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RESISTENCIA EN
HIV
Bioq. María Eugenia Ochiuzzi
Bioq. Ariel Gianecini
Htal. Francisco J. Muñiz
. Linfocitos T
. Células Dendríticas
. Linfocitos B
. Stem Cells
. Macrófagos
. Células NK
CCR5
VIRUS R5
Infecta Macrófagos
Expresión en etapas tempranas
CXCR 4
VIRUS X4
Infecta Linfocitos
Expresión en etapas tardías
C5/X4
9
10
10 – 10 Virus/día
6
10 Mutaciones/día
Cuasiespecies
“Fitness”
Viral
Viral Sex
Cuasiespecies
Viral Sex
SUBTIPOS VIRALES
Formas Recombinantes Circulantes
B/F
ANTIRETROVIRALES
INHIBIDORES
DE INTEGRASA
INHIBIDORES
DE TR
INHIBIDORES
DE P
INHIBIDORES DE
FUSIÓN/ENTRADA
NRTI
(Inhibidores nucleosídicos/ nucleotídicos de TR)
Nucleosídicos:
-Análogos de timidina: Zidovudina (AZT )
-No análogos de timidina: Lamivudina (3TC)
Zalcitabina (DDC)
Emtricitabina (FTC)
Nucleotídicos:
Tenofovir (TFV)
Stavudina (D4T)
Didanosina (DDI)
Abacavir (ABC)
NNRTI
Nevirapina
(NVP)
(Inhibidores no nucleosídicos de TR)
Efavirenz
(EFV)
Delavirdina
(DLV )
Etravirina
(TMC 125)
INHIBIDORES DE PROTEASA
Saquinavir (SQV)
Nelfinavir (NFV)
Lopinavir (LPV)
Tipranavir (TPV)
Ritonavir (RTV)
Amprenavir (APV)
Atazanavir (ATV)
Darunavir (TMC 114)
Indinavir (IDV)
Fosamprenavir (APV)
INHIBIDORES DE
ENTRADA
-Inhibidores de
attachment
-Antagonistas de los
co-receptores
-Inhibidores de fusión
Inhibidores de fusión
Enfuvirtide (T-20)
A
membrana viral
gp41
gp120
Inhibidores de attachment
BMS-488,043, TNX-355
Inhibidores de CCR5/CXCR4
Inhibidores de CXCR4: AMD-11070
Inhibidores de CCR5: AK602, PRO 140, SCH-C, SCH-D, TAK-652, UK-427857
INHIBIDORES DE LA
INTEGRASA
INHIBIDORES DE MADURACIÓN
Terapia ARV: - clínica del paciente
- CD4
-carga viral
* Indicado : CD4 ‹ 300 cél/μl y/o
paciente sintomático
HAART: TERAPIA COMBINADA
ALTAMENTE ACTIVA
NRTIs
TDF + 3TC
TDF + FTC
ABC + 3TC
AZT + 3TC
AZT + FTC
NNRTI/IP
lovinapir/ ritonavir
fosamprenavir/ ritonavir
efavirenz
nevirapine
saquinavir/ ritonavir
Efectos adversos:
.toxicidad mitocondrial
.pancreatitis
.alteraciones renales
.alteraciones del SNC
.alteraciones neurológicas
.alteraciones hematológicas
.necrosis avascular
.dislipemia
.lipodistrofia
.alteraciones GI
.toxicidad medular
.hepatotoxicidad
.polineuropatía periférica
.acidosis láctica
.reacciones de alergia
.osteopenia, osteoporosis
.hiperglucemia
Efectos adversos:
.toxicidad mitocondrial
.pancreatitis
.alteraciones renales
.alteraciones del SNC
.alteraciones neurológicas
.alteraciones hematológicas
.necrosis avascular
.dislipemia
.lipodistrofia
.alteraciones GI
.toxicidad medular
.hepatotoxicidad
.polineuropatía periférica
.acidosis láctica
.reacciones de alergia
.osteopenia, osteoporosis
.hiperglucemia
Efectos adversos:
.toxicidad mitocondrial
.pancreatitis
.alteraciones renales
.alteraciones del SNC
.alteraciones neurológicas
.alteraciones hematológicas
.necrosis avascular
.dislipemia
.lipodistrofia
.alteraciones GI
.toxicidad medular
.hepatotoxicidad
.polineuropatía periférica
.acidosis láctica
.reacciones de alergia
.osteopenia, osteoporosis
.hiperglucemia
Efectos adversos:
.toxicidad mitocondrial
.pancreatitis
.alteraciones renales
.alteraciones del SNC
.alteraciones neurológicas
.alteraciones hematológicas
.necrosis avascular
.dislipemia
.lipodistrofia
.alteraciones GI
.toxicidad medular
.hepatotoxicidad
.polineuropatía periférica
.acidosis láctica
.reacciones de alergia
.osteopenia, osteoporosis
.hiperglucemia
Fracaso
terapéutico
Variantes
Resistentes
cuasiespecies virales
nuevas
niveles de RNA viral
cuasiespecies virales
originales
presión de selección
ejercida por drogas
clon resistente
clones resistentes
tiempo
RESISTENCIA PRIMARIA
*10-20%: Europa y USA
*2003-2004: NRTI: 7.1%
NNRTI: 9.1%
IP: 3.2%
*7.7% :Argentina
Infección
Inicio de
tto
Resistente
tiempo
Resistente
Replicación continua
Mutaciones
primarias
Sensible
Mutaciones
secundarias
Resistencia
a NRTI
Resistencia
a NRTI
Mutaciones - NRTI
Resistencia
a NNRTI
Mutaciones - NNRTI
Resistencia a IP
Resistencia a Inhibidores de Entrada
Fenómenos asociados a Resistencia:
-R cruzada
-Reversión de la R
-R múltiple: MDR
Fenómenos asociados a Resistencia:
-R cruzada
-Reversión de la R
-R múltiple: MDR
Fenómenos asociados a Resistencia:
-R cruzada
-Reversión de la R
-R múltiple: MDR
Fenómenos asociados a la Resistencia:
-R cruzada
-Reversión de la R
-R múltiple: MDR
ENSAYOS DE RESISTENCIA
->10% de R primaria: realizar estudio de Resistencia
-pacientes que no responden al tratamiento
.‹ tiempo posible desde diagnóstico de HIV
. > 1000 copias/ml
.no detectan especies minoritarias o presentes
en SNC, tracto genital
.no interrumpir el tratamiento
ENSAYOS GENOTÍPICOS Y FENOTÍPICOS
GENOTIPO
-Secuenciación directa:
- Método de Sanger
(ddNTP)
- Gene Chip
-Mutaciones puntuales:
- PCR alelo específica
-LIPA
Análisis de secuencias
-HIV Genotyping System (Applied Biosystem)
-TrueGene (Visible Genetics)
Gene Chip
-HIV PRT Gene Chip Assay (Affymetrix)
* PCR alelo específico
*LIPA
INCONVENIENTES
-diversidad genética del HIV1
-Interpretación del genotipo
Métodos Fenotípicos
1
2
3
4
5
6
IC 50
7
8
9
10 11 12
IC 90
Métodos Fenotípicos
- Ensayos Convencionales
. Ensayo de Reducción de Placa o Foco Sincicial
. Inhibición de la Producción de Antígeno p24
- Ensayos Virus Recombinantes
Ensayo Convencional
CMSP pac
. Requieren CMSP donantes
sanos
. Seleccionan subpoblaciones
virales
CMSP
Stock Viral
. Muy laboriosos y de alto
riesgo
Cultivo Celular
Células Mononucleares
Sangre Periférica
RT-PCR
TR
Plasma/Suero
CMSP
PR
Línea Celular
Vector Viral
Cut-Off
Cut-Off
FC = Cut- Off
Respuesta Máxima
Cut-Off
FC > Cut- Off
Respuesta Mínima
Fenotipo Virtual
Secuencia de nucleótidos de la muestra (ensayo
genotípico de resistencia)
BASE DE DATOS - Virco
Fenotipo
Genotipo
RLM cada droga ARV
MARs
RWFs
Factor Ponderado
de Resistencia
FC
Mutaciones Asociadas
a Resistencia
Propiedades
M. Genotípicos
M. Fenotípicos
Indirecta
Directa
Compleja
Sencilla
Detección precoz de resist.
SI
NO
Información genética
complementaria
SI
NO
Efecto de combinación de
diferentes mutaciones
NO
SI
Sensibilidad para
combianciones de drogas
NO
SI
Determinación de
sensibilidad
Interpretación de Resultados
Detección de cuasiespecies No variantes < 20%
Complejidad
Sencillas
No variantes < 20%
Compleja
Utilidad Genotipo y
Fenotipo
Información Fenotípica
Información Genotípica
Complejidad Mutacional / Experiencia Tratamiento
Fracaso
Terapéutico
Conclusiones
 Mejorar la potencia y farmacocinética de las
drogas
 Esquemas de dosificación mas simples
 Desarrollo de nuevas drogas de mayor potencia y
menor toxicidad
 Nuevas técnicas de menor complejidad y mayor
facilidad de interpretación
 Detección precoz de mutantes resistentes
emergentes