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II Congreso Científico de Estudiantes
de Tecnología Médica del Sur
Universidad de la Frontera
PLAQUETAS Y
ANTICUERPOS ANTIFOSFOLÍPIDOS
Iván Palomo
Facultad de Ciencias de la Salud
Universidad de Talca
Octubre, 2005
Figuras blanco-negro: libro Hematología: Fisiopatología y Diagnóstico, 2005
Plaquetas
Megacariopoyesis
Remoción fisiológica de plaquetas desde
la circulación
Médula ósea
Sangre
Trombopoyesis
Hemostasia
Megacariocitos
(8-10 días)
Marcadores de
envejecimiento:
Serotonina
Densidad
?
Bazo, Hígado, MO
Remoción
Macrófagos
PAIgG en plaquetas humanas separadas en
gradiente de densidad (n:18)
Moléculas IgG/ Plaqueta
1200
PBD vs PAD p<0.01
1000
800
600
400
200
PBD
(Jóvenes)
PDI
PAD
(Envejecidas)
Expresión de PS, GPIV y P-Selectina
en plaquetas humanas de diferente densidad
Recuento de plaquetas y exposición de PS
Inyección de estradiol en perros (n:7)
Exposición de PS*
Recto Plaquetas
*, citometría de flujo
Recto plaquetas y potencial de mb mitocondrial
Inyección de estradiol en perros (n:13)
Recto
Plaquetas
ψm
DIOC, MFI
Remoción fisiológica de plaquetas
mecanismo inmune y no inmune
FcR
IgG
Macrófago
FS
Scavenger R
Estructura plaquetaria
ADP
ATP
Serotonina
Calcio
P selectina
FvW, fibronectina
Vitronectina
Trombospondina
FV, HMWK
Fibrinógeno, FXI
Proteína S, PAI-I
PF4
PDGF, TGF 
Función plaquetaria
Ac Antifosfolípidos
Ac Antifosfolípidos
• Grupo heterogéneo de anticuerpos
• IgG, IgM, IgA
• ELISA de fase sólida (aCL)
• Anticoagulante Lúpico (AL)
• Trombosis (venosa y arterial)
• Abortos espontáneos a repetición
• Trombocitopenia
CLASIFICACIÓN DEL SAF
• Primario
• Secundario
Enf.Auntoinmunes
Neoplasias
LES
Lupus probable
Otras mesenquimopatías
Tumores sólidos
Neoplasias hematológicas
Inducido por drogas
Asociado a infección
• Variantes del SAF
SAF catastrófico
Asociado a otros Sínd.microangiopáticos
Síndrome de hipoprotrombinemia
• SAF seronegativo
Antígenos
• Beta-2 Glicoproteína I (2GPI)
• Protrombina (PT)
• Proteínas del Sistema Proteína C
• PC, PS, Trombomodulina
• Anexina-V
• Kininógeno de alto peso molecular
• Fosfolípidos aniónicos: FS, CL
2GPI
≈60aa
Glicoproteína
5 dominios
≈60aa
Patrón de PM
kDa
2GPI
200
≈60aa
≈60aa
≈80aa
97
68
50
43
29
326 aa
12 Lis, 1 Arg, 1 His
Ac antiβ2GPI
Epítopos
*
*
*
*
*
Ac antiβ2GPI - β2GPI:
Baja afinidad en solución
Ausencia de CI séricos en SAF
β2GPI – Superficie FL: Baja afinidad
Aumenta con Ac antiβ2GPI
Protrombina
• 72 kDa
• 579 aa
Dominios Gla
Complejo
Protrombinaa
Ac anti-Protrombina (aPT)
Epítopos
Fragmento 1.2
A
B
s-s
• Aumentan unión PT a superficie FL, sin interferir C. Protrombinasa.
• Inhiben acción de Antitrombina.
• Interferen acción de la Plasmina.
Complejo
protrombinasa
Acción anticoagulante:
Interfire acción C. Protrombinasa
Complejos Ac antiβ2GPI – β2GPI
Ac anti-2GPI
(dominio I)
2GPI
Reversible
Ac anti- 2GPI
(dominio II)
Irreversible
Similar en Ac antiPT - PT
Ac aFL en pacientes con LES
145(5): 336-340
Ac aFL en pacientes con trombosis* y controles
Pacientes (n=226)
Controles (n=95)
n
%
n
%
aCL
57
25.2
4
4.2
4.8
(1.4-16.1)
0.01
aPT
31
13 .7
3
3.2
8.9
(2.1-38.5)
0.004
anti-2GPI 14
6.2
2
2.1
3.2
(0.5-19.5)
*, Trombosis Venosa o Arterial
OR**
p*
0.2
**, ajustado por edad y sexo
Continua
Palomo I, Pereira J, Alarcón M, Vasquez M, Pinochet C, Velez MT, Sandoval J, Icaza G, Pierangeli S.
Prevalence and isotype distribution of antiphospholipid antibodies in unselected Chilean patients with venous and arterial thrombosis.
Clin Rheumatol. 23(2):129-33, 2004.
Prevalencia y Distribución Isotípica de Anticuerpos aCL,
anti-2GPI y aPT en Pacientes con Trombosis* (n=226) (cont.)
aCL
n
%
anti-2GPI
n
%
aPT
n
%
Cualquier isotipo 57
25.2
14
6.2
31
13.7
IgG
23
10.2
5
2.2
12
5.3
IgM
27
11.9
4
1.8
19
8.4
IgA
22
9.7
7
3.1
3
1.3
*, Trombosis Venosa o Arterial
Prevalence of Val/Leu247 and Trp/Ser316 polymorphisms
of β2GPI among patients with thrombosis and controls.
Patients
(n:149)
Polymorphism
n
%
Control group
(n:160)
n
Odds Ratio
p
%
Val/Leu247
133
89.3
117
73.1
3.1 (1.6 – 6.0)
0.0003
Trp/Ser316
15
10.1
6
3.8
2.9 (1.1 – 8.6)
0.027
Palomo I, Pereira J, Alarcón A, Vásquez M, Pinochet C, Poblete F, Mendez E, Sandoval J, Vidal R, Pierangeli S. Val/Leu247
and Trp/Ser316 polymorphisms in β2 glycoprotein Ι and their association with thrombosis in unselected Chilean patients. (enviado)
Mecanismos protrombogénicos de los Ac aFL
Inhibición de anticoagulantes naturales
Sistema PC, AT, IVE
Anexina V
Inhibición del Sistema Fibrinolítico
Activación celular
• Células endoteliales
Up regulation de Moléculas de Adhesión
Activación celular
Aumento expresión FT
Aumento unión de Protrombina
• Monocitos
Aumento expresión de FT en monocitos circ.
• Plaquetas
Mecanismos protrombóticos de los Ac aFL
CE
tPA
PAI-1
TM EPCR
T PC
Plaqueta
PS APC
Plaqueta
Plasmina
PS
PT
Plg
β2GPI
Ac aFL
PT
T
Plaqueta
Va
Plaqueta
Xa
T
Anexina A5
TFPI
Xa
AT
TF
X
VIIa
CE
Forastiero R, Martinuzzo ME. Antigen Specificity and Clinical Relevance of Antiphospholipid Syndrome.
Current Rheumatology Reviews, 2005, 1,
Bárbara Fuentes
Ac Antifosfolípidos
y
Plaquetas
Unión de Ac aFL a plaquetas
• Ac aFL se unen a plaquetas en reposo (separ. por filtración en gel)
• Elución de Ac aFL desde plaquetas de pacientes con LES
• En presencia de β2GPI y PT, Ac aFL se unen a plaquetas activadas.
• Unión de Ac aFL IgG a plaquetas incub. con colágeno o cong-desc.
• Plaquetas con algún grado de activación o envejecidas
• Células apoptóticas unen β2GPI.
Podrían generan epítopos que inducen respuesta del tipo autoinm.
Interacción de los Ac aFL a las plaquetas
• Región Fab con antígenos específicos de plaquetas.
• Región Fc (de C. inmunes Ag-aFL) a FcγRII.
• Región Fab a β2GPI (dímero) unida a apo ER2.
Efecto de los Ac aFL en las plaquetas
• Mayor expresión de CD63.
• Mayor liberación de P-selectina (CD62P).
• Aumento expr. GPIIb-IIIa c/ bajas dosis de TRAP y aFL.
• Aumento de micropartículas plaquetarias.
• Aumento de síntesis in vitro de TXA2
• Aumento de la agregación plaquetaria
(con concentraciones subagregantes de ADP, trombina o colágeno).
Efecto de los Ac aFL en las plaquetas
F(ab’)2 de Ac aFL aumentan:
• Fosforilación de la p38MAPK
• Fosforilación de fosfolipasa A2
• TXB2
(cont)
Ac aFL y Plaquetas
ApoR2 ApoE2
P
P
MAPp38
Kinasa
CD63
CD62P
Activación
ADP
P2Y1
P2Y12
GPIIb-IIIa
TXA2
TXA2R