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Tema 17 : (continuación)
Animales transgénicos
•Transgénesis al azar y recombinación homóloga.
•Métodos de transferencia de genes.
•Clonación.
•Aplicaciones:
• en investigación básica,
• en producción animal y
• en sanidad humana y animal
BIBLIOGRAFÍA
LIBROS GENERALES
- Griffiths, A.J., Gelbart, W.M., Miller, J.H. y Lewontin, R.C.
Genética Moderna, 2000.
- Strachan, T., Read, A.P. Genética Molecular Humana, 1999.
- Klug, W.S. y Cummings, M.R. Conceptos de Genética, 1998.
INTERNET
-Transgénesis en mamíferos
http://www.cnb.uam.es/~transimp/
-The Jackson Laboratory
http://www.jax.org/
-Buscador general
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/
OBJETIVOS
•Explicar cómo se origina un animal
transgénico y sus tipos.
•Conocer la clonación de los animales y sus
aplicaciones.
•Conocer los logros realizados en cuanto a
la transgénesis.
•Estudiar las aplicaciones de la
biotecnología de corral.
•Explicar los mecanismos de la Terapia
Génica germinal.
OBJETIVOS
¿Qué?
¿Cómo?
¿Dónde?¿Para
¿Dónde? qué?
¿QUÉ es un animal transgénico?
“Un animal transgénico es aquel
al que se le ha introducido un
gen exógeno (transgén) en su
genoma y es capaz de
transmitirlo a su descendencia.”
TRANSGÉN
GEN
GENOMA
Al azar
TRANSGÉNESIS
Recombinación
homóloga
Al azar
TRANSGÉN
Concatémeros
Gen crucial
GEN
Zonas metiladas
Muerte
celular
¿TRANSGÉN?
CONSTRUCCIÓN GENÉTICA
(Normalmente plásmidos, ahora otros vectores también)
Gen de resistencia a antibióticos
(normalmente Ampicilina)
con promotores procariotas
El ADN que queremos insertar
¿De qué constará el ADN
que queremos insertar?
•Expresión
•Localización de la
expresión
•Regulación de la
expresión.
•cDNA, DNA
genómico.
•Promotor.
•Enhancer, elementos
cis y trans.
Transgén simple
Promotor
as1-antitripsina
b-lactoglobulina
humana
bovina
Recombinación
homóloga
TRANSGÉN
TRANSGÉN
GEN
Para poder realizar
la recombinación
homóloga son
necesarias células
en cultivo
Términos utilizados
Knock-out:
Animal creado mediante recombinación
homóloga para evitar la expresión de
un gen.
Knock-in:
Animal creado mediante recombinación
homóloga para que un gen se exprese
bajo el promotor que deseemos.
¿De qué consta una construcción
para la recombinación homológa?
-Resistencia a antibióticos/mismo gen:
- Kanamicina (procariotas)
- Neomicina (eucariotas)
-Opcional:
- Gen marcador
- Gen de expresión.
Knock-in
Knock-out
-Zona homólogas al gen de interés.
Recombinación homóloga
GENOMA DE LAS CÉLULAS EN CULTIVO
p
DNA
Promotor
M
R
Gen
CONSTRUCCIÓN marcador
GENÉTICA
Resistencia
Recombinación homóloga
GENOMA DE LAS CÉLULAS EN CULTIVO
p
Promotor
M
R
Gen
marcador
Resistencia
DNA
CONSTRUCCIÓN
GENÉTICA
Recombinación homóloga
GENOMA DE LAS CÉLULAS EN CULTIVO
p
Promotor
M
R
Gen
marcador
Resistencia
DNA
CONSTRUCCIÓN
GENÉTICA
pOTX1- lacZ
5’ gen
lacZ
Neo
polyA SV40
3’ gen
TRANSGÉNESIS
AL AZAR
TRANSGÉNESIS POR
RECOMBINACIÓN
HOMÓLOGA
Directamente en el embrión
En cultivos celulares
En cultivos celulares
CULTIVOS
CELULARES
Las células modificadas
genéticamente deberán ser
introducidas posteriormente en
el embrión u óvulo
MODOS DE
INTRODUCCIÓN
DEL TRANSGEN
IN VIVO
DIRECTAMENTE EN EMBRIÓN.
REALIZABLES EN CULTIVOS CELULARES
IN VITRO
SÓLO EN CULTIVOS CELULARES
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
•INDIRECTOS
IN VITRO
SÓLO EN CULTIVOS CELULARES
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
•INDIRECTOS
IN VITRO
SÓLO EN CULTIVOS CELULARES
ESPERMATOZOIDES
Esponda, P.
C.B.I. y C.S.I.C
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
•INDIRECTOS
IN VITRO
SÓLO EN CULTIVOS CELULARES
BIOLÍSTICA
• Partículas de tungsteno u oro
• Descarga con helio.
Características:
– Capacidad de introducción limitada.
HA SIDO MUY
UTILIZADA EN PLANTAS
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
•INDIRECTOS
IN VITRO
SÓLO EN CULTIVOS CELULARES
MICROINYECCIÓN
• Microinyección en el pronúcleo
masculino.
• Microinyección en el citoplasma
del huevo.
Añaden protección al DNA (polilisinas, etc.)
Micromanipulador
Micromanipulador
Micromanipulador
Pronúcleo masculino
En animales
domésticos (sobre
todo en la
especie porcina)
es necesario
centrifugar el huevo
debido al vitelo.
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
- Retrovirus
•INDIRECTOS
- Liposomas
- Elementos P
IN VITRO
SÓLO EN CULTIVOS CELULARES
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
- Retrovirus
•INDIRECTOS
- Liposomas
- Elementos P
IN VITRO
SÓLO EN CULTIVOS CELULARES
VECTORES RETROVIRALES
•
•
•
•
Una cadena de RNA.
Protegidos por una cápside.
Talla de 80 a 130 nm.
Tres genes importantes:
–
–
–
–
gag: proteínas de la cápside
pol: transcriptasa inversa e integrasa
Env: proteínas de envoltura y reconocimiento de receptor
Zonas LTR: Long Terminal Repeat
Construcción Retroviral
MMLV: Moloney Murine Leukemia Virus
Producción de
vectores retrovirales
CÉLULAS EMPAQUETADORAS
(helper free)
RNA
Producción de
vectores retrovirales
CÉLULAS EMPAQUETADORAS
(helper free)
Retrovirus Recombinantes
Características de
vectores retrovirales
VENTAJAS
• Sistema muy bien estudiado.
INCONVENIENTES
• Posible poder patógeno.
• No se inserta tan homogéneamente
como la microinyección.
• Tamaño del inserto 8 Kb.
¿Qué especie animal?
LOS ANIMALES QUE TIENEN EL
EMBRIÓN PROTEGIDO POR UNA
CÁSCARA.
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
- Retrovirus
•INDIRECTOS
- Liposomas
- Elementos P
IN VITRO
SÓLO EN CULTIVOS CELULARES
LIPOSOMAS
• CATIÓNICOS
– Su carga positiva reacciona con la negativa
del DNA formando un complejo.
• pH SENSIBLE O ANIÓNICO
– Mediante una desestabilización por bajo pH el
DNA entra en “núcleo del liposoma”.
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
- Retrovirus
•INDIRECTOS
- Liposomas
- Elementos P
IN VITRO
SÓLO EN CULTIVOS CELULARES
TRANSGÉNESIS DE
DROSOPHILA MEDIADO
POR ELEMENTOS P
•La microinyección clásica no funciona.
•Dos plásmidos:
• Contiene el transgén.
• Contiene el trasposón con las secuencias
repetidas que ayuda a la inserción (Elementos P)
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
- Retrovirus
•INDIRECTOS
- Liposomas
- Elementos P
IN VITRO
SÓLO EN CULTIVOS CELULARES
MÉTODOS “IN VITRO”
(Cultivos celulares)
Las células modificadas
genéticamente deberán ser
introducidas posteriormente
en el embrión u óvulo
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
- Retrovirus
•INDIRECTOS
IN VITRO
•QUÍMICOS
•FÍSICOS
- Liposomas
- Elementos P
Precipitación con
fosfato de calcio
FOSFATO DE CALCIO
• Coprecipitación de DNA y calcio (presencia
de fosfato).
• Introducción por endocitosis.
• Eficiencia de transfección 1% (max. 10%)
Características:
- Pequeña expresión del transgén.
- Introducción de varias copias.
- No hay toxicidad para las células.
IN VIVO
•DIRECTOS
- Espermatozoides
- Biolística
- Microinyección
- Retrovirus
•INDIRECTOS
IN VITRO
- Liposomas
- Elementos P
•QUÍMICOS
Precipitación con
fosfato de calcio
•FÍSICOS
Electroporación
ELECTROPORACIÓN
• Introducción del transgén por poros
nucleares tras un choque eléctrico.
• Factores de eficacia: naturaleza, distancia
entre electrodos, buffer y CÉLULAS.
Características:
- Mucha muerte celular
- TENDENCIA A INTRODUCCIÓN DE UNA
SOLA COPIA. ELECCIÓN.
¿Cómo consigo un
animal adulto a
partir de células
en cultivo?
1
Células indiferenciadas
que sean capaces de colonizar
un embrión y formar
parte de su organismo,
incluidos los gametos.
DOS OPCIONES
2
Células transformadas
en indiferenciadas:
CLONACIÓN
Células ES o indiferenciadas
SÓLO AISLADAS EN RATÓN
Color negro
Color marrón
Método de agregación de mórulas-células
Color negro
Color marrón
Knock-out
Knock-in
NUMEROSOS INTENTOS PERO......
Las células ES no se
han aislado en otras
especies animales
(Experiencias realizadas
en peces)
OTROS CULTIVOS CELULARES:
Fibroblastos, Glándula
mamaria, etc.
Clonación de células
somáticas
DOLLY
DOLLY
G0 :
- Baja la transcripción.
- Baja la traducción.
- Condensación de la cromatina
PRODUCCIÓN DE:
Millie,
Christa,
Alexis,
Carrel y
Dotcom
245
72
5
Polejaeva, I.A. y cols. (2000)
Nature, 407, 86-90
Recombinación
homóloga
Células
“in vitro”
Clonación
IN VIVO
Al azar
Microinyección
IN VITRO
MICROINYECCIÓN
Ratón
Conejo Porcino Ovino
Bovino
Eficacia
60%
50%
40%
40%
20%
Animales
10
15
20
40
80
Tiempo
(meses)
5
8
22
29
51
(Montoliu, 1999)
IN VIVO
Al azar
Microinyección
IN VITRO
Recombinación
homóloga
Electroporación
HastaEn
ahora
sólo enCLONACIÓN
ratón - células ES
un futuro:
Sabemos qué es...
Sabemos cómo se hace...
APLICACIONES
PRIMER RATÓN
TRANSGÉNICO
Nature, 16, 611-615
PALMITER y cols. (1982)
Promotor
Metalotionina I
Gen de la Hormona
del Crecimiento
Medline: “transgenic animals”
3.982 publicaciones (26-9-2000)
1. Estudios en investigación básica
- Funcionamiento de genes
- Funcionamiento promotores
2. Producción Animal
- Incremento de productividad
Cuantitativo
Cualitativo
- “Biotecnología de corral”
3. Sanidad
- Animales modelos de enfermedades
- Xenotrasplantes
- Terapia Génica Germinal.
1. Estudios en investigación básica
- Funcionamiento de genes
- Funcionamiento promotores
2. Producción Animal
- Incremento de productividad
Cuantitativo
Cualitativo
- “Biotecnología de corral”
3. Sanidad
- Animales modelos de enfermedades
- Xenotrasplantes
- Terapia Génica Germinal.
1. Estudios en investigación básica.
Funcionamiento de genes
- Muchos estudios realizados.
- Más interesante la recombinación homóloga
- Animal de elección es el ratón (menor coste
en tiempo y en dinero)
Ejemplo:
Un animal Knock-out para una determinada enzima,
que nos permita conocer la función de la misma.
Un animal knock-in con marcadores para conocer
la expresión durante la gestación.
1. Estudios en investigación básica.
Estudio de promotores, enhancer o
cualquier elemento regulador.
- Muchos estudios realizados.
- Transgénicos clásicos fusionados a un marcador
- Animal de elección es el ratón (menor coste
en tiempo y en dinero)
Ejemplo:
Un transgénico con una zona del promotor de
una enzima fusionado a la enzima b-galactosidasa
1. Estudios en investigación básica
- Funcionamiento de genes
- Funcionamiento promotores
2. Producción Animal
- Incremento de productividad
Cuantitativo
Cualitativo
- “Biotecnología de corral”
3. Sanidad
- Animales modelos de enfermedades
- Xenotrasplantes
- Terapia Génica Germinal.
2. Producción Animal
Incremento de productividad-Cuantitativo
- Muchos intentos realizados.
- Transgénicos clásicos hasta ahora ya que no
existían células indiferenciadas.
- Animales que se venda el producto.
Ejemplo (ya creado):
Un Salmón (Aqua Bounty Farms):
- Promotor: AFP (proteína anticongelación)
- cDNA: Hormona del crecimiento.
2. Producción Animal
Incremento de productividad-Cualitativo
- Transgénicos clásicos hasta ahora ya que no
existían células indiferenciadas.
- Animales que se venda el producto.
Ejemplo (ya creado ???):
Una vaca por clonación (PPL Therapeutics)
- Eliminar la a-lactoalbúmina para los
enfermos de fenilcetonuria.
2. Producción Animal
Biotecnología de corral
- Transgénicos clásicos hasta ahora ya que no
existían células indiferenciadas en los animales
que nos interesan.
- Producción de proteínas de interés en sanidad.
Ejemplo (ya creado):
Tracy
(Roslin Institute - PPL Therapeutics)
TRACY
Promotor
as1-antitripsina
b-lactoglobulina
humana
ovina
Primeros ensayos en ratón:
4.3 Kb Promotor
WAP de ratón
12.5 gr./litro
Volumen/año
Coneja
Oveja
Vaca
8 litros
400 litros
10.000 l.
6.6 Kb de AAT-humano
cDNA
Obtienen microlitros
de leche
gr./año Producción vital
0.04 Kg.
2 kg.
50 kg
1 Kg.
100 kg.
toneladas
Roslin Institute-PPL Therapeutics
(lo que sabemos......)
as1-antitripsina
Fibrinógeno
Factor VII y Proteína C
Factor XI
BSSL (lipasa)
Anticuerpos humanizados
POLLY: Primer clon transgénico
Se obtuvieron 4 clones de
fibroblastos embrionarios
transfectados con:
b-lactoglobulina + Factor XI de coagulación
POLLY
MOLLY
2 no producían
la proteína
1. Estudios en investigación básica
- Funcionamiento de genes
- Funcionamiento promotores
2. Producción Animal
- Incremento de productividad
Cuantitativo
Cualitativo
- “Biotecnología de corral”
3. Sanidad
- Animales modelos de enfermedades
- Xenotrasplantes
- Terapia Génica Germinal.
3. Sanidad
Modelos animales de enfermedades
- Enfermedades genéticas: Knock-out.
- Otras enfermedades: transgénicos clásicos
- La mayoría de los estudios en ratón, siempre
que sea posible.
Ejemplo (ya creado !!!!):
En el Jackson Laboratory/Mouse Models Listing
http://jaxmice.jax.org/jaxmicedb/html/models.shtml
Mouse Models for Human Disease
3. Sanidad
Xenotransplantes
Candidata la especie porcina por...
- Similitudes fisiógicas con humanos
- Alta disponibilidad
- Fácil cruzamiento.
Problema:
Combinación discordante que produce rechazo
3. Sanidad
Xenotransplantes
Transgénicos porcinos con expresión de
D.A.F (expresión en corazón):
- Proteína que inhibe la cascada del complemento
Pruebas esperanzadoras transplantando el
corazón a primates.
TERAPIA GÉNICA GERMINAL
EN ANIMALES
Transgénesis
?
Enfermedades monogénicas candidatas.
(Tema 17, continuación)
¿QUÉ es la Terapia génica?
“Proceso por el cual un nuevo
gen es introducido en células de
un individuo para producir un
efecto terapéutico.”
DNA como medicamento
o Curar con genes
¿QUÉ es Gene Marking?
“Proceso que utiliza técnicas
comunes a la Terapia Génica
pero sin buscar un efecto
terapéutico.”
Ej. Seguir la pista a determinadas
células en el organismo.
OBJETIVOS
•Explicar las formas como puede actuarse
en el genoma para conseguir un efecto
terapéutico.
•Conocer los vectores más utilizados (los
autobuses que llevan los genes).
•Conocer los logros realizados en cuanto a
la terapia génica en humanos.
ENFERMEDADES
CANDIDATAS A
TERAPIA GÉNICA
“Añadir función”
Terapia Génica
“Suprimir función”
“Añadir función”
Terapia Génica
Añadir función
• Sustitución del gen deseado.
• Reparación de una mutación.
• Añadir un gen
Terapia Génica
“Suprimir función”
Suprimir función
• Muerte celular (suicidio de
las células)
• Oligonucleótidos antisentido
(expresión).
• Ribozimas (Ruptura).
OLIGONUCLEÓTIDOS ANTISENTIDO
GENES UTILIZADOS
MODOS DE
INTRODUCCIÓN
“In vivo”
Terapia Génica
“Ex vivo”
IN VIVO/EX VIVO
DIRECTAMENTE EN EL INDIVIDUO ADULTO
REALIZABLES EN CULTIVOS CELULARES
EX VIVO
SOLO EN CULTIVOS CELULARES
DNA DESNUDO
• Inyección intramuscular de la molécula de
DNA.
• Músculo , Piel, Mucosas y Timo.
• Introducción por “nuclear pore complex”.
-
– Características
Talla ILIMITADA.
Bajo porcentaje de transfección
No hay integración en el genoma.
No hay amplificación del DNA.
¿QUÉ ES UN VECTOR?
• “SON SISTEMAS QUE AYUDAN
EN EL PROCESO DE
TRANSFERENCIA DE UN GEN
EXÓGENO A LA CÉLULA,
FACILITANDO LA ENTREGA Y
BIODISPONIBILIDAD
INTRACELULAR DEL MISMO DE
MODO QUE PUEDA FUNCIONAR
CORRECTAMENTE”
VECTOR IDEAL
•
•
•
•
•
Especificidad de órgano o tejido.
Protección del DNA.
Elevada disponibilidad.
Expresión eficaz.
No inmunógeno/sin repuestas
inflamatorias.
• Seguro paciente/entorno.
IN VIVO/EX VIVO
•DIRECTOS
DNA desnudo
- Retrovirus
•INDIRECTOS
-Adenovirus
- Adenovirus asociados
- Liposomas
EX VIVO
- Fragmentos específicos
•QUIMICOS
Precipitación con
fosfato de calcio
•FISICOS
Electroporación
VECTORES RETROVIRALES
•
•
•
•
Una cadena de RNA.
Protegidos por una cápside.
Talla de 80 a 130 nm.
Tres genes importantes:
–
–
–
–
gag: proteínas de la cápside
pol: transcriptasa inversa e integrasa
Env: proteínas de envoltura y reconocimiento de receptor
Zonas LTR: Long Terminal Repeat
VENTAJAS DE VECTORES
RETROVIRALES
• Alta eficacia de transducción.
• Tamaño del inserto 8Kb.
• Alta expresión una vez introducido en el
genoma.
• Sistema muy bien estudiado.
• Proteínas del vector no se expresan en el
huésped.
INCONVENIENTES DE LOS
RETROVIRUS
•
•
•
•
Necesita células en división.
Se consiguen títulos muy bajos de virus.
Integración al azar en el genoma.
Transducción “in vivo” poco efectiva.
IN VIVO/EX VIVO
•DIRECTOS
DNA desnudo
- Retrovirus
•INDIRECTOS
-Adenovirus
- Adenovirus asociados
- Liposomas
EX VIVO
- Fragmentos específicos
•QUIMICOS
Precipitación con
fosfato de calcio
•FISICOS
Electroporación
VECTORES ADENOVIRALES
• DNA lineal de cadena doble.
• Más complejos que los retrovirus.
• Tres genes importantes:
–
–
–
–
E1:
E2:
E3:
E4:
rescata células de la quiescencia.
proteínas relacionadas con la replicación del DNA.
defensa ante el sistema inmunitario.
regulación de la transcripción.
VIRUS RECOMBINANTES E1 Y E3 ELIMINADOS
VECTORES ADENOVIRALES
VENTAJAS
• Eficaces a la hora de transferir el gen
episomal a una gran cantidad de células.
• Fácil producción en el laboratorio.
INCONVENIENTES
• Gran respuesta inmunitaria.
• Dificultad para repetir la inyección de
virus.
IN VIVO/EX VIVO
•DIRECTOS
DNA desnudo
- Retrovirus
•INDIRECTOS
-Adenovirus
- Adenovirus asociados
- Liposomas
EX VIVO
- Fragmentos específicos
•QUIMICOS
Precipitación con
fosfato de calcio
•FISICOS
Electroporación
VECT. ADENOASOCIADOS
• DNA lineal de cadena doble.
• Se insertan en el genoma.
• Dos genes :
– rep: replicación e integración del virus.
– cap: tres proteínas estructurales víricas.
– TR: repeticiones terminales-145 nucleótidos.
VIRUS RECOMBINANTES SOLO CONTIENEN TR
Células que poseen los genes rep y cap.
VECT. ADENOASOCIADOS
VENTAJAS
• Expresión a largo plazo.
• No hay respuesta inmunitaria.
INCONVENIENTES
• Talla limitada del gen a introducir (aprox
5 Kb).
• Dificultad para obtener grandes
cantidades.
http://140.116.60.1/mdlai/Handout/cancer-gene-therapy/sld014.htm
IN VIVO/EX VIVO
•DIRECTOS
DNA desnudo
- Retrovirus
•INDIRECTOS
-Adenovirus
- Adenovirus asociados
- Liposomas
EX VIVO
- Fragmentos específicos
•QUIMICOS
Precipitación con
fosfato de calcio
•FISICOS
Electroporación
LIPOSOMAS
• CATIÓNICOS
– Su carga positiva reacciona con la negativa
del DNA formando un complejo.
• pH SENSIBLE O ANIÓNICO
– Mediante una desestabilización por bajo pH el
DNA entra en “núcleo del liposoma”.
POSIBILIDAD DE UNIR RECEPTORES
ESPECÍFICOS
LIPOSOMAS
• positivo
– Protegen al DNA
– No hay limite de tamaño
– Enviar a lugares específicos.
• negativo
–
–
–
–
Baja eficacia
Expresión transitoria.
Toxicidad celular
Inhibición por componentes séricos.
IN VIVO/EX VIVO
•DIRECTOS
DNA desnudo
- Retrovirus
•INDIRECTOS
-Adenovirus
- Adenovirus asociados
- Liposomas
EX VIVO
- Fragmentos específicos
•QUIMICOS
Precipitación con
fosfato de calcio
•FISICOS
Electroporación
MÉTODOS “EX VIVO”
(Cultivos celulares)
Las células modificadas
genéticamente deberán ser
introducidas posteriormente
en el enfermo
MECANISMO “EX VIVO”
MODO DE INTRODUCCIÓN
Año 2001
VIAS DE ADMINISTRACIÓN
Año 2001
Algunas...
• Enfermedades monogénicas.
• Cancer.
• Enfermedades infecciosas o
parasitarias.
• Enfermedades
neurodegenerativas
Enfermedades Monogénicas
- Conocidas por la mayoría como las
únicas candidatas para el
tratamiento.
- Aporte de la proteína/enzima
deficitaria.
- Posibilidad de realizar terapia
génica germinal..
Algunas...
Deficiencia Inmune Severa Combinada
Fibrosis Quística
Hemofilia
Hipercolesterolemia familiar
Enfermedades lisosomales (Gaucher,
etc.)
Deficiencia Inmune Severa
Combinada
- Deficiencia en la enzima Adenosin
Desaminasa.
- 1/100.000 (25% de mortalidad).
- Fragilidad de los linfocitos T..
INMUNOSUPRESION
David "niño burbuja",
(Fuente: M.R. Cummings. Herencia humana (3ª ed.), Interamericana (1995)
Tratamientos
- Aportación de la enzima
recombinante:
ADA
PEG-ADA
- Transplante de médula osea.
Deficiencia Inmune Severa
Combinada
- 1990. Dr Blaese (EEUU)
Dr. Bordignon (Italia)
-1995 Demuestran la eficacia del
tratamiento
Ashanti de Silva tratada a los cuatro años de edad.
(Fuentes: W.F. Anderson, Scient. Amer., 273(3):96-98(1995).
Fibrosis Quística
- Deficiencia en el CTFR (Cystic
factor transmembrane receptor).
- 1/2.800 (Muerte a los 29).
- No hay tratamiento.
Problemas para clonar el CTFR
2.-Tumores
-
-
Muerte celular
Genes supresores de tumores.
Producción de linfoquinas
Inmuno Terapia con antígenos MHC
Los más tratados:
Melanoma.
Leucemias
Glioblastoma
Tumores de pulmón, hígado, etc.
3.- INFECCIOSAS Y/O
PARASITARIAS
-
- Estimular el sistema inmunitario.
- Vacunas de DNA desnudo con antígenos.
- Linfocitos recombinantes para los
anticuerpos que actuan contra el virus.
Algunos ejemplos:
SIDA
Vacunas de DNA desnudo en animales.
4.- Enfermedades
neurodegenerativas
-
- Inhibición de apoptosis neuronal.
- Producción de L-dopa o factores
neurotróficos en cerebro.
Algunos ejemplos:
Enfermedades de la motoneurona
(E.L.A. Y E.M.)
Parkinson y Alzheimer.
ENFERMEDADES TRATADAS
¿FASES?
¿Dónde se están tratando?
CIFRAS POR PAISES
CIFRAS POR CONTINENTES
(Tema 17, continuación)
(Tema 17, continuación)
¿Qué son las células
madre?
¿QUÉ son las células madre?
“Células de diverso origen que
tienen la capacidad de
transformarse en cualquier tipo
celular.”
1
Células mortales o diferenciadas
TIPOS CELULARES
2
Células inmortales
o indiferenciadas
1. Células E.C.
(Embrionic Carcinome)
2. Células E.S.
(Embrionic Stem)
3. Células E.G.
(Embrionic Germinal)
4. Células madre adultas.
Células E.S-Diferencia
entre ratón y humana.
MURINAS
HUMANAS
•LIF necesario y
suficiente
•LIF sin influencia
•FGF irrelevante
•Feeder opcional
•Alta clonabilidad
•FGF necesario.
•Feeder es necesario.
•Baja supervencia en
células aisladas.
Células madre
embrionarias o adultas
Embrionarias
Adultas
•Expansión ilimit.
•Expan. desconocida
•No envejecen
•No se conoce
•Pluripotenciales
•Pluripont. poco clara.
•Corrección
genética posible
•Poco claro.