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Gómez Nava Paola
Flores Corona Luis Ernesto
Morales Torres Gabriel Roberto
Alejandra
Azucena
Pozos Tovar

Es unidireccional, es decir, tiene una determinada polaridad,
existiendo células donadoras y células receptoras.

La transferencia del material genético de una célula a otra no
suele ser total, sino parcial.

Parte del material genético, una vez introducido en la célula
receptora, sufre inmediatamente un fenómeno de recombinación
con el material genético de la célula receptora. El resto del
material de la donadora o no se replica, o se ve destruido
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
Proceso de transferencia genética por el cual el DNA
denudo es incorporado en una célula receptora y lleva a
cabo un cambio genético.
Esta nueva información genética muchas veces provee al
organismo de una nueva característica que se puede
identificar luego de ocurrida la transformación
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
El proceso de transformación fue demostrado en 1928 por Frederick
Griffith, cuando estaba en busca de una vacuna contra la neumonía
bacteriana.
En 1944, se demostró que este principio transformante era de índole
genética y llamaron a la introducción e incorporación de ADN en
bacterias, transformación

En la naturaleza algunas bacterias, quizá después de la
muerte y la lisis celular, liberan su DNA en el ambiente.

Luego otras bacterias pueden encontrar el DNA y, según la
especie particular y las condiciones de crecimiento, captar
fragmentos de DNA e incorporarlos a sus propios
cromosomas por recombinación.
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Una célula receptora con esta nueva combinación de genes
es un tipo de hibrido o célula recombinante y todos los
descendientes de esta serán idénticos a ella.
Ingeniería genética
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Parte de la biotecnología que se basa en la
manipulación genética de organismos con un
propósito predeterminado, aprovechable por el
hombre:
Se trata de aislar el gen que produce la sustancia e
introducirlo en otro ser vivo. Lo que se consigue es
modificar las características hereditarias de un
organismo.
De esta forma se obtiene a los organismos
transgénicos.
1. Para la producción de un organismo genéticamente modificado se
tiene que producir o construir un transgene, es decir el gene de interés
más una parte externa de DNA que controle correctamente la función
del gene en el nuevo huésped (entre el promotor y el terminador).
2. Utilizar una molécula de ADN que servirá de “vehículo” del fragmento
de interés, denominado VECTOR DE CLONACIÓN
 Los vectores de clonación están diseñados de forma tal que permiten
la recombinación de ADN foráneo en un sitio de restricción del vector,
sin afectar su replicación. A fin de seleccionar las células que
incorporaron el vector, el mismo lleva genes marcadores, por ejemplo
un gen de resistencia a antibióticos.
Pueden ser vectores de
clonación:
Plásmidos
Bacteriófagos
Cósmidos
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Los de interés en esta práctica son los plásmidos,
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Para ser utilizado como vector de clonación, un plásmido debe poseer al
menos tres características:
1.
Debe tener su propio origen de replicación y por tanto la capacidad de
replicación autónoma independiente del genoma del hospedador.
2.
Debe tener sitios de clonación múltiple que permitan la apertura del DNA con
enzimas de restricción y hace posible la clonación de insertos de DNA en la
forma y orientación determinada.
3.
Debe poseer marcadores genéticos seleccionables que permitan aislar las
células hospedadores que contengan el vector
Vector usado para introducir el transgene que se observará en está sección del Manual
INSERTO
O GEN DE
INTERÉS
Una vez que se le ha insertado el gel de interés al vector de clonación, se
denomina VECTOR RECOMBINANTE
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Células competentes de E.coli:
Cuando una célula receptora se halla en un estado
fisiológico en el cual puede captar el DNA donante, se dice
que es competente. La competencia es el resultado de
alteraciones de la membrana celular que la tornan
permeable a las moléculas de DNA grandes.
El tratamiento simple para aumentar su permeabilidad
membranal como: aumento en la temperatura, iones que
cambian la carga eléctrica de la membrana (Ca2+), etc.,
pueden volver las células competentes.
Plásmido PET-TEM-1 (vector recombinante pET-TEM-1ompaβ-lactamasa).
Tiene insertado el gen de la β-lactamasa (transgene) con un
pedazo del gen que codifica para la secuencia señal de una
porina (ompA),
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Método
de transformación de la E. coli con el plásmido PETTEM1 choque térmico, y su resistencia a Kanamicina se
utiliza como indicador de que las células son transformantes,
es decir les dará esa propiedad.
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Proporciona todos los
requerimientos nutricionales a
las cepas de Escherichia coli
recombinante.
Ingredientes: peptona
(nitrógeno y carbono), las
vitaminas (vitaminas B) y
ciertos oligoelementos. Los
iones de sodio para el
transporte y el equilibrio
osmótico son proporcionados
por el cloruro de sodio
Adicionado de Kanamicina.
Este se utilizara para
comprobar la transformación,
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

Conocer el fundamento para transformar células
bacterianas.
Realizar la técnica de transformación bacteriana.
Aprender a identificar células transformantes mediante
su fenotipo.
Conocer la definición de organismo transgénico.
Conocer las aplicaciones de la transformación
bacteriana: beneficios y riesgos.
•Añadir 1 a 5 µL del
plásmido en el tubo de las
células de E. coli
competentes
Esparcir
Mezclar POR
INVERSIÓN
•Dejar en hielo por 30
minutos
•Calentar a 42ºC durante
45 segundos (NO AGITAR)
PARA QUE SE RECUPEREN SU
PERMEABILIDAD CELULAR
Agregar
•Centrifugación para
obtener un concentrado
de células. Resuspender
el paquete celular en 100
µL de medio SOC.
•450 µL de medio SOC e
incubar por 60 minutos a
37ºC con agitación 225 a
250rpm
Después
concentrar
•100 µL de bacterias
TRANSFORMANTES,
Incubar 37C por
24 h en Agar -LBKanamicina
• 100 µL de
células
competentes
control
negativo
REPORTAR
• Observar
crecimiento y
guardar la caja a
4ºC.
• Calcular la
eficiencia de
transformación.

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Las células que recibieron un tratamiento apropiado para
llevar a cabo la introducción del material genético se les
denomina células competentes.
Las células transformantes son las células
competentes que ya recibieron el material genético, y las
cuales se les trato para restaurar su permeabilidad
membranal y se encuentran en condiciones óptimas de
crecimiento.

EVALUACIÓN DEL FENOTIPO. Se utilizara como indicador la
resistencia a Kanamicina
Las células que crecerán en el medio Agar -LB-Kanamicina,
serán las células transformantes.

Tortora J. Gerard; Introducción a la microbiología. 9nva
edición; Editorial Médica Panamericana; 2007;pp 240-244