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Inducción de proteína recombinante
b-Lactamasa
Inducción de proteínas recombinantes
Las proteínas recombinantes son aquellas que obtenemos a partir
de una especie o una línea celular distinta a la célula original.
La proteína se obtiene por la expresión de un gen clonado en esa
línea celular que nos interesa.
ventajas de expresar proteínas recombinantes en bacterias:
fácil de cultivar
fácil de modificar genéticamente
trabajo rápido
alto rendimiento 80%
expresar un gen de humanos en bacteria.....
conformación
modificaciones postraduccionales
.... depende de la complejidad de la proteína
Sistemas biológicos de producción de PR
• Bacterias
– E. coli
– B. subtilis
• Células eucariontes
– Hongos
• Levaduras
– Saccharomyces cerevisiae
– Pichia pastoris y otros metilotróficos
• Hongos filamentosos
– Células animales en cultivo
– Células de insecto en cultivo
– Plantas
Maximizar la expresión
de proteínas
codificadas por genes
clonados
Clonación del
DNA
•DNA foráneo (secuencia
que se desea clonar)
•Vector de clonación
(vehículo)
Vector
híbrido o
recombinante
•Organismo huésped
(E. coli)
•Selección de vectores
4
Vector de clonación pET-24a(+)
7200 bp
• Un gene siempre
tiene que ir
flanqueado por una
zona promotora y
otra terminadora de
la transcripción
OPERON LAC
“Operón”: Se define como una unidad genética funcional formada
por un grupo o complejo de genes capaces de ejercer una
regulación de su propia expresión por medio de los sustratos con
los que interaccionan las proteínas codificadas por sus genes.
Los genes involucrados en la utilización de la Lactosa como
fuente de carbono, se encuentran agrupados y codifican para
enzimas que participan en la misma vía metabólica.
COMPOSICIÓN.
a) Genes estructurales (en tándem).
• gen lac z codifica para la β-galactosidasa
• el gen lac y que codifica para la permeasa de galactosido.
• el gen lac a, codifica para la acetiltransferasa de tiogalactósido.
Se transcriben desde un promotor común en un mRNA polícistrónico,
el cual es traducido para dar lugar a las tres enzimas.
COMPOSICIÓN
b)Promotor
Sitio donde la polimerasa de RNA se une al DNA
antes del inicio de la transcripción.
C) Operador
• Se localiza en traslape con el promotor , sirve
como el sitio de unión para una proteína, que
se conoce como represor.
d) Gen Regulador.
• El gen regulador puede estar cerca o lejos de los genes que están
siendo regulados. El gen regulador codifica para una proteína
específica, un producto denominado REPRESOR.
• El inductor del operón lac que utilizaremos
será el isopropiltiogalactósido (IPTG).
Análogos de la lactosa
El sistema de expresión también debe tener las
siguientes características:
Cromosoma de Escherichia coli
RESULTADOS DEL SEMESTRE PASADO
30
60 90 120
30
60
90 120 min
PREGUNTAS PARA EL GRUPO
1. ¿Cuál es el sistema y el vector de expresión que están utilizando
en la práctica?
2. ¿Qué proteína se desea producir?
3. ¿Cómo sabrán que se llevó a cabo la inducción?