorfismos del gen p53 y las características clinicopatológicas
en los casos con cáncer.