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ESTUDIO MOLECULAR EN
PROCESOS DE RIESGO
TROMBOTICO
Consorcio Hospital General Universitario de Valencia
Amparo Benlloch Salcedo
Mercedes Egea Rico
Rosa Collado Nieto
David Ivars Santacreu
Maria Ortuño Peñalver
Juana Serrallé Rodríguez
Francisca Romero Lucas
INTRODUCCIÓN
□ La trombofilia es una predisposición para padecer trombosis.
□ En cerca del 40 % de los casos hay una causa hereditaria que
por sí sola puede no desembocar en un cuadro
tromboembólico.
□ Sin embargo, cuando hay otros factores de riesgo
combinados, como una inmovilización prolongada, una
intervención quirúrgica, un embarazo, el uso de
anticonceptivos orales o una terapia hormonal sustitutiva,
existe un efecto aditivo que puede desencadenar un
proceso trombótico o tromboembólico.
□ La trombofilia se ha asociado a abortos de repetición, por
trombosis de la microvasculatura uteroplacentaria e
hipoperfusión, a infertilidad y a diversas complicaciones
obstétricas como preclampsia, desprendimiento prematuro
de placenta o escaso desarrollo intrauterino del feto.
INTRODUCCIÓN
□ La mutación del Factor II (FII) o Protrombina
(20210G>A) se asocia a un incremento de
los niveles plasmáticos de Protrombina.
□ Por su parte, la mutación del Factor V (FV)
Leiden (1691G>A) la hace resistente a la
acción inhibidora de la Proteína C
Activada.
□ Las mutaciones FII (20210G>A) y FV Leiden
están presentes en el 2% y 5%
respectivamente de la población general.
INTRODUCCIÓN
Gen
FV
Gen FII
OBJETIVOS (I)
□ Analizar incidencia de las mutaciones
del FII y FVL en diferentes grupos de
riesgo
Procesos
trombóticos
Estudios
Familiares
Procesos
ginecológicos
Tratamiento
anticonceptivo
SMP
OBJETIVOS (II)
□ Comparación entre dos sistemas de
análisis en nuestra unidad
Tiras reactivas
Xpert HemosIL
Factor II & Factor V
MATERIAL Y METODO
□ Periodo comprendido entre:
Marzo 2007
Mayo 2013
MATERIAL Y METODO
□ Hasta Diciembre de 2011
Tiras reactivas
Tiras reactivas
□ A partir de sangre
periférica
Tiras reactivas
□ Obtención del ADN
Tiras reactivas
□ Amplificación del gen (PCR)
Tiras reactivas
□ Hibridación mediante tiras de Nitrocelulosa
Tiras reactivas
□ Detección de las
mutaciones en las
tiras
Tira del
paciente
Decoder
MATERIAL Y METODO
□ Desde 2011 a 2013
Xpert HemosIL
Factor II & Factor V
Xpert HemosIL
Factor II & Factor V
□ Sistema automatizado que integra:
□ Purificación de la muestra.
□ Ampliación de los ácidos nucleicos
□ Detección de la secuencia objetivo
en sangre total, utilizando la reacción
en cadena de la polimerasa (PCR) en
tiempo real.
Xpert HemosIL
Factor II & Factor V
Xpert HemosIL
Factor II & Factor V
Xpert HemosIL
Factor II & Factor V
Xpert HemosIL
Factor II & Factor V
Xpert HemosIL
Factor II & Factor V
Xpert HemosIL
Factor II & Factor V
MATERIAL Y METODO
□ Población estudiada: 740 pacientes
474; 64%
Hombres
Mujeres
266; 36%
MATERIAL Y METODO
21; 3%
266; 36%
Tiras reactivas
Sistema automatizado
Ambos
453; 61%
□ Durante el año 2010,
se realizaron
determinaciones en
paralelo.
CONFIRMATORIO
MATERIAL Y METODO
Procesos trombóticos
Estudios familiares
Procesos ginecológicos
Tratamientos anticonceptivos
442
110
70
4
Síndromes mieloproliferativos
114
60%
15%
Procesos trombóticos
Estudios familiares
Procesos ginecológicos
9%
0,5%
15,5%
Tratamientos anticonceptivos
Síndromes mieloproliferativos
RESULTADOS
□ Gen del factor II
655; 89%
Ausencia de mutación
Heterocigoto
Homocigoto
1; 0%
84; 11%
RESULTADOS
□ Gen del factor V Leiden
663; 90%
Ausencia de mutación
Heterocigoto
Homocigoto
2; 0%
75; 10%
RESULTADOS
□ Alteración en ambos genes
Casos: 3
0,41%
RESULTADOS
□ Mutacion del Gen del factor II, según
grupos de riesgo
Ausencia de mutación
Mutación
9,50%
29,09%
2,86%
0,00%
7,89%
100,00%
80,00%
60,00%
40,00%
20,00%
0,00%
Procesos
trombóticos
Estudios
familiares
Procesos
Tratamientos
ginecológicosanticonceptivos
SMP
RESULTADOS
□ Mutacion del Gen del factor V Leiden,
según grupos de riesgo
Ausencia de mutación
Mutación
9,95%
22,73%
8,57%
0,00%
1,75%
100,00%
80,00%
60,00%
40,00%
20,00%
0,00%
Procesos
trombóticos
Estudios
familiares
Procesos
Tratamientos
ginecológicosanticonceptivos
SMP
RESULTADOS
□ Repeticiones
Tiras reactivas
Xpert HemosIL
Factor II & Factor V
11
1
Fallo en la tira
Fallo en el instrumento
CONCLUSIONES
□ La incidencia de mutaciones del FII
(11,49%) y del FVL (10,41%) durante el
periodo estudiado en nuestro centro
es similar al publicado en la literatura.
□ En el grupo de tratamiento con
anticoncepción no se encontraron
mutaciones en ninguno de los dos
genes, lo cual cuestiona la utilidad
del análisis en este grupo.
CONCLUSIONES
□ El sistema automatizado es la técnica
de elección para el estudio de
mutaciones relacionadas con la
trombofilia ya que presenta una serie
de ventajas frente al sistema de
detección por tiras de nitrocelulosa,
entre las que destaca:
CONCLUSIONES
□
□
□
□
□
Mayor sensibilidad
Mayor trazabilidad de la técnica
Menor manipulación técnica.
Menor riesgo de contaminación
Rapidez
Gracias