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MÓDULO III ELECTRICIDAD Y ELECTROFORESIS I ELECTRICIDAD Apliquemos los conceptos ya vistos en un ejercicio... , ri c R1 Rv b a R2 R3 Si se aumenta Rv Analice que sucede con: •Vac •Vbc •Vab •intensidad total •las intensidades que pasan por R2 , R3 y Rv Apliquemos los conceptos ya vistos en un ejercicio... , ri c RV R1 a b R2 R3 Grafique: iT = f (Rv) •Vbc= f (Rv) ...y de tarea para el hogar... •Vac = f (Rv) •Vab = f (Rv) y si quieren ejercitar...idem para el circuito anterior MÉTODOS DE MEDIDA DE FEM •Gráfico •Potenciométrico MÉTODOS DE MEDIDA DE RESISTENCIAS •Puente de hilo MÉTODO GRÁFICO V Vab a b A R ri i MÉTODO POTENCIOMÉTRICO Rv c a b p x G Si cuando está conectada p, no circula corriente por G cuando Vac = Vcb, analice que sucederá al conectar x (considere los casos en que x >, < e = p) •¿Cómo mide x en cada caso? •¿Cuál es la función de Rv? PUENTE DE HILO c RV RX G a R1 R2 d b Estando el circuito en equilibrio (iG = 0): Encuentre una ecuación que le permita medir Rx. PUENTE DE HILO c RV RX G a R1 R2 d En equilibrio: iG = 0 Vac = Vad y Vcb = Vdb Rv . iv =R1 . i1 Rx . ix =R2. i2 Dividiendo m a m ambas ecuaciones y simplificando (ya que: iv = ix e i1 = i2) : Rv . R2 = Rx . R1 b PUENTE DE HILO o bien, si Rab es un alambre conductor de sección constante, donde: R= l/A Rv . l2 = Rx . l1 PUENTE DE HILO c RV RX G a R1 R2 d b ¿Qué ocurre si se corre el cursor hacia a? ¿ y si se lo corre hacia b? PUENTE DE HILO c RV RX G a R1 R2 d b Si se cambia Rx por Rx’ de menor valor? En qué sentido circula la corriente por el galvanómetro ¿Cómo se restablece el equilibrio? (Dé más de una posibilidad). ELECTROFORESIS ¿QUÉ ES LA ELECTROFORESIS? Es el fenómeno de migración de partículas cargadas eléctricamente en un campo eléctrico EQUIPO de ELECTROFORESIS fuente de poder soporte cuba ESQUEMA DEL CIRCUITO ELÉCTRICO Fuente de poder () i a b R Analice Vab e intensidad en el caso de ubicar en la misma cuba electroforética dos ó más tiras de soporte. ¿Cómo las colocaría, en serie o en paralelo? CIRCUITO ELÉCTRICO: fuente de poder Fuente de poder 220 v 500 v Rectificador C:C: C:A: 0v Transformador Potenciómertro Potenciómetro C.A. = corriente alterna C.C. = corriente continua V = voltímetro A = Amperímetro 500 v CUBA Cuba Supongamos una partícula cargada migrando dentro de un fluido por la acción de un campo eléctrico... E Feléctrica = E . q + Fresistiva _ Feléctrica = E . q Fresistiva Movilidad electroforética Feléctrica = E . q Fresistiva = kf . v Feléctrica = Fresistiva E . q = kf . v v / E = q / kf Movilidad electroforética: Se define como la velocidad de la partícula por unidad de campo eléctrico: = v / E = q / kf Por lo tanto... = v / E = q / kf partículas con distinta carga eléctrica distinta movilidad electroforética Separación de moléculas en un campo eléctrico identificación pureza cuantificación purificación Sustancias anfotéricas Son aquellas que pueden comportarse como aniones o cationes, según el pH al que se encuentren Variación de la movilidad electroforética con el pH del medio - COOH + COO - COO + H3N – C – H R H3N – C – H R H2N – C – H R Entonces... - COOH - COO + COO + H3N – C – H H3N – C – H R H2N – C – H R R pH ácido Punto isoiónico alcalino Forma iónica Catión Ión anfótero Anión Migración Hacia el cátodo Nula Hacia el ánodo Distancia Negativa Nula Positiva Movilidad electroforética en función del pH curva corregida por efecto electroendosmótico pI Movilidad electroforética 30 20 10 0 -10 0 5 10 15 -20 -30 pH curva corregida por efecto electroendosmótico Punto isoeléctrico (pI) Es el pH que corresponde a movilidad electroforética = cero es decir, el pH en el cual la carga neta de la molécula es nula. Variación de la movilidad electroforética con la fuerza iónica = v / E = q / kf Fuerza iónica alta Fuerza iónica baja ++ + ++ + - + + + + + ++ ++ - ++ - - + + + ++ + v2 - + + + + + - ++ ++ + + + v1 E = v / E = q / kf kf depende de: - la forma y el tamaño de la partícula - la viscosidad del medio En el caso particular de considerar a la partícula esférica moviéndose en un medio de viscosidad , según la ley de Stokes, kf = 6..r. y = q / 6..r. Resumiendo... = v / E = q / kf ¿De qué depende la movilidad electroforética? • carga de la partícula (pH) •fuerza iónica del medio •tamaño (radio) y forma de la partícula • viscosidad del medio •temperatura Recordando… =v / E = d . L / t . Vab ¿Qué ocurre con la movilidad electroforética si... • se modifica la caída de potencial aplicada? • se modifica la longitud del soporte? • se modifica el tiempo de corrida? Electroforesis Libre Descripta por Tiselius en 1937 Las moléculas migran en solución hacia el electrodo correspondiente hasta que se llega a un equilibrio de fuerzas Desventajas: ► alta difusión ►baja resolución Soportes Función: contener al electrolito o buffer de corrida y generar algún impedimento al movimiento libre de los componentes de la muestra tal que se minimice la difusión al azar. Ejemplos: • papel • acetato de celulosa • geles de agarosa • geles de poliacrilamida Flujo electroendosmótico soporte -------------------------++++++++++++++++++++++++ + Flujo electroendosmótico ++++++++++++++++++++++++ -------------------------- - Flujo electroendosmótico: corrección deeo _ + dM testigo neutro muestra dM C = dM - deeo (hacia el cátodo) Flujo electroendosmótico: corrección deeo _ + dM testigo neutro muestra dM C = dM - deeo (hacia el ánodo) Flujo electroendosmótico: corrección deeo _ + dM testigo neutro muestra dM C = dM - deeo (hacia el ánodo) Movilidad electroforética Movilidad electroforética en función del pH 25 20 15 10 5 0 -5 0 -10 -15 -20 -25 pI 5 10 15 pH curva corregida por efecto electroendosmótico curva experimental Testigo neutro Continuará...